【国家标准(GB)】 贝类中腹泻性贝类毒素的测定

中华人民共和国国家标准
GB/T5009.212-—2008
贝类中腹泻性贝类毒素的测定
Determination of diarrhetic shellfish poison in shellfish2008-11-21发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
品体区
2009-03-01实施
本标准修改采用日本厚生省环乳第37号通知《腹泻性贝类毒素检验方法》。本标准与日本厚生省方法相比主要差异为：-增加了“规范性引用文件”、“术语和定义”；二：增加了“仪器和设备”；
一对“试样保存与制备”、“试剂和材料”进行了修改；一-在“结果判断及表述”规范了结果表述方式。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。GB/T 5009.212-2008
本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：曹际娟、王秋艳、于杰、于兵、黄大亮、孙新平、宋惠君、郑惠芳、丁健、薛忠良、徐维加、郑秋月
rH处网httn://warfoodmator
1范围www.bzxz.net
贝类中腹泻性贝类毒素的测定
本标推规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定方法、本标准适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的测定。2规范性引用文件
GB/T5009.212—2008
下列文件中的条款通过本标难的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G3/T6682分析实验用水规格和试验方法GB/I66822008.ISO369G：1987，MOD）GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
腹泻性贝类毒素diarrhetic shellfishpoinson;DsP以大田软海绵酸(okadaicacid，OA)及其衔生物为代表、摄食后可产生以腹泻为主要特征的存在于贝类体内的海洋生物毒性物质的总称。3.2
鼠单位mouse unit; MU
对体重为16～20g的三只雄性ICR小鼠腹腔各注射1m1.贝类毒素提取液后，使两只或三只小鼠在24 内死亡的最低毒素鼠定义为一个鼠单位。4原理
用丙酮提取贝类中LISP毒素，经乙醚分配后，经减压蒸于，再以含1%叶温-60的生理盐水为分散介质，制备DSP-1%吐温-60生理盐水混悬液，将该混悬液注射人小鼠腹腔，观察小鼠存活情泥，计算其毒力。
5试剂和材料
除非另有规定，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的-级水5. 1丙酮(C,HQ)。
5.2无水乙醚(CH0)。
5.31%吐温-60的生理盐水：称取1.0吐温-60（C4H12%Um），溶于生埋盐水（0.85%氟化钠）中，并定容至100.0ml..
6仪器和设备
转蒸发器。
6.2圆底烧瓶：500mL、250mL、100mL、50mL。6.3均质器。

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6.4布氏斗。
6.5天平，感量0.1g。
6.6带塞刻度试管：15mL，具0.2ml.刻度。6.7分液漏斗。
6.8冰箱。
6.9一次性注射器：1 mL，
6.10小白鼠：体重为16g20g的健康ICR品系雄性小鼠。7试样保存和制备
7.1样品的保存
7.1.1样品应有充分的代表性。去壳贝肉、带壳贝类或罐装贝类样品等，均应采取足够的数并使则肉达400 g以上
7.1.2不能及时送检的样品，除可常温保存的样品外，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳样品，应按7.2的方法开壳，去除水分后冷冻送检。7.2样品的制备
7.2、1生鲜带壳样品的前处理
用清水彻底洗净贝类外壳，切晰闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他异物.取出贝肉。严，禁以圳热或药物方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中畅腺（又称消化育·组织呈陪绿色或褐绿色）。
将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上，沥水5min，按7.2.3制备检样。7. 2.2冷冻样品的处理
在室温下使冷冻样品融化呈平冷冻状态。带壳冷冻的样品按7.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉，此时的贝肉仍呈冷冻状态，除去贝肉外部附着的冰片，用吸水纸轻轻抹去水分后，按7.2.3制备检样；事先已去除水分的冷冻去壳样品，室温融化后，按7.2.3制备检样7.2.3检样制备
对丁可以切取中肠腺的贝类（扇贝.贻贝及牡蛎等),称最200B贝肉后.仔细切取全部中肠腺,将中肠腺称重后作为检样备用,注意不要使中肠腺内容物污染制样T其；不便切取中肠腺的贝类样品，称量200贝肉后，可将全部贝肉细划后混合，作为梭样。8检验步骤
8.1试样提取
8.1.1将检样置于均质杯中，加三倍量内酮后均质2min以上。如为小均质杯，可分两次操作。8.1.2将均质好的物质倒人布氏满斗中抽泄，收集滤液。8.1.3对残分别用残渣两倍量的丙酶再清洗两次，滤液与8.1.2滤液合并。8.1.4将滤液移人500mL的圆底烧瓶中，56℃C士1C下，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物，
8.1.5用100mL～200ml.乙醛溶解油状物，倒人分液漏斗内，再用少量的乙醚清洗圆底烧瓶，合并倒人分液漏斗内，以少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不能生成乳独澈），静置分层后去除水层（下层）。8.1.6用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醛层移人250ml.或00tml.的圆底烧瓶中，于35℃士1℃减压浓缩去除乙醚，
8.1.7用少量乙醚将浓缩物移人50mL或10UmL圆底烧瓶巾，再次减压浓缩去除乙醛，8.1.8以1%吐温-60的先理盐水将全部浓缩物在刻度试替中稀释到10mL，充分振摇，制成均勾DSP-1%吐温-60牛理盐水混悬液。此时1mI.溶液中相当于含有20g贝肉，以此悬浮液作为试验原液2
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进行动物实验。
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8.1.9以试验原液注射小鼠，24h内两只或三只小鼠死亡时，需将试验原液进步稀释，冉注射小鼠。稀释前，应先振荡使试液成均勾悬浮液，再取其部分以1%吐温-60生现盐水稀释。8.2小白鼠试验
8.2.1选择16～20g健康ICR雄性小鼠六儿，随机分为实验组和空白对照组（1%杜温-60生理盐水)两组，每组三只。
8.2.2待测液（试验原液或其稀释液）混勾后，分别取1mL待测液或1%吐温-60生理盐水腹腔注射动物。注射过程中荐有滴以上提政液溢出，须将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠。记录注射完毕至小鼠停止呼吸死亡的时间，未死的应连续观察24h。8.2.3观察时限24h内，在空自对照纽小鼠正常的情况下，实验组若出现两只或三只小鼠死亡，则应按表1进行最小染毒量动物实验或最大稀释度实验。表 1注射量与毒力的关系
试验液
4倍稀释液
4倍稀释液
16倍稀释液
16倍稀释液
注射量/mL
“以中肠腺为检样时，相当丁含有中肠腺的去壳肉量。检样量*/g
力/(MU/g)
8.2.4注意事项：腹泻性贝类毒素是类剧毒的混合物，为避免腹性贝类毒素刘健康的危害，实验过程自始至终应戴手套操作。橡胶手套、玻璃制品等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，方可清洗或丢弃。同样，废弃的提取液等也应以上述游液浸池后处理。小鼠户体应按GB14925要求楚烧处理，其排放物应达到污物焚烧排放规定要求。9结果计算和表述
9.1观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情说下，若实验纽无小鼠死亡或仅有一只小鼠死亡，则报告受检样品中DSP毒力为：0.05MU/g。9.2观察时限24h内，在空白对照组小鼠正常的情况下，若实验组有两只或三只小鼠死亡，则按8.2.3进行动物实验，并根据表1计算待检样品中DSP荐力，报告该样品的毒力为：X××MU/g。保网
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贝类中腹泻性贝类毒素的测定
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开本880×12301/16印张0.5学数7千字2009年3月第一版2009年3月第一次印刷*
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