【国家标准(GB)】 公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定

GB/T18204.4—2000
为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB9663～9673--1996、GB16153—1996《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663~9673-1996，GB16153-1996相配套的监测检验方法。本标准第一法为仲裁法。
本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位：江苏省卫生防疫站、广东省卫生防疫站、天津市卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站。本标准主要起草人：涂抹法：符晓梅、封幼玲、杭万双、蔡玫、张淑兰；截印法：姜淑荣、张利伯、褚广鑫、付亚书。13
1范围
中华人民共和国国家标准
公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法细菌总数测定
Methods of microbiological examinationfor towel and bedclothes in public places--Determination of aerobic bacterial count本标准规定了公共场所毛市、床上卧具细菌总数的测定方法。本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具细菌总数的测定。2引用标准
GB/T18204.4—2000
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T18204.2—2000公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定3定义
本标准采用下列定义。
细菌总数aerobicbacterial count指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时问、PH值、需氧性质等），25cm2表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用毛巾、床上卧具清洗消毒效果的判定和评价提供依据。第一法涂抹法
4仪器
见GB/T18204.2—2000中第4章。5培养基和试剂
见GB/T18204.2—2000中第5章。6检验程序
见GB/T18204.2—2000中第6章。国家质量技术监督局2000-09-30批准14
2001-01-01实施
7操作步骤
7.1采样方法
GB/T18204.4—2000
7.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。7.1.2用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25cm（5cm×5cm）面积范围；床单、被单在上下两部各25cm2面积范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10mL生理盐水内，4h内送检。7.2检验方法
7.2.1将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。7.2.2以无菌操作，吸取2mL检样，分别注人到两块灭菌平血内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。每个稀释度做两块平血。
7.2.3将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平血，每血约15mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃生1℃培养箱培养48h。
8菌落计数方法
作平Ⅲ菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平血中有连成片状的菌落，该平不宜计数；若片状菌不到平皿中的半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全血菌落数。bzxz.net
公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式（1)计算：m
式中：m——细菌总数，cfu/25cm，—稀释倍数；
n—-平均菌落数。
9菌落数报告方式
见GB/T18204.2—2000中第9章。k·n
第二法戳印法
10原理
用特制的内径为3.57cm的培养血，注人营养琼脂培养基，使其表面比皿边高2～3mm。采样时将培养基表面和被检物品表面吻合，轻轻按压34s，使其被检查物体表面能够均匀地与培养基表面接触。然后盖上皿盖，置恒温箱37℃培养24h后，计数培养基表面（10cm2）生长的细菌菌落数。11培养基和试剂
11.1营养琼脂培养基
11.1.1成分：蛋白陈
牛肉膏
氯化钠
蒸馏水
1000ml
GB/T18204.4—2000
11.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.47.6，过滤，分装于玻璃容器中，经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
12仪器
12.1高压蒸汽灭菌器。
12.2于热灭菌器。
12.3恒温箱。
12.4冰箱。
12.5特制截印平血（内径3.57cm）。12.6制备培养基用的一般器材。13检验步骤
13.1将溶化并冷至50～55℃的营养琼脂培养基，倾注于已灭菌的特制截印平血内（使血内部培养基平面比Ⅲ边缘高2~3mm），每皿约10mL，待凝固后，盖上血盖（血盖与培养基隔一定空间），翻转平Ⅲ，在4℃下保存备用。
13.2将被检物品放平，再将血盖打开，放在被检物品表面上，用手轻轻按压3~4s，取下，盖上血盖，置37℃恒温箱内，培养24h后观察结果，计数细菌菌落数。14结果计算
用肉眼观察、点数培养基表面菌落数，其细菌总数为10cm（每皿）表面积的菌落数。本法简便易行、可靠，可直接来样做细菌培养。16
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