【团体标准】 家畜中尿液总氮的测定 凯氏定氮法

ICS 65.120 B 46 团体标准 T/NAIA 044—2021 家畜中尿液总氮的测定 凯氏定氮法 Determination of total nitrogen in urine of livestock - Kjeldahl method 2021-05-30 发布 2021-06-01 实施 宁夏化学分析测试协会 发布 前言 本文件的编写格式符合 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定。 本文件不涉及任何专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏大学、宁夏饲料工程技术研究中心、宁夏动物疾病预防控制中心、宁夏兽药饲料监察所、宁夏农林科学院动物科学研究所、宁夏昊标检测服务研究院、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人：辛国省、卜姣姣、燕独、刘辉、杨仪、丁园、高巧仙、张娟、李知新、谢荣国、梁小军、王京、张小飞。 本文件为首次发布。 1 范围 本文件规定了凯氏定氮法测定家畜尿液总氮的方法。本文件适用于家畜尿液总氮的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 总氮 total nitrogen (TN) 指在本文件规定的条件下，能测定的样品中溶解态氮及悬浮物中氮的总和，包括亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、无机铵盐、溶解态氨及大部分有机含氮化合物中的氮。 4 原理 尿液在催化剂作用下，经过硫酸消解，含氮化合物转化成硫酸铵；加碱蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后再用盐酸标准溶液滴定，计算出氮含量。 5 试剂与材料 除另有说明外，仅使用分析纯试剂，蒸馏及稀释用水为蒸馏水。 5.1 试剂 5.1.1 氢氧化钠（NaOH）。 5.1.2 硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）。 5.1.3 无水硫酸钠（Na₂SO₄）。 5.1.4 盐酸（HCl）。 5.1.5 甲基红指示剂（C₁₅H₁₅N₃O₂）。 5.1.6 溴甲酚绿指示剂（C₂₁H₁₄Br₄O₅S）。 5.1.7 无水乙醇（C₂H₅OH）。 5.1.8 硼酸（H₃BO₃）。 5.1.9 硫酸（H₂SO₄）。 5.2 试剂配置 5.2.1 硼酸溶液：(H₃BO₃) = 20 g/L。称取 2 g 硼酸（5.1.8），加入 100 mL 蒸馏水溶解。 5.2.2 氢氧化钠溶液：(NaOH) = 400 g/L。称取 40 g 氢氧化钠（5.1.1），用水溶解，待冷却到室温后，用水稀释至 100 mL。 5.2.3 混合催化剂：称取硫酸铜（5.1.2）与无水硫酸钠（5.1.3），质量比为 1:15，研磨混匀。 5.2.4 盐酸标准溶液：c(HCl) = 0.1 mol/L。取 8.3 mL 盐酸（5.1.4），定容至 1000 mL。按 GB/T 601 标定盐酸。 5.2.5 混合指示剂：A 和 B 按体积比 1:1 混合。 甲基红乙醇溶液（A, 1 g/L）：称取 0.1 g 甲基红（5.1.5），溶于无水乙醇，用无水乙醇稀释至 100 mL。 溴甲酚绿乙醇溶液（B, 5 g/L）：称取 0.5 g 溴甲酚绿（5.1.6），溶于无水乙醇，用无水乙醇稀释至 100 mL。 6 仪器和设备 6.1 天平。 6.2 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式（半微量水蒸汽蒸馏式或定氮仪）。 7 样品处理 测试样品置于 -18℃ 冷冻保存，使用前放置室温，摇匀后使用。 8 测定步骤 8.1 消煮 准确吸取混合均匀的尿样待测液 1 mL～3 mL，置于消煮管中，加入混合催化剂 5 g（5.2.3），加入 8 mL 硫酸（5.1.9），于 420℃ 消化炉上消化 90 分钟，取出，冷却至室温。 8.2 蒸馏 采用凯氏定氮仪，将待消煮液的消煮管插在蒸馏装置上，以 25 mL 硼酸溶液（5.2.1）为吸收液，加入 2 滴混合指示剂（5.2.5），蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入 50 mL 氢氧化钠溶液（5.2.2）进行蒸馏，至流出液 pH 值为中性，蒸馏时间以吸收液体积达到约 10 mL 时为宜。降下锥形瓶，用水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。 8.3 滴定 用盐酸标准溶液（5.2.4）滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。 8.4 空白测定 随同试样进行空白试验。除不加入样品外，均按试样步骤进行。 9 分析结果的计算 按式 (1) 计算试样中的氮含量，以氮 N (g/mL) 表示。 N = (V₁ - V₂) × C × 0.014 / V₃ …… (1) 式中： N —— 试样中的氮含量，g/mL； V₁ —— 滴定试样时所需盐酸标准溶液体积，mL； V₂ —— 滴定空白时所需盐酸标准溶液体积，mL； C —— 盐酸标准溶液浓度，mol/L； V₃ —— 试样体积，mL； 0.014 —— 与 1.00 mL 盐酸标准溶液 [c(HCl) = 1.000 mol/L] 相当的、以克表示的氮的质量。 10 精密度 当样品的总氮浓度小于 1.00 g/mL 时，平行样的允许相对偏差应小于 10%；当样品的总氮浓度在 1 g/mL～3 g/mL 时，平行样的允许相对偏差应小于 5%；当总氮浓度大于 3.00 g/mL 时，平行样的允许相对偏差应小于 3%。