【国家标准(GB)】 公共场所拖鞋微生物检验方法霉菌和酵母菌测定

GB/T 18204.8—2000
为贯彻执行《公共场所卫生暨理条例》和GB9663-9673—1996.GB16153—1956《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。本标中的方法是与GB9663~9673一1996，GB16153—1996相配套的监测检验方法。本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出，本标雅起草单位，北京市卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所。本标准主要起草人：高晖、封幼玲、周觀下、符晓梅、韩秀媛。27
中华人民共和国国家标准
公共场所拖鞋微生物检验方法
霉菌和酵母菌测定
Methods of microbiological examinationfor slippers inpublie places-Determination of molds and yeasts count1范
本标准规定了公共场所公用拖鞋霹菌和酵母菌的检验方法。本标准适用于公共场所公用施鞋霉菌和酵母菌的测定。2定义
本标罹采用下列定义。
露蘭和酵母菌测定determination of molds and yeasts count-iiKANiKAca
GB/T 18204.8—2000
指在一定条件培养后，50cm面积检样中所含有的霉菌和酵母菌落数。霉菌和酵母菌主要作为判定被检样品被霉菌和酵母菌污染程度的标志，以便对被检样进行卫生学评价时提供依据。3仪器和材料
恒温箱：25~28℃。
显微镜。
高压蒸汽灭菌器。
酒精灯。
接种针。
3.6平m；直径9cm。bZxz.net
3.7试管架。
3.8试管。
3. 9玻璃珠。
3. 10无菌棉拭子。
培养基和试剂
4-1生理盐水
氯化钠
蒸馏水
1 000 ml
辫解后，分装到加玻璃珠的试管内.10mL和9mL，121C20min高压灭菌。4.2幕菌培养基
戒分：蛋白藤
酵母漫出粉
国家质量技术监督局2000-09-30批准28
2001-01-01实施
磷酸氢一钾
硫酸镁(MgS0,·7H,0)
蒸馏水
GB/T 1B204.8—2000
1 000 mL
制法：除葡萄糖外,取上述成分加人水内，微温溶解，调pH为6.8,煮沸，加葡萄糖溶解后，过滤调pHI,使灭菌后pH为6.4=0.2.115℃20min高压火菌。4.3虎红(孟加拉红)培养基
成分：蛋白陈
葡萄糠
磷酸二氢钾
硫酸镁(MgS0·7H,O)
1：3000虎红水溶液
氯霉素
蒸馏水
100 mL
1 000 mL
制法：将[.述各成分（除虎红外)加入蒸馏水中游解后，再加人虎红溶液，分装后.高压灭菌121℃20min，
4.4马铃葡葡糖琼脂培养基(PDA)）成分：马铃薯(去皮切块)
葡葡糖
蒸馏水
1 000 mT
制法将马铃薯去皮切块，加1.000ml.蒸馏水，煮沸1020min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml.，加人葡萄糖和琼脂：加热溶化，分装121℃高压灭菌20min，5操作步骤
5. 1将光菌棉拭了取无菌生理盐水,在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处 5 cm×5 cm 面积上,有顺序地均勾涂抹 3次（一双拖鞋为一份样品)后，用灭菌剪刀将棉拭子手执部分剪断,将棉拭子放入 10 L装有玻璃珠的无菌战水管巾。
5. 2 将盛有棉拭子的盐水管在手心用力振荡 100 次,再用带橡皮乳头的 上 nml, 灭菌吸管反复吹吸 50次,使霉菌孢-了充分散开。此液为1：10稀释液。5.3用火菌吸管吸取1：10检液2ml.，分别注人到2个灭菌平内，每1mL。另取1mL注入9mL加有玻璃珠的灭菌盐水管中，换1支1mL.灭菌吸管吹吸次，此液为」：100稀释液，5.4按上述操作顺序作10倍递增稀释被，每稀释-次，换~支1mL灭菌吸管，根据样品的污染情况，选择3个合适的稀释度，
5. 5将溶化并冷却至45℃左右的培养基注人灭菌的平血中,待琼脂避固后,倒置于25~28℃温箱中,3天后开始观察,共培荞观察·周，5-6计算方法：通常选择菌落数在30~-100之间的乎血进行计数，同稀释度的两个平血的菌落平均数乘以稀释倍数，即灼每旁升检样中所含真菌数。若有两个稀释度的菌落数皆在规定范围之间或三个稀释度背不在此范围时、应参熙细菌总数的报告方式报告。5.7结果报告：见式（1)，
式中：m-真菌菌落数，cfu/50cmn—每匪的平均真菌菌落数
—稀释倍数。
GB/T 18204.8—2000
m=对-k
-iiKAoNiKAca-
（1）
注：一只拖魅的漆抹面积是25cm（5cm×5cm）；一双拖鞋的涂抹面积则为50cm(25cm×2)。30
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