【国家标准(GB)】 食品中生物胺含量的测定

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.208—2008
食品中生物胺含量的测定
Determination of biogenic amine in foods2008-11-21发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施wwW.bzxz.Net
中华人民共和国
国家标滩
食品中生物胺含量的测定
GB/T 5009.208
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外兰里河北街16号
郏政编码：100045
网址 spc. net. cn
电话：6852394668517548
中国标滩出版社案皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880X1230
2009年3月第--版
印张 0.5
学数9千字
2009年3月第-次申刷
书号：155066：1-36037
定价10.00元
如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
举报电话：（010)68533533
http://foodmate.net
本标准的附录A为资料性附录。
本标准山中华人民共和国卫生部提出并归口。本标罹由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。GB/T5009.208-—2008
本标准参加起草单位：北京市疾病预防控制中心、烟台大学、河南省药品检验所。本标准光要起草人：吴永宁、赵云峰、李志军、吕斌，李敬光、张磊、兵、苗虹。1
http://foodmate.net：
１范围
食品中生物胺含量的测定
GB/T 5009.208-2008
本标准规定了食品中色胺、阝-苯乙胺、腐胺、户胺、红胺、酪胺、亚精胺和精胺含量的测定法。本标准适用于酒炎（葡葡酒、啤酒、黄酒等）、谢味品（醋、酱油等）、水产品（鱼类及其制品、虾类及其制品）、肉类及乳制品中生物胺的测定。本标准定量限！
a）酒炎、醋等谢味品：色胺3μg/kg、β-苯乙胺10μg/kg.腐胺3μg/kg、户胺7μg/kg、组胺10μg/kg酪胺10uμg/kg亚精胺5μg/kg、精胺71ug/kg。水产品、肉类、乳制品及以豆类为原料的调味品：色胺15μg/kg、3-苯乙胺40μg/kg、腐胺b)
15μg/kg、户胺35μg/kg、组胺50μg/kg、酪胺25μg/kg、亚精胺25μg/kg、精胺35μg/kg：2原理
以「，7-二氮基庚烷为内标，以5%三氟乙酸为提取溶液，搬摇提取，以正已烷去除脂肪，经过三氯中烷-正丁醇（1十1)液液苯取净化后，以丹磺酰氯为衍生剂，60℃衍生30tmin，采用高效液相色谱的（柱分离，紫外检测器检测，内标法定量。3试剂和材料
除非另有规定，本标准中所用试剂均为分析纯。甲醇(CHO)：色谱纯。
3.2丙酮(C,H,0):色谱纯。
乙醚(C,HuO):重蒸，
正丁醇(C,HO)。
三氯甲烷(CHCI.）。
3.6止已烷(C,H1）：色谱纯。
谷氨酸钠(C,H,NNaO.）。
3.8碳酸氢钠(NaHCO,)。
3.9氯化钠(NaCI)。
3.10氢氧化钠(NaOH)。
盐酸(HCI)。
三氯乙酸(C,HCl,O2）。
3.13组胺盐酸盐（histatminedihydrochloride，CHN，2HCl)标准品（纯度99%，计算时应折算掉盐盐，C,H，Ng/C,H,N2HCl=155/184)3.143-苯乙胺（β-phenyle.bylumnine.CHN）标准品（纯度>98%）。3.t5酪胺盐酸盐（tyraminehydrochloricte，CIIzC1NO)标难品（纯度≥99%，i算时应折算掉盐酸盐，C,HiNO/ C,HINO - HC1=137/174)。3,16腐胺（putrescine，CHNz)标准品（纯度98%）3.17户胺(cadaverine，C,HiN）标推品（纯度>98%）。3.18色胺（tryptamitehydrochloride，C。HNz）标推品（纯度>99%）3. 19
亚精胺(spermidine,C,HlN.)标雅品（纯度>97%）。1
合伙伴
GB/T5009.208—2008
3.20精胺97%）3.211,7二氨基庚烷（1,7·diatminoheptane,C,HisN,）内标标准品（纯度98%）3.22丹磺酰氯（dansylcblorideCizHuzCINO,S)标准品（纯度>95%）。3.23生物胺标准储备溶液的配制：准确称取各种生物胺标准品适量，分别置于10mL容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度.混勾，配制成浓度为10001mg/1.以各种生物胺单体计）的标准储备溶，置4℃箱储存。
3.24生物胺标摊混合使用液的配制：分别吸取1.00mL各生物胺单组分标准诺备溶液，置于用：个10ml容量瓶巾，用U.1ml/L.盐酸稀释至刻度，混匀，配制成生物胺标准合使用液（100mg/L）。3.25生物胺标准系列溶液配制:吸取0.10mL,C.25mL、0.50ml,1,00mL、1.50mL、2.50mL.5.00tl生物胺标准混合使用液（100mz/1.），分别置于10ml.容量瓶中，用0.1mo1/L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，使浓度分别为1.0Umg/L，2.50mg/[、5.00mg/L、10.0mg/L.15.0mg/L25.0mg/1.、50.0 mg/L.
3.26内标标准储备溶液的配制：准确称取内标物质适量，置于10ml容瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，混匀，配制成浓度为1000mg/L的内标标推储备溶液，置4℃冰箱储存。3.27内标标准使用液的配制：吸取1.00mL内标标准储备溶液，置10mL容量瓶中，用0.1rnol/L盐酸稀释至刻度，混勾，作为内标使用液（100mg/L），置4℃冰箱储存，3.28丹磺酰氯衍生剂溶液的配制：准确称取丹磺酰氯适量，以丙酮为溶剂配制成浓度为0.01mg/L的衔生剂标准使用液（10tmg/mL丙酮溶液），置4℃冰箱储存。4仪器
4.1高效液相色谱仪(HPLC),配紫外检测器。4.2离心机，
4. 3旋祸混合器。
4.4恒温箱。
4.5氮气浓缩器。
4.6电子天平。
4.7酸度计。
4.8超纯水器。
4.90.22μm滤膜针头滤器：
5分析步骤
5. 1试样制备
5.1.1试样提取
5.1.1.1水产品，肉类、乳制品及以豆类为原料的调味品推确称取已经绞碎或勾浆后的水产品、肉类、乳制品或以总类为原料的调味品10.00多，置100mT具塞锥形瓶中,加人 20 mL 5%兰氯乙酸溶液和 2. 0 mL(100 mg/L)内标使用液，混勾,振荡提取60 min,转移至 50 ml.离心管中,3 600 r/min离心 10 min,上清液,置 50 mL穿量瓶中,连续提取两次，合并上清液，用5%氯乙酸稀释至刻度，滤纸过滤，待净化。5.1.1.2酒类、醋及醋饮料
量取含酒类、醋或醋饮料10.00 mL，加人 0.2 mL.(100 mg/I.)内标使用液,采用 5.1.2.2方法直接萃取。
5. 1.2试样净化
5. 1.2. 1 除脂肪:移取上述试样提取液 10. 00 mL,置 25 rmL具塞试管中,加人 10 mL 正已烷,涡旋振2

GB/T5009.20B—2008
荡5min，弃去上层有机相，重复进行两次。5.1.2.2萃取：将上述除脂肪后溶液加入适量氯化钠使溶液饱和。准确移取「述饱和后的试样提取液5.00mL，登于15mL离心管中，用0.1mol/L氢氧化钠落液调节pH至12.0，加人5.0mL的正丁醇三氯甲烷（1十1)混合溶液，涡旋振荡5ruin，3600z/min离心10trin，吸敢上层有机相，再重复萃取两次，最后一步萃取用分液漏斗分离，合并萃取液，混匀，取3.0mL萃取液并加人0.2ml.1mol/1.盐酸，混合后40℃水浴下氮气吹于，加入1.0mL0.1mnl/L盐酸使残留物溶解，待衍生。5.2生物胺的衍生
取上述待衍生的试样溶液0.50mL置10mL具塞试管中，加入1.5mL饱和碳酸氢钠溶液、1.0mL丹磺酰氯衔生溶液，振荡使混勾。置G0℃培养箱中反应30min，中间振荡两次，取出，分别加人100μL谷氨酸钠（50mg/mL饱和碳酸氢钠溶液），振荡混匀，60℃保温15min。取出，每个试管中加人1mL超纯水，在40℃水浴下用氮气除去丙酮。加人3ml.乙醚，振荡2tnin，静置分层后，吸取出上层有机相（乙醛层），重复萃取两次，合并乙醚萃取液，氮气吹于。加人1.0甲醇使残留物溶解，振荡混匀，0.22m滤膜针头滤器过滤，滤液待测。分别移取0.品0InL生物胺标准系列溶液，分别置10mL具塞试管中，依次加人20μI.(100tg/L)内标使用液，加人1.5mL.饱和碳酸氢钠溶液、1.0rmL丹磺酰氯衍生溶液，振荡使混匀。自“置60℃培养箱中.”，以下操作向试样的衔生步骤。5.3液相色谱参考条件
色谱柱为C柱（150mm×4.6mm内径，5μm），紫外检测波长254ntm，进样量20μL，杆温30℃，流动相 A为甲醇溶液,B为超纯水，流速：1.5ml./min。梯度洗脱程序见表1。表1
梯度洗脱程序表
流动相A
流动相B
5.4测定
时间/tin
分别吸取上述标准系列和试样的衍失溶液注人高效液相色谱仪中，测定，记录色谱图，色谱图参见附录 A。
6结果计算
计算各生物胺和内标的峰面积比，以标准系列溶液的质量（μg）为纵坐标，以各生物胺和内标的峰面积比为横坐标，绘制标准曲线，按式（1)计算试样中生物胺含量。mXf
式中：
p试样中生物胺的含量，单位为毫克于克或毫克每升(mg/kg或mg/L)：(1)
-试样中各生物胺色谱峰与内标色谱峰的峰面积比值对应的生物胺质量，单位为微克（rg)；mt
_——试样稀倍数：
m-取样量，单位为克或毫升(g或mL)计算结果保留三位有效数字。
7精密度
在重复性条件下获得的两次独立測定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。品成伴网ht
GB/T5009.208--2008
附录A
（资料性附录）
生物胺及内标标准溶液衍生物的HPI.C色谱图8种生物胺及内标标准溶液衍生物的HPLC色谱图见图A.1.mAU
色蔽；
苯乙胺；
腐胺；
户胺：
组胺；
-1,基庞烷(内标)
酪胺：
8·-亚精版
一精胺。
图A.18种生物胺及内标标准溶液衍生物的色谱图GB/T 5009.208-2008
bttp
版权专有侵权必究
书号：155066：1-36037
定价：
80080000
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。