【团体标准】 调味面制品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法

ICS 67.180.20 X 11 团体标准 T/NAIA 071—2021 调味面制品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法 Determination of dehydroacetic acid in seasoned flour products by high performance liquid chromatography 2021-08-20发布 2021-08-30实施 宁夏化学分析测试协会 发布 前言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定编写。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏回族自治区食品质量监督检验二站、宁夏回族自治区农业勘察设计院、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人：伊倩如、常立群、张小飞、赵瑞、曹琛、吴刚、邬佳豪、王剑、王东、肖丹、杜晓楠、李顺红、薛亚珊、骆菲菲、茹娟、吴静。 本标准为首次发布。 1 范围 本文件规定了调味面制品中脱氢乙酸的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于调味面制品中脱氢乙酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.121 《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定》 GB/T 6682 《分析实验室用水规格和试验方法》 GB/T 27404 《实验室质量控制规范 食品理化检测》 3 术语和定义 3.1 方便食品 包括方便面、调味面制品和其他方便食品。其中调味面制品包括产品标签标识和生产许可申证类别均为调味面制品的产品；其他方便食品（即方便粥、方便盒饭、冷面及其他熟制方便食品等）包括冲调类方便食品、主食类方便食品和其他类别方便食品。 3.2 调味面制品 以小麦粉或其他谷物粉等为主要原料，添加或不添加辅料，经配料、挤压熟制、成型、调味、包装等工艺加工而成的即食食品。 4 原理 试样水溶液提取，经除脂、去蛋白、过0.45 μm水相微孔滤膜注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，外标法定量。 5 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 材料 5.1.1 50 mL具塞离心管。 5.1.2 注射器。 5.1.3 0.45 μm水相微孔滤膜和0.45 μm有机相微孔滤膜。 5.2 试剂 5.2.1 甲醇 (CH₃OH)：色谱纯。 5.2.2 乙酸铵 (CH₃COONH₄)：色谱纯。 5.2.3 正己烷 (C₆H₁₄)：分析纯。 5.2.4 氢氧化钠 (NaOH)：分析纯。 5.2.5 硫酸锌 (ZnSO₄·7H₂O)：分析纯。 5.3 试剂配制 5.3.1 乙酸铵水溶液 (0.02 mol/L)：称取1.54 g乙酸铵，溶于水并稀释至1 L。 5.3.2 氢氧化钠溶液 (20 g/L)：称取20 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1 L。 5.3.3 硫酸锌溶液 (120 g/L)：称取120 g硫酸锌，溶于水并稀释至1 L。 5.4 标准品 5.4.1 脱氢乙酸 (C₈H₈O₄，CAS：520-45-6) 标准品：纯度≥99.5%。 5.5 标准溶液配制 5.5.1 脱氢乙酸标准贮备液 (1.0 mg/mL)：准确称取脱氢乙酸标准品0.01000 g（精确至0.0001 g）于10 mL容量瓶中，用1 mL氢氧化钠溶液（5.3.2）溶解，用水定容。4℃保存，有效期为3个月。 5.5.2 脱氢乙酸标准工作液：分别吸取脱氢乙酸贮备液0.01 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL于10 mL容量瓶中，用水定容。配制成浓度为1.00 μg/mL、10.00 μg/mL、50.00 μg/mL、100.00 μg/mL、200.00 μg/mL的标准工作液。4℃保存，有效期为1个月。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：带二极管阵列或紫外检测器。 6.2 涡旋混匀器。 6.3 分析天平：感量0.1 mg。 6.4 离心机：转速不得低于4000 r/min。 6.5 超声波震荡器：功率35 W。 6.6 pH计。 7 分析步骤 7.1 样品制备与提取 称取样品2.5 g（精确至0.001 g），置于50 mL具塞离心管中，加入10 mL水、5 mL硫酸锌（5.3.3）溶液，加入10 mL正己烷，涡旋混匀5 min，超声提取10 min，4000 r/min离心10 min，弃去有机相，加入10 mL正己烷再次进行提取。用氢氧化钠溶液（5.3.2）调pH至7.5后，转移上清液至25 mL容量瓶中，加水定容至刻度线，取上清液过0.45 μm水相滤膜，供高效液相色谱测定。 7.2 仪器参考条件 7.2.1 色谱柱：C18硅胶柱（柱长250 mm，柱内径4.6 mm，填料粒径5 μm），或相当者。 7.2.2 进样量：10 μL。 7.2.3 柱温：35℃。 7.2.4 波长：293 nm。 7.2.5 流速：1.0 mL/min。 7.2.6 流动相：0.02 mol/L乙酸铵 + 甲醇（90:10，体积比）。 7.3 测定 将分析待测样品溶液和脱氢乙酸标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 8 分析结果的表述 试样中合成脱氢乙酸含量按以下公式进行计算： X = (c × V × 1000) / (m × 1000 × f) 式中： X —— 试样中脱氢乙酸的含量，单位为克每千克 (g/kg)； c —— 进样液中脱氢乙酸的浓度，单位为微克每毫升 (μg/mL)； V —— 试样定容总体积，单位为毫升 (mL)； m —— 试样质量，单位为克 (g)； f —— 稀释因子； 1000 —— 换算系数。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。 9 精密度 在重复性测定条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过其算术平均值的10%。 10 定量限、检出限 方法检出限：以样品取样量5 g，确定方法的检出限为0.002 g/kg，定量限为0.005 g/kg。