【团体标准】体外测试 B16细胞黑素合成抑制实验

本网站发布时间： 2026-08-19 09:30:20

T/SHRH027-2019
现行
↓ 点击下载此标准

基本信息

标准号：
T/SHRH 027-2019
标准名称：
体外测试 B16细胞黑素合成抑制实验
标准类别：
团体标准
英文名称：
In Vitro Test -Inhibition of Melanin Synthesis in B16 Cells Test
标准状态：
现行
发布日期：
2019-12-30
实施日期：
2020-01-30
出版语种：
简体中文
下载格式：
.zip.pdf
下载大小：
314.57 KB

手机扫码下载更方便

标准分类号

标准ICS号：
71.100.70
中标分类号：
Y42

关联标准

出版信息

其他信息

起草人：
陈媛祺、曹平、陈田、廖峰、陈静、廖筝筝、曾四立、吴梅芳、卢永波、陈贞明、谢阿贵、姜春鹏、赵奕竹、马骁、王飞飞、高宏旗、朱翠翠、李琼、金坚、陈亦华
起草单位：
上海家化联合股份有限公司、东阿阿胶股份有限公司、上海上美化妆品有限公司、上海创元化妆品有限公司、广东博溪生物科技有限公司、福建片仔癀化妆品有限公司、上海绿瑞生物科技有限公司、云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司、上海清轩生物科技有限公司、上海天祥质量技术服务有限公司、上海日用化学品行业协会
归口单位：
上海日用化学品行业协会
提出单位：
上海日用化学品行业协会
发布部门：
上海日用化学品行业协会

标准简介/下载

点击下载

标准简介：

1.范围2.原理3.测试仪器4.试剂5.试验方法6.结果计算7.试验有效性认证8.结果报告

标准内容

部分标准内容：

ICS71.100.70
T/SHRH
团体标准
T/SHRH027-2019
体外测试B16细胞黑素合成抑制实验InVitroTest-InhibitionofMelaninSynthesis inB16CellsTest全国团体标
2019-12-30发布
上海日用化学品行业协会发布
2020-01-30实施
1.范围·
测试仪器
4．试剂
5．试验方法·
结果计算
全国团体标准信息
试验有效性认证·
8.结果报告
T/SHRH027-2019
本标准按照GB/T1.1-2009给出规则起草。本标准由上海日用化学品行业协会提出和归口。T/SHRH027-2019
本标准起草单位：上海家化联合股份有限公司、东阿阿胶股份有限公司、上海上美化妆品有限公司、上海创元化妆品有限公司、广东博溪生物科技有限公司、福建片仔廣化妆品有限公司、上海绿瑞生物科技有限公司、云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司、上海清轩生物科技有限公司、上海天祥质量技术服务有限公司、上海日用化学品行业协会。本标准主要起草人：陈媛祺、曹平、陈田、廖峰、陈静、廖筝筝、曾四立、吴梅芳、卢永波、陈贞明、谢阿贵、姜春鹏、赵奕竹、马骁、王飞飞、高宏旗、朱翠翠、李琼、金坚、陈亦华。全国团体标准信
1范围
体外测试B16细胞黑素合成抑制试验T/SHRH027-2019
本标准规定了B16细胞黑素合成抑制试验的基本技术要求，提供一种美白原料的细胞评估方法，适用于宣称通过抑制黑素生成而达到美白效果的原料的功效评价。2原理
B16小鼠黑素瘤细胞是常用的研究黑素生成的细胞模型，通过测定美白原料作用于黑素细胞后黑素合成量的变化，评价原料的美白活性。测试仪器
3.1分析天平：精度0.1mg：
3.2CO2培养箱：
3.3倒置显微镜：
3.4离心机；
3.5可调节移液枪：1000μL、200μL、50μL、10μL；3.6细胞计数器；
恒温水浴锅：
生物安全柜；
酶标仪。
除有另外说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水，与细胞培养相关试剂、耗材均需经过无菌处理。
4.1B16细胞：
4.2细胞培养涉及试剂及耗材：1XPBS、细胞培养液（DMEM（1X，含4.5g/LD-Glucose）+10%胎牛血清+1%混合抗生素（100X））、0.25%Trypsin（1X）、6孔细胞培养板、96孔细胞培养板、细胞培养瓶：
4.3黑素提取液：配制含有10%DMSo的1mol/LNaOH。试验方法
5.1细胞收集：吸掉培养瓶中的培养液，用1XPBS洗两遍，然后加入0.25%Trypsin（1X）（T25培养瓶中加入500μL，T75培养瓶中加入1mL），放入CO2培养箱中消化3-5分钟，显微镜T/SHRH027-2019
下观察细胞脱离培养瓶后，即可加入5mL细胞培养液终止消化，并收集培养瓶中的细胞于离心管中，1000rpm离心3分钟。
5.2细胞计数：弃去上清，细胞重新悬浮于离心管中，计数细胞浓度。5.3细胞铺板：用细胞培养液调整细胞密度至2.5×103个/mL，然后将细胞悬液铺于6孔板中，每孔2mL。注：每次测试需设定阴性对照组、受试样品组和阳性对照组，每组均设立三个复孔。5.4样品配制：待测样品的浓度应选择不影响细胞生长的浓度，即为细胞的无毒浓度。液体样品需过滤除菌，再用细胞培养液稀释至相应的浓度：水溶性固体样品先用1×PBS溶解至高浓度，后过滤除菌，再用细胞培养液稀释至相应的浓度；非水溶性的样品先用DMSO溶解至高浓度，再用细胞培养液稀释至相应的浓度，应保证最后培养液中所含的DMSO浓度不超过1%。5.5第一次换液：铺好的6孔板在37℃，5%CO,培养箱中放置20-24小时后，将细胞培养液换成含有受试样品的培养液，每孔2mL，继续培养48小时。注：阴性对照组仅含细胞培养液，阳性对照组需要加入含有阳性物质的细胞培养液5.6第二次换液：第一次换液48小时后，重复步骤5.4，更换细胞培养液，每孔调整为加入3mL含相应样品的培养液，在37℃，5%CO2培养箱中继续培养。5.7第三次换液：第二次换液72小时后，重复步骤5.4，更换细胞培养液，每孔加入3mL含样品的培养液，在37℃，5%CO2培养箱中继续培养。5.8检测：第三次换液48-72小时后（细胞融合率达到90%以上），测定细胞黑素含量。用1XPBS洗两遍细胞，吸去PBS，每孔加入200uL0.25%胰酶消化细胞，放入CO，培养箱中消化5分钟。分两次加入2mLPBS吹打细胞，将细胞收集入离心管中，4000rpm离心5分钟。尽量吸净离心管中PBS残液，在每管中加入200μL的黑素提取液，震摇均匀，放入80℃水浴中加热1小时。冷却后，适度离心下管壁液滴，吹打均匀，吸取各离心管中的150L溶液，移入96孔板中，酶标仪检测各孔405nm处吸光度结果计算
计算黑素合成抑制率：
抑制率（%）
(1）式中：
T受试样品孔吸光度：
C一阴性对照组吸光度的3次平均值：Co黑素提取液本底吸光度。
7试验有效性验证
￥100
7.1每批次试验都须加入阳性对照组，要求每批次测试阳性对照均能检出抑制B16细胞合成黑素的效果，且与阴性对照相比，具有统计学差异，则认为试验系统有效。阳性对照可选择曲酸。7.2统计酶标仪测得的各组平行孔间吸光度的标准差（StandardDeviation，SD），并计算变异系数（CoefficientofVariation，C.V），C.V值须≤20%，则认为试验平行性有效。8.结果报告