【团体标准】食品单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光核酸

本网站发布时间： 2026-08-20

T/CAIASH006-2017
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基本信息

标准号：
T/CAIA SH006-2017
标准名称：
食品单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光核酸
标准类别：
团体标准(TZ)
英文名称：
Real-Time Simultaneous Amplification and Testing (SAT) method for detecting L.monocytogenesin foods
发布日期：
2017-07-20
实施日期：
2017-10-01
出版语种：
简体中文
下载格式：
.zip.pdf
下载大小：
736.97 KB

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标准分类号

标准ICS号：
67.050

关联标准

出版信息

其他信息

起草单位：
王慧、储瑞蔼、邱红玲、张常娥、于明辉
归口单位：
中国分析测试协会
提出单位：
中国分析测试协会
发布部门：
中国分析测试协会

标准简介/下载

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标准简介：

上海交通大学公共卫生学院、中国科学院上海生命科学研究院及上海仁度生物科技有限公司

标准内容

部分标准内容：

中国分析测试协会标准
T/CAIA/SH006-2017

食品单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）方法
Real-Time Simultaneous Amplification and Testing (SAT) method for detecting L. monocytogenes in foods

发布日期：2017-07-20
实施日期：2017-10-01
发布机构：中国分析测试协会

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009规则起草。
本标准由中国分析测试协会标准化委员会提出并归口。
本标准起草单位：上海交通大学公共卫生学院、中国科学院上海生命科学研究院及上海仁度生物科技有限公司。
本标准的附录A、附录B为资料性附录，附录C为规范性附录。
本标准主要起草人：王慧、储瑞葛、邱红玲、张常娥、于明辉。
本标准为首次发布。

1 范围
本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌（L. monocytogenes）的实时荧光核酸恒温扩增检测方法。本标准适用于肉制品（熟肉制品、即食生肉制品），与乳制品（乳及液态乳制品、半固态乳制品、固态乳制品）等食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检验。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本文件。
GB 4789.30 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验
GB 4789.1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
GB/T 27405 实验室质量控制规范 食品微生物检测

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准：
恒温扩增实时荧光检测技术（Simultaneous Amplification and Testing，SAT）：指RNA恒温扩增实时荧光检测技术。

4 SAT原理
在同一温度下，以细菌RNA为起始模板，通过M-MLV反转录酶产生靶标RNA的一个双链DNA，然后利用T7 RNA多聚酶以该DNA为模板产生多个（100~1000）RNA拷贝；每个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环；同时，带有荧光标记的优化探针和这些RNA拷贝特异结合后，打开茎环结构，从而产生荧光。根据实时荧光信号的出现时间和强度，结合阳性对照和阴性对照即可对检测结果进行判定。

5 设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备如下：
5.1 实时荧光恒温检测系统。
5.2 台式离心机。
5.3 恒温培养箱：30±1℃。
5.4 振荡器。
5.5 冰箱（2℃~8℃和-20℃或-80℃）。
5.6 均质器。
5.7 电子天平（感量0.1g）。
5.8 微量可调移液器及配套无DNA/RNA酶吸头（10μL、100μL、1000μL）。
5.9 无DNA/RNA酶离心管（0.5mL、1.5mL、2.0mL）。
5.10 水浴槽。
5.11 恒温混匀仪。
5.12 制冰机。
5.13 干热恒温器。
5.14 分光光度计。
5.15 比色皿。
5.16 溶菌酶。

6 试剂
除特别说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为一级水，溶解RNA实验用水必须为无RNA酶污染一级水，所用试剂均用无DNA/RNA酶污染的容器分装。
6.1 李氏增菌肉汤LB（LB1，LB2）：见附录A中A.1。
6.2 无菌生理盐水：见附录A中A.2。
6.3 单核细胞增生李斯特氏菌SAT实验相关引物、探针
上游引物：扩增单核细胞增生李斯特氏菌种属特异性基因的转录产物RNA的上游引物（序列见附录B中B.1.1）。
下游引物：扩增单核细胞增生李斯特氏菌种属特异性基因的转录产物RNA的下游引物，包含T7启动子识别位点（序列见附录B中B.1.1）。
单核细胞增生李斯特氏菌特异性探针：探针的5'端标记荧光报告基团FAM，3'端标记荧光淬灭基团DABCYL（序列见附录B中B.1.1）。
内质控RNA（IC-RNA）：体外转录成RNA，加入到每个反应体系中（序列见附录B中B.1.1）。
内质控探针：探针的5'端标记荧光报告基团HEX，3'端标记荧光淬灭基团DABCYL，识别内质控RNA上的特定序列（序列见附录B中B.1.1）。
6.4 阳性质控品：由有资质的权威机构提供单核细胞增生李斯特氏菌标准菌株，-80℃冰箱保存。（来源和编号见附录B.1.1）。
6.5 SAT反应液（成分见附录B.1.1）。
6.6 SAT酶液（含M-MLV反转录酶、T7 RNA多聚酶等成分，见附录B.1.1）。
6.7 Trizol溶液。
6.8 氯仿。
6.9 异丙醇。
6.10 无水乙醇。
6.11 RNA提取试剂盒。
6.12 溶菌酶。

7 实验室安全防护
实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备及个体防护应符合GB 19489中二级生物安全防护实验的要求。

8 检测流程

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