【团体标准】 水产品中喹诺酮类药物残留的快速检测 胶体金免疫层析法

ICS65.060.99
浙江省农产品质量安全学会团体标T/ZNZ029—2020
水产品中喹诺酮类药物残留的快速检测胶体金免疫层析法
Rapid detection of quinolones residues in aquatic products浙江依标
-Colloidalgold immunochromatographicmethod2020-09-15发布
浙江省农产品质量安全学会
2020-10-15实施
本文件按照GB/T1.1—2020给出的规则起草。本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。T/ZNZ029-2020
本文件起草单位：浙江省水产技术推广总站、杭州市农业科学研究院、杭州南开日新生物技术有限公司、北京六角体科技发展有限公司。全洲圈农4
本文件主要起草人：王扬、柯庆青、柳爱春、桑丽雅、贝亦江、何欣、王鼎南、周钦、孔俏丹、丁雪燕。
本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。水产品中喹诺酮类药物残留的快速检测1范围
T/ZNZ029-2020
胶体金免疫层析法
本文件规定了水产品中喹诺酮类药物残留的免疫胶体金快速筛查检测方法本文件适用于鱼、虾、蟹、龟鳖、贝类等水产品肌肉等可食部分中喹诺酮类药物残留的快速筛查检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用手本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T30891-2014水产品抽样规范农业部1077号公告-1-2008水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
3术语及定义
本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
本方法应用竞争抑制免疫层析原理。试样中喹诺酮类药物，经有机试剂提取、净化、吹干、复溶后后滴加在喹诺酮类免疫胶体金快速检测试剂条加样孔中，样品中喹诺酮类药物与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，未被喹诺酮类药物结合的抗体与检测线（T线）上的抗原反应显色，已与喹诺酮类药物结合的金标抗体则不能与检测线上的抗原结合，通过T线后，与控制线（C线）上的二抗反应显色。用胶体金读卡仪或目测比较板上控制线（C线）和检测线（T线）上红色条带的有无及颜色相对深浅，对样品中喹诺酮类药物含量进行定性判定。加样孔
对服线
检测线
免疫胶体金快速检测试剂条测定示意图5试剂和材料
5.1乙腈（C2H3N）
5.2正已烷（CeH14）
T/ZNZ029-2020
5.3PBST缓冲液：溶解8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)、0.24g磷酸二氢钾、0.5mL吐温-20于800mL水中，加水溶解并定容至1000mL，经121℃灭菌15min。5.4喹诺酮类药物标准物质，中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，各组分纯度≥99%。
喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称
洛美沙星
培氟沙星
氧氟沙星
诺氟沙星
恩诺沙星
环丙沙星
英文名称
Lomefloxacin
Pefloxacin
Ofloxacin
Norfloxacin
Enrofloxacin
Ciprofloxacin
注1：或等同可溯源物质。
CAS登录号
98079-51-7
70458-92-3
82419-36-1
70458-96-7
93106-60-6
85721-33-1
分子式
CHiF2N,O,
ChH2FNO
CrsHaoFN04
ChHFNO
C9HnFNo
相对分子量
5.5喹诺酮类药物混合标准物质标准溶液：分别精确称取洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星恩诺沙星、环丙沙星标准物质(5.4)各0.010g，加入甲酸2.0mL，用甲醇溶解，定容到100mL，配成100μg/mL的标准混合储备溶液，于-18℃保存，有效期12个月；移取适量标准储备溶液，用甲醇稀释成20ng/mL中间浓度标准液，于4℃保存，有效期3个月：使用时，用甲醇稀释中间浓度标准液，配成适当浓度的标准使用溶液，现配先用。5.6喹诺酮类药物免疫胶体金快速检测试剂条：密封包装，干燥阴凉处保存，用前恢复至室温（20℃土5℃），即开即用。若试剂条需要验证时，具体方法和性能指标见附录A。本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。5.7除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的二级水。6仪器和设备
6.1电子天平：感量0.01g和0.001g。6.2均质机：转速≥8000r/min。6.3离心机：转速≥4000r/min。6.4氮气或空气吹干仪：加热温度≥75℃。6.5微量移液器：10μ100μL，100μ~1000。2
高压灭菌锅。
6.7胶体金读卡仪（必要时）
7测定步骤
7.1抽样
按照GB/T30891要求进行抽样，参考附录表B.1填写采样信息记录。7.2试样制备
T/ZNZ029-2020
按照GB/T30891-2014附录B规定进行各类水产品制样，将样品分割成不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混合，用均质后制成试样。将试样分成检样和备样两份，并做标记，每份不少于20g：检样立即测试或-18℃以下冷冻待测，备样-18℃以下冷冻保藏，有效期不超过3个月。7.3提取和净化
称取2.00g均质后的样品于5mL离心管中，加入3mL乙睛（5.1），剧烈振荡3min，室温下，于4000r/min离心5min：移取2mL上清液于5mL离心管中，在75℃下用氮气或空气吹干；依次加入0.3mL正已烷（5.2）和0.3mLPBST缓冲液（5.3），加盖，上下缓慢颠倒20次：静置分层后，吸取下层溶液待测。
7.4测定
喹诺酮类药物免疫胶体金快速检测试剂条（5.5），恢复室温后，从包装袋中取出，置于水平台面上。吸取7.3中待测液的下层溶液100μ，加至喹诺酮类药物免疫胶体金快速检测试剂条的加样孔中，在3min～5min内读取检测结果。7.5质控试验
每批样品应同时进行空白试验和阴性、阳性对照质控试验。7.5.1空白试验
每批样品需做一孔空白对照，以PBST缓冲液（5.3）代替试样提取液，按7.4进行。7.5.2阴性对照
称取空白样品，按7.3和7.4进行。7.5.3阳性对照
在空白样品加入一定量喹诺酮类药物混合标准溶液（其含量≥检测限），按7.3和7.4进行。8结果判断及表述
8.1试剂条有效性判定
8.1.1有效检测试剂条：空白对照控制线（C线）和检测线（T线）均出现红色条带，而且T线颜色达到或深于C线（如图2-1），则检测试剂条有效，可进行检测：3