【团体标准】 水产品中氯霉素残留的快速检测 胶体金免疫层析法

ICS 65.060.99 B 90 浙江省农产品质量安全学会团体标准 T/ZNZ 030-2020 水产品中氯霉素残留的快速检测 胶体金免疫层析法 Rapid detection of chloramphenicol residues in aquatic products - Colloidal gold immunochromatographic method 2020-09-15 发布 2020-10-15 实施 浙江省农产品质量安全学会 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020给出的规则起草。 本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位：浙江省水产技术推广总站（浙江省渔业检验检测与疫病防控中心）、杭州市农业科学研究院、杭州南开日新生物科技有限公司、江苏美正生物科技有限公司。 本文件主要起草人：王扬、桑丽雅、柯庆青、赵芸、周以琳、刘超、李诗言、沈清、陆炜、国依复、吴洪喜。 本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 1 范围 本文件规定了水产品中氯霉素残留的免疫胶体金快速筛查检测方法。 本文件适用于鱼、虾、蟹、龟、贝类等水产品肌肉等可食部分中氯霉素残留的快速筛查检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20756 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 GB/T 30891-2014 水产品抽样规范 农业部958号公告-13-2007 水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定 气相色谱法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 本方法应用竞争抑制免疫层析原理。样品经有机试剂提取、净化、浓缩、复溶后，滴加在氯霉素免疫胶体金快速检测试剂条加样孔中。样品中氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，未被氯霉素结合的抗体与检测线（T线）上的抗原反应显色。用胶体金读卡仪或目测比较板上控制线（C线）和检测线（T线）上红色条带的有无及颜色相对深浅，对样品中氯霉素含量进行定性判定。 图1 免疫胶体金快速检测试剂条测定示意图（包含：对照线、检测线、加样孔、覆膜等结构） 5 试剂和材料 5.1 乙酸乙酯（C₄H₈O₂） 5.2 正己烷（C₆H₁₄） 5.3 氯霉素标准物质（C₁₁H₁₂Cl₂N₂O₅）：CAS号56-75-7，分子量为323.1294，纯度≥99.5%。 5.4 氯霉素标准溶液：精确称取0.010g氯霉素标准物质（5.3），用甲醇溶解，定容到100mL，配成100μg/mL的标准储备溶液，于-18℃保存，有效期12个月；移取适量标准储备溶液，用甲醇稀释成20ng/mL中间浓度标准液，于4℃保存，有效期3个月；使用时，用水稀释中间浓度标准液，配成适当浓度的标准使用溶液，现配先用。 5.5 PBST缓冲液：溶解8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)、0.24g磷酸二氢钾、0.5mL吐温-20于800mL水中，加水溶解并定容至1000mL，过滤，经121℃灭菌15min。 5.6 氯霉素免疫胶体金快速检测试剂条：密封包装，干燥阴凉处保存，用前恢复至室温（20℃±5℃），即开即用。若试剂条需要验证时，具体方法和性能指标见附录A。本方法所述试剂、试剂条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。 5.7 除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的二级水。 6 仪器和设备 6.1 电子天平：感量0.01g和0.001g。 6.2 均质机：转速≥8000 r/min。 6.3 离心机：离心力≥4000 g。 6.4 氮气或空气吹干仪：加热温度≥60℃。 6.5 微量移液器：10μL~100μL，100μL~1000μL。 6.6 胶体金读卡仪（必要时）。 7 测定步骤 7.1 抽样 按照GB/T 30891要求进行抽样，参考附录表B.1填写采样信息记录。 7.2 试样制备与保存 按照GB/T 30891-2014附录B规定进行各类水产品制样，将样品分割成小块后混合，用均质机制成糜状，分成检样和备样两份并做好标记，每份不少于50g。检样立即测试或-18℃以下冷冻待测，备样-18℃以下冷冻保藏，有效期不超过3个月。 7.3 提取与净化