【国家标准(GB)】 理发用具微生物检验方法金黄色葡萄球菌测定

GB/T18204.7-2000
为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB96639673-1996GB16153—1996《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663～9673-1996，GB16153一1996相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位，广东省卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所、天津市卫生防疫站、北京市卫生防疫站。本标准主要起草人：蔡玫、封幼玲、陈西平、张淑兰、高晖。23
1范围
中华人民共和国国家标准
理发用具微生物检验方法
金黄色葡萄球菌测定
Methods ofmicrobiological examinationfor barber'stools--Determination of Staphylococcus aureus本标准规定了理发用具金黄色葡药球菌的检验方法。GB/T18204.7-2000
本标准适用于公共理发用具的金贫色葡萄球菌的检验，美容用具金黄色葡葡球菌检验可参照使用。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T18204.3-2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定GB/T18204.6—2000理发用具微生物检验方法大肠菌群测定3定义
本标准采用下列定义。
金黄色葡萄球菌staphylococcusaureus指在Baurd Parker培养基或血平板培养基上生长良好，分解甘露醇产酸，血浆凝固酶阳性的苹兰氏阳性葡萄状球菌。
4仪器
4.1显微镜。
4.2培养箱。
4.3离心机。
4.4灭菌吸管。
4.5灭菌试管。
4.6载玻片。
4.7酒精灯。
4.8革兰氏染色用有关器材。
培养基和试剂
5.1胰酪陈大豆肉汤
成分：胰酪陈（或胰蛋白陈）
植物蛋白陈（或大豆蛋白陈）3g国家质量技术监督局2000-09-30批准24
2001-01-01实施
氛化钠
磷酸氢二钾
葡萄糖
蒸馏水
GB/T18204.7-2000
1000mL
制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.2～7.3，分装，121C20min高压灭菌。5.27.5%的氮化钠肉汤
成分：蛋白陈
牛肉膏
氮化钠
蒸馏水
1000mL
制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃15min高压灭菌。5.3BairdParker平板
成分：胰蛋白陈
牛肉膏
醇母没膏
丙酮酸钠
甘氨酸bZxz.net
氯化锂（LiCI·6HO）
蒸馏水
pH7.0±0.2
增菌剂的配制：30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃校正pH。分每瓶95mL，121℃C高压灭菌15min，临用时加热熔化琼脂，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚确酸钾增菌剂5mL，摇勾后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存，不得超过48h。5.4血琼脂培养基
成分：营养琼脂
脱纤维羊血（或免血）
制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以无菌方法加人脱纤维羊血，摇匀，制成平板，暨冰箱内备用。
5.5甘露醇发酵培养基
成分：蛋白陈
氮化钠
甘露醇
牛肉膏
0.2%香草酚蓝溶液
蒸馏水
1000mL
制法：将蛋白陈、氯化钠、牛肉膏加到蒸馅水中，加热溶解，调pH7.4，加人甘露醇和指示剂，混勾后分装试管中，1I5℃20min高压灭菌备用。5.6免（人）血浆制备
取3.8%柠楼酸钠溶液，121℃30min高压灭菌，1份加免（人）全血4份，混匀静置.2000~3000r/min离心3~5min，血球下沉，取上面血浆。5.7革兰氏染色液
GB/T18204.7—2000
见GB/T18204.3—2000中第4章第4节。6操作步骤
HYYNrKE
6.1采样方法同GB/T18204.6—2000，将大肠菌群检测后剩余的5mL待检样品，放人45mL7.5%的氮化钠肉汤或胰酪陈大豆肉汤培养基中，36℃士1℃培养24h。6.2从培养液中取1～2接种环，划线接种在BairdPairker氏培养基（或用血平血），于36℃C土1℃培养24h。在BairdParker氏培养基上菌落为圆形，光滑，凸起湿润，颜色呈黑灰色，边缘整齐、周围混浊，外层有一透明带，在血平板上菌落呈圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圈。6.3挑取典型菌落作涂片染色镜检，为革兰氏阳性，成葡萄状排列。6.4甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置36℃士1℃培养24h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。
6.5血浆凝固酶试验
6.5.1玻片法：取清洁干燥玻片，端滴加一滴生理盐水，另一端滴加滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆均有凝固现象，再进行试管凝固试验。6.5.2试管法：吸取1：4新鲜血浆0.5mL放人灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物0.5mL。混匀，放36℃土1℃温箱或水浴中，每30min观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加人灭菌小试管内与0.5mL1：4血浆混勾，做为对照。7结巢报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性，可报告检出金黄色葡萄球菌。26
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