【商检行业标准(SN)】 斑节对虾杆状病毒(MBV)诊断方法

SN

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1151.3—2002

斑节对虾杆状病毒(MBV)诊断方法

Test method for penaeus monoden-type baculovirus (MBV)

2002-11-25 发布2003-05-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局 发 布

前 言

本标准是非等效采用 OIE 的《水生动物健康手册》2000 年版的检疫规程以及国内在该领域的研究成果的基础上制定的。

本标准的附录 A 是资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：高隆英、刘荭、江育林、史秀杰。

本标准系首次发布的检验检疫行业标准。

斑节对虾杆状病毒(MBV)诊断方法

1 范围

本标准规定了用组织学方法和 PCR 技术检测斑节对虾杆状病毒(MBV)的检测方法。

本标准适用于斑节对虾杆状病毒(MBV)病的流行病学调查、监测、诊断和检疫。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法(eqv ISO 3696:1987)

3 试剂和材料

3.1 本标准所用水应符合 GB/T 6682—1992 中一级水的规格。所用的试剂配方见附录 A。

3.2 dNTP(含 dCTP、dGTP、dATP、dTTP 各 10 mmol/L)

3.3 引物

可以选用两对引物。其序列如下：

p35:5'-AC(TC)-TA(TC)-GTG-TCA-GAC-AAC-AAA-TA(TC)-TAC-AAA-3'

p36:5'-GG(TC)-GCG-TC(TG)-GG(TC)-AA(TC)-TT(AT)-AC(TC)-TT(AG)-AA-3'

该引物用于扩增病毒多角体蛋白基因中的 647 bp 片段。括号内的碱基表示：在该位置上这几种碱基都可以用，并且在合成引物时应是这几种不同引物的混合物。

GC21PF:5'-AAC-CTT-CGG-CCT-TCC-ATT-3'

GC21PR:5'-AAT-CGA-ACG-GCC-TTA-GCA-3'

该引物用于扩增病毒 DNA 的 1 017 bp 片段。

3.4 Taq 酶(见附录 A)

-20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。

3.5 无水乙醇

分析醇，使用前预冷到-20℃。

3.6 矿物油

不含 DNA 和 RNA 酶。

3.7 PCR 扩增仪

3.8 电泳仪

3.9 电泳槽

3.10 离心机

3.11 微量移液器

3.12 紫外透射仪

3.13 旋涡振荡器

3.14 恒温培养箱