【团体标准】 《化妆品微生物检验方法（定性） ATP生物荧光增幅法》

IcS71.100.70
T/CAFFCI46-2021
化妆品微生物检验方法（定性）ATP生物荧光增幅法
QualitativeDetection of microorganisms in cosmeticsAmplifiedATPbioluminescencemethod2021-04-30发布
中国香料香精化妆品工业协会
2021-05-29实施
T/CAFFCI46-2021
本标准按照GB/T1.1一2020《标准化工作指导第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起本标准由中国香料香精化妆品工业协会提出。本标准由中国香料香精化妆品工业协会归口。本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院有限公司、中国食品药品检定研究院、联合利华（中国）有限公司、广州宝洁有限公司、查士利华微生物应用技术（上海）有限公司、广州浪奇实业股份有限公司、上海创元化将
本标准主要走
俊松、沈颖、林牙
化工业协
中国香
CAFFCI
刘艺茹、赖顺果、蔡
敏、曾四立。
T/CAFFCI46-2021
化妆品微生物检验方法（定性）ATP生物荧光增幅法本标准规定了化妆品中微生物的检验方法（定性）-ATP生物荧光增幅法的仪器和设备、培养基和试剂、检验步骤和结果判读。
本标准适用于化妆品中微生物的检验。2
规范性引用文件
下列文件中的
仅该日期对应的片
文件。
GB/T6682
《化妆品安纟
术语和定义
本文件没有需
缩略语
下列缩略语通
a）ATP三磷
b）ADP二磷
c）AK
d）TAT胰酪
中国香
CAFFCI
注日期的引用文件，
的修改单）适用于本
e）MTAT改良胰酪陈卵磷脂吐温肉汤（modifiedtrypticaseazolectintween）检验方法
5.1方法提要
样品稀释制成检液，经MTAT富集培养后，利用微生物体内的AK，催化外源添加的ADP底物生成ATP，实现ATP增幅：通过添加荧光素酶和荧光素，将ATP高能键在断裂过程中产生的能量转化为生物荧光信号：采用全自动荧光光度仪检测，根据生物荧光信号强度判断样品中是否含有微生物。5.2仪器和设备
T/CAFFCI46-2021
a）全自动荧光光度仪：需具备试剂添加、计时、读取荧光强度等功能；b）摇床培养箱：30℃土2℃，圆周式震荡，200r/min-250r/min：c）轨道式往复式摇床：振幅3.81cm，280r/min，或经验证具有同等破壁效果的摇床：d）生物安全柜：
e）漩涡混合器：0r/min-2500r/min；f）高压灭菌器：
g）电子天平：量程0g-200g，精确至0.1g：h）移液器：50μL、100μL、1mL、5mL；i）玻璃珠：
j）旋盖玻璃
k）量筒：10
1）烧杯：20
m）pH计。
5.3培养基和试齐
5.3.1通用要求
在没有注明其
5.3.2TAT基础培
5.3.2.1成分
胰蛋白陈
大豆卵磷脂
5.3.3MTAT培养基
5.3.3.1成分
中国香
级水。
CAFFCI
TAT基础培养基（见4.3.2）
硫代硫酸钠
组氨酸
蛋白陈
葡萄糖
1）CelsisAdvanceII光度计。给出这一信息是为了方便本文件的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2）TAT基础培养基仅用于后续MTAT培养基的配置。2
氯化钠
卵磷脂
吐温80
5.3.3.2制备
T/CAFFCI46-2021
先将卵磷脂和吐温80加入水中，加热溶解，再加入其他成分，溶解并混匀。使用6mo1/LNaOH或HC1溶液调pH值至7.0±0.2，121℃高压灭菌15min。5.3.4消泡剂
聚二甲基硅氧烷大颗粒乳液或其他等效产品。5.3.5ATP生物荧
含细胞裂解剂
5.4操作步骤此内容来自标准下载网
5.4.1通用要求
产品第一次位
试验步骤参见附
5.4.2检液制备
按照《化妆品
成1:10稀释的检
5.4.3增菌
取10mL1：
如产品抑菌性较
养基置于摇床培表
为培养基空白按
5.4.4上机检测
中国香
测试，产品影响测试
式样品制备方法，制
CAFFCI
1，制备成产品试样，
产品抑菌作用。将培
另取100mLMTAT作
在100mL产品试样中加入15g玻璃珠和0.1mL消泡剂，置往复式摇床上280r/min振荡处理30min。
取破壁处理后的产品试样50L上机检测（见4.2a），按照仪器和试剂使用说明书进行操作，完成ATP生物荧光增幅法检测。同时取培养基空白50uL两平行以同样方法上机检测。上机检测方法如下：
3）AMPiScreen试剂。给出这一信息是为了方使本文件的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。3