【行业标准】 出口液态乳中三聚氰胺快速测定 拉曼光谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2805—2011
出口液态乳中三聚氰胺快速测定拉曼光谱法
Rapid determination of melamine in export liquid state milkRamanspectrometrymethod
2011-02-25发布
中华人
民共和
国家质量监督检验检疫总局
2011-07-01实施
SN/T28052011
本标准依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》的编写规则。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：齐小花、张孝芳、刘峰、张程、邹明强、王夕濛、吴沙、康庆贺、李勐、羊富强。
SN/T28052011
本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到4.5中增敏试剂相关的专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下联系方式获得：
专利持有人：中国检验检疫科学研究院联系人：邹明强
地址：北京市朝阳区高碑店北路甲3号中国检验检疫科学研究院邮编：100123请注意除上述专利外，本文件的某些内容能够仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
1范围
SN/T28052011
出口液态乳中三聚氰胺快速测定拉曼光谱法本标准规定了快速检测液态乳中三聚氰胺的拉曼光谱测定方法。本标准适用于原料乳、纯牛奶、酸奶中三聚氰胺含量的拉曼光谱法测定2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。GB/T22388-2008原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法。3原理
不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼（Raman）光谱。原料乳、纯牛奶和酸奶等样品经稀释、离心，用基于表面增强原理的检测试剂盒增强后，进行拉曼光谱扫描。以928+2cm作为参考峰，设定其对应的强度为100，进行谱图归一，在698±2cm下，根据样品中三聚氧胺含量与归一后拉曼光谱相对强度的对应关系，采用外标法测定。4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯或以上，水为GB/T6682规定的一级水。4.1三聚氰胺标准品：纯度≥99.0%4.2三聚氰胺标准储备液：1.00g/L。准确称取100mg（精确至0.1mg）三聚氰胺标准品（4.1），加入60mL~80mL水，超声助溶后，定容至100mL容量瓶中。0℃~4℃条件下避光保存4.3阴性样品：经国标GB/T22388-2008方法测定三聚氰胺含量<0.1mE/kg的实际样品或将阴性干粉样品按与样品基质匹配比例用水稀释，临用时现配。4.4标准工作溶液：临用时现配。SN/T28052011
4.4.1标准溶液l（50.0ug/mL）：准确移取5.0mL三聚氰胺标准储备溶液（4.2）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。
4.4.2标准溶液Ⅱ（10.0μg/mL）：准确移取1.0mL三聚氰胺标准储备溶液（4.2）于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。
4.4.3按表1分别移取不同体积的标准溶液I或Ⅱ（4.4.1和4.4.2）和阴性样品定容到5.0mL，混勾。表丨标准工作溶液配制
标准溶液体积（mL）
定容体积（mL）
阴性样品体积（mL）
标准工作溶液浓度（mg/L）
4.5检测试剂盒：按照专利（申请号200810225085.8）配制的试剂A及试剂B。5仪器
便携式拉曼光谱仪
稳频激光光源：发射波长为785±1nm，线宽<0.2mm：能量>200mW：光谱分辨率≤15cm：光谱响应范围785nm~1100nm，或大于该响应范围：数据处理单元：嵌入式：光学单元：非光纤结构。5.2分析天平：感量0.01g，0.0001g。5.3离心机：转速不低于4000r/mina5.4具塞离心管：聚丙烯，1.5mL，10mL。5.5
样品池：具塞，非结晶性共聚酯，2.0mL。漩涡震荡器。
5.7可调移液器：100uL、200uL、1mL5mL，或其它可定量移取器具。样品处理
6.1原料乳、纯牛奶等
SN/T28052011
量取1.0mL试样于10mL离心管（5.4）中，加入4.0mL水，涡旋混匀：量取其中1mL勾质试液于1.5mL离心管（5.4）中，以不低于4000r/min离心3min，取清液待测。用阴性样品，按上述步骤制备样品空白试液。
6.2酸奶等
称取1.0g（精确至0.01g）试样于10mL离心管（5.4）中，加入4.0mL水，涡旋混匀：量取其中1mL勾质试液于1.5mL离心管（5.4）中，以不低于4000r/min离心3min，取清液待测。用阴性样品，按上述步骤制备样品空白试液。7拉曼光谱测定
7.1拉曼光谱参考条件
a）激光能量≥100mw
b）数据采集时间≥2s
7.2测定
7.2.1校准曲线绘制
根据检测需要，使用标准工作溶液（4.4.3）扫描系列拉曼光谱，以归一后拉曼光谱相对强度-浓度作图，绘制标准曲线。校准方法为外标法。必要时应采用国标GB/T22388-2008第二法进行确证。7.2.2试样测定
取250μL检测试剂A（4.5）于检测池（5.5）中，加入150μL检测试剂B（4.5），小心吸取离心后的匀质试液100于检测池瓶中，摇勾，迅速置于拉曼光谱仪的样品室中开始检测，获得目标物特征峰拉曼强度，根据校准曲线计算被测试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）。试样中待测三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。7.2.3结果计算
根据绘制的标准曲线，按照式（1）计算样品中三聚氰胺的含量。1000
式中：
试样中被测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：SN/T28052011
从标准曲线得到的三聚氰胺溶液的浓度，单位为毫克每升（mg/L）：试样的质量，单位为克（g)。
试样的体积，单位为毫升(mL）。计算结果保留3位有效数字：结果在0.5～1.0mg/kg时，保留2位有效数字。7.3平行试验
按试样步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.4空自试验
用经确证的阴性样品，按试样步骤进行操作8方法检出限、回收率和相对标准偏差8.1方法检出限
本方法的检出限为0.3mg/kg，定量限为0.5mg/kg。8.2回收率和相对标准偏差
原料乳中：在添加浓度0.50mg/kg时，回收率在82.0%~106.0%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度1.0mg/kg时，回收率在87.0%~109.0%之间，相对标准偏差小于10%，在添加浓度2.5mg/kg，回收率在96.0%~104.0%之间，相对标准偏差小于10%。在添加浓度10mg/kg，回收率在89.6%~108.6.0%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度30mg/kg，回收率在94.2%~104.9%之间，相对标准偏差小于10%。纯牛奶中：在添加浓度0.50mg/kg时，回收率在80.0%～100.0%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度1.0mg/kg时，回收率在85.0%~108.0%之间，相对标准偏差小于10%。在添加浓度2.5mg/kg，回收率在96.4%105.2%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度10mg/kg，回收率在92.1%～103.1%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度30mg/kg，回收率在94.7%104.1%之间，相对标准偏差小于10%酸奶中：在添加浓度0.50mg/kg时，回收率在82.0%~108.0%之间，相对标准偏差小于10%。在添加浓度1.0mg/kg时，回收率在85.0%~108.0%之间，相对标准偏差小于10%在添加浓度2.5mg/kg，回收率在96.4%~104.8%之间，相对标准偏差小于10%。在添加浓度10mg/kg，回收率在91.8%~103.2%之间，相对标准偏差小于10%。在漆加浓度30mg/kg，回收率在93.8%～105.9%之间，相对标准偏差小于10%。('ne)
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附录A
（资料性附录）
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图A.1三聚氰胺标准溶液拉曼光谱图（1.0mg/kg）2000
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