【国家标准(GB)】 公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定

GB/T18204.2—2000
为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB9663～9673—1996、GB16153-1996《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标准中的方法是与GB9663～9673一1996、GB16153-1996相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所、北京市卫生防疫站。本标准主要起草人：封幼玲、符晓梅、杭万双、周淑玉、商晖。4
中华人民共和国国家标准
公共场所茶具微生物检验方法
细菌总数测定
Methods of microbiological examination for tea set in publicplaces-Determination of aerobic bacterial count1范围
本标准规定了公共场所茶具细菌总数的测定方法。本标准适用于公共场所内公用茶具细菌总数的测定。2引用标准
GB/T18204.2—2000
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T18204.2—2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定3定义
本标准采用下列定义。
细菌总数aerobic bacterial count指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、籍氧性质等），1cm2表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。细菌总数是公用茶具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据。
4仪器
4.1高压蒸汽灭菌器。
4.2干热灭菌箱。
4.3培养箱36℃±1℃。
4.4冰箱。
4.5电炉。
4.6天平。
4.7灭菌平血：直径9cm。
4.8灭菌刻度吸管：1mL，10mL。4.9灭菌棉拭子。
4.10灭菌剪刀。
4.11放大镜。
国家质量技术监督局2000-09-30批准2001-01-01实施
4.12pH计或精密pH试纸。
5培养基和试剂
5.1生理盐水
5.1.1成分：氯化钠8.5g
蒸馏水1000mL
GB/T18204.2—2000
5.1.2制法：将氣化钠（8.5g）溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内：每管10mL，121℃20min高压灭菌。
5.2营养琼脂
见GB/T18204.1—2000中第4章第1节。6检验程序
细菌总数检验程序如下：
各1mL加人二块灭蕾半扭
菌落计数
7操作步骤
7.1采样方法
7.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。7.1.2用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在茶具内、外缘，涂抹50cm2，即1～1.5cm高处一圈（口唇接触处）。用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放人10mL生理盐水内，4h内送检。7.2检验方法
7.2.1将放有棉拭子的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。7.2.2以无菌操作，吸取2mlL检样，分别注人到两块灭菌平皿内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。每个稀释度做两块平。
7.2.3将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾人平血，每血约15mL，并立即旋摇平血。冷凝后放36℃士1℃培养箱培养48h。
8落计数方法
作平皿菌落计数时，可用肉眼直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平血的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平血不宜计数；若片状菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平Ⅲ菌落计数后乘以2，所得结果代表全迅菌落数。
实际公用茶具菌落数，按式（1)计算：6
式中：a细菌总数，cfu/cm
平均菌落数；
n-稀释倍数。
9葡落计数的报告
GB/T18204.2—2000
9.1选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告（见表1中例1)。（1）
9.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，则由两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中稀释度较低的平血菌落数（见表1中例2、例3）。9.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例4）。
9.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例5)。www.bzxz.net
9.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300，而相邻的另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例6)。
9.6若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每毫升小于1cfu（见表1中例7)。9.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五人法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1中报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。表1细菌计数结果及报告方式
不同稀释度平均菌落数
不可计
不可计
两稀释度
菌数之比
菌落总数
efu/ml
513000
报告方式
cfu/mL
16000或1.6×10*
38000或3.8×104
27000或2.7×10
510000或5.1×105
270或2.7×102
31000或3.1×10
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