【国家标准(GB)】 发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法

ICS 67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T5009.49—2008
代替GB/T5009.49—2003
发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法Method for analysis of hygienic standardof fernented alcoholic beverages and their integrated alcoholic beverages2008-11-21 发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
本标准代替GB/T5009.49—2003《发酵酒卫生标准的分析方法》。本标准与GB/T5009.49~2003相比主要修改如下：修改了标准的名称；
修改了标推方法的名称；
增加了总二氧化硫的测定方法；删除了黄曲霉毒素 B, 的测定；删除了N-亚硝胺类（啤酒）的测定；删除了着色剂的测定。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标雅由中华人民共和国卫生部负责解释。GB/T5009.49—2008
本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、中国食品发酵工业研究院、辽宁省疾病预防控制中心、黑龙江省疾病预防控制中心、重庆市疾病预防控制中心。本标准主要起草人：杨大进、常迪、赵、康永璞、李敏、肖白曼、赵舰。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB5009.49—1985.GB/T5009.19---1996、G3/T5009.49—2003.合品成伴网httn：
1范围
GB/T5009.49—2008
发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法本标准规定了发酵酒及其配制酒中各项卫生指标的分析方法。本标准适用下发酵酒及其配制酒中各项卫生指标的分析。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用丁本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注月期的引用文件，其最新版本适用于本标谁。GB/T5009.1:2003食品卫生检验方法理化部分总则GI3/T5009.12食品中铅的测定
GB/T5009.34—2003食品中亚硫酸盐的测定GB/T5009.185苹果和山楂制品中展青霉素的测定3感官检查
应符合相应产品标准的有关规定。4理化检验
4.1总二氟化硫
4.1.1氧化法
4.1.1.1原理
在低温条件下，样品中的游离二氧化硫与过量的过氧化氢反应生成硫酸，再用碱标准溶液滴定生成的硫酸，由此可得到样品中游离二氧化硫的含量。在加热条件下，样品中的结合二氧化硫被释放，与过氧化氢发生氧化还原反应，通过用氢氧化钠标准溶液滴定生的硫酸，可得到样品中结合二氧化硫的含量。将结合二氧化硫与游离二氧化硫测定值相加，即得出样品中总二氧化硫的含量。4. 1. 1.2试剂
A.1.1.2.1过氧化氢（H2O2）:分析纯。4.1.1.2.2磷酸(HPO）：分析纯。4.1.1.2.3氢氧化钠(NaOH)：分析纯。4. 1. 1. 2. 4
甲基红(Ci His N,O,):指示剂。4.1.1.2.5次甲基蓝(CIH1aCIN.S·3H,O)：指示剂。4.1.1.2.6过氧化氢溶液(0.3%）：吸取1mL30%过氧化氢（开启后存于冰箱）用水稀释至100mL。使用当天配制。
4.1.1.2.7磷酸溶液（25%）：量取295ml.85%磷酸，用水稀释至1000mL。4.1.1.2.8氢氧化钠标准滴定溶液[c(Na0H）=0.01mo1/1]:按GB/T5009.1：2003的附录B配制与标定。存放在橡胶塞上装有钠石灰管的瓶中，每周重配。4.1.1.2.9甲基红~次甲基蓝混合指示液：溶液「：称墩0.1g饮甲基蓝，溶于乙醇（95%），用乙醇（95%）稀释至100mL。溶液Ⅱ：称取0.1g甲基红，溶于乙醇（95%）,用乙醇（95%）稀释至100mL。1
CB/T5009.49—2008
取50 mL溶液I、100ml.溶液I,混勾。4.1.1.3仪器
4.1.1.3.1二氧化硫测定装置，见图1.A
短颈球瓶；
三通连接管；
通气管；
D直管冷設管，
--弯管；
F——真空蒸馅接受管；
C——-梨形瓶;
H .气体洗瘀器;
I直角弯管(接真空泵或抽气管)。图1二氧化硫测定装置
4.1.1.3.2真空录。
4. 1. 1.4分析步骤
4.1.1.4.1游离二氧化硫的测定
4.1.1.4.1.1按图1所示，将二氧化硫测定装置连接妥当，1管与真空泵或抽气管）相接，D管通入冷却水。取下裂形瓶（G)和气体洗涤器（H）,在G瓶中加人20mI.过氧化氮溶液、H管中加入5mL过氧化溶液，各加3滴混合指示液后，溶液立即变为紫色，滴人氢氧化钠标准溶液，使其额色恰好变为橄榄绿色，然后重新安装妥当，将A瓶浸人冰浴中。4.1.1.4.1.2吸取20.00mL样品（液温20℃士0.1℃），从C管上口加入A瓶中，随后吸收10mL磷酸溶液(4. 1. 1.2. 7),亦从C管上口加人A瓶中。4.1.1.4.1.3开启真空泵，使抽人空气流量1000mL/min~1500mL/mmin，抽气10in1。取下G瓶，用氢复化钠标准滴定溶液(4.1.1.2.8)滴定至重现榄绿色即为终点，记下消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。以水代替样品做空白试验，操作同上。一般情况下，II管中溶液不应变色，如果溶液变为紫色，也需用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至橄榄绿色，并将所消耗的氛氧化钠标准滴定溶液的体积与G瓶消耗的氢氧化钠标罹滴定溶液的体积相加。2
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4. 1.1.4. 1.4结果计算
样品中游离二氧化蔬的含量按式(1)计算。X=×(VV)×32×1 000
式中：
样品中游离二氧化硫的含量，单位为毫克每升（mg/L）；氢氧化钠标滴定溶被的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)；测定样品时消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mI.)；V.wwW.bzxz.Net
空白试验消耗的氢氧化钠标准滴定辫液的体积，单位为毫升（mI.)：32…--二氧化硫的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol)；20.吸取样品的体积，单位为毫升（mL）。计算结果保留三位有效数字。
4.1.1.4.1.5精密度
GB/T 5009.49—2008
（1）
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4. 1.1. 4. 2结合二氧化硫的测定4.1.1.4.2.1继4.1.1.4.1测定游离二氧化硫后，将滴定至橄榄绿色的G瓶重新与F管连接。拆除A瓶下的冰浴，用温火小心加热A瓶，使瓶内溶液保持微沸。4.1.1.4.2.2开启真空录，以下操作同4.1.1.4.1.3。4. 1. 1. 4.2.3计算
同4.1.1.4.1.4，计算结果为结合二氧化硫含量。4. 1. 1. 4. 3结果计算
将游离二氧化硫与结合二氧化硫的测定值相加，即为样品中总一氧化硫含量。4.1.2直接碘量法
4.1.2.1原理
在碱性条件下，结合态二氧化硫被解离出来，然后再用碘标准滴定溶液滴定，得到样品中总氧化硫的含量。
4.1.2,2试剂
4.1.2.2.1氢氧化钠溶液(100g/L)4. 1. 2. 2. 2硫酸落液(1十3):取 1体积浓硫酸缓慢注入 3 体积水中。4.1.2.2.3碘标准滴定溶减
Iz=0.02mol/1称取13g碘及35g碘化钾，溶于100mL水中稀释至1000mL.，摇勾，贮存于棕色瓶中。标定后，再准确稀释5倍。4.1.2.2.4淀粉指示液（10g/L）：称取1g淀粉，加5mL水使其成糊状，在搅拌下将糊状物加到90mL沸腾的水中，煮沸Imin～2rain，冷却烯释至100mL，再加人40g氯化钠。使用期为两周，4.1.2.3分析步骤
吸取 25.00 mL氢氧化钠溶液(4.1.2.2.1)于250 mL碘量瓶中,再准确吸取 25. 00 ml样品（被温20℃）,并以吸管尖插人氢氧化钠溶的方式，加入到碘量瓶中,摇匀，盖塞。静置15 min后，再加入少量碎冰块、1 mI. 淀粉指示液(1. 1. 2. 2.1)、1C mL 疏酸溶液(1. 1. 2. 2. 2),摇匀,用碘标准滴定溶被（4.1.2.2.3)迅速滴定至炭蓝色，30s内不变即为终点，记下消耗碘标雅滴定溶液的体积（V）以水代替样品做空白试验，操作同工.。4.1.2.4结果计算
样品中总二氧化硫的含量按式(2)计算。X - eX(V- Vo)X 32
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（2）
CB/T 5009.49—2008
式中：
X一一样品中总二氧化硫的含最,单位为毫克每升(g/L);C-碘标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升（mnl/L)V.測定样品消耗碘标推滴定熔液的体积，单位为毫升（mL);V。—空白试验消耗碘标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL)；32二氧化硫的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol)；25——吸取样品的体积,单位为辜升(mL)。计算结果保留三位有效数字。
4.1.2.5精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得趣过算术乎均值的10%。4.1.3直接蒸馏法
按GB/T5009.34—2003的第二法操作。4.2铅
按 GB/T 5009.12操作。
4,.3展青霉素
按GB/T5009,185操作。
4.4甲醛
4.4.1原理
甲醛在过量乙酸铵的存在下,与乙酰丙酮和氨离了牛成黄色的 2,6-二甲基-3,5-二乙酰基-1,4-二氢吡啶化合物,在波长415 Ⅱm处有最大吸收，在一定浓度范围，其吸光度值与甲醛含成正比，与标准系列比较定量。
4.4.2试剂
4.4.2. 1乙酰丙酮(CsHO,):分析纯。4. 4.2.2乙羧铵(C,H,NO）:分析纯。4.4.2.3乙酸(C,H,CO)；分析纯。4.4.2.4甲醛(CH,O)：分析纯。
4.4.2.5硫代硫酸钠(NazS,03·5Hz0)：基准物质。4.4.2.6
碘（I）：分析纯。
淀粉(C.HnO,):指示剂。
硫酸(H2SO）:分析纯。
4.4.2.9氢氧化钠(NaOH):分析纯。饿酸（H,PO):分析纯。
4. 4.2.10
4. 4. 2. 11 乙酰丙酮溶液:称取新蒸馅乙酰丙酮 0. 4 g 和乙酸铵 25 g、乙酸 3 mL 溶于水中,定容至200 mL备用,用时配制。
4. 4.2. 12 甲醛:36%~38%。
硫代硫酸钠标难溶液(0.1000 mal/L):见 GB/T5009.1-—2003的第B.15章。4. 4. 2. 13
4. 4.2. 14碘标准溶液(0.1 mo1/L):见 GB/T 5009.1—2003的第B,13章。4.4.2.15淀粉指示剂（5g/L）：称取0.5g可溶性淀粉，加人5mL水，搅勾后缓缓倾人100ml.沸水中，随加随搅拌，煮沸2m证，放冷，备用。此指示剂应临用时现配。4.4.2.16硫酸溶液(1mul/L)：最取3Uml-硫酸,缓缓注人适量水中,冷却至室凝后用水稀释率1000tnL摇勾。
4.4.2.17氢氧化钠溶液(1mo1/L)：吸取56mL澄清的氨氯化钠饱和溶液，加适量新煮沸过的冷水至1000ml，摇匀。
4.4.2.18磷酸溶液（200g/L.）：称取20g磷酸，加水稀释至100mL，混勺。GB/T 5009.49——2008
4.4.2.19甲醛标准溶液的配制和标定：吸取 36%~38%甲醛溶液7.0mL,加入 1 mol/L硫酸0.5mL，用水稀释至250mL，此液为标准溶液。吸取上述标雅溶液10.0tmL于100mL容量瓶中，加水稀释定容。再吸10.0mL稀释溶液于250mL碘量瓶中，加水90mL、0.1mol/L碘溶液20mL和1mol/L氢氧化钠15mL,摇匀,放置15rri1。再加人1mol/L硫酸溶液20mI.酸化，用0.1000mo1/L硫代硫酸钠标推溶液滴定至淡黄色，然后加约5 g/L淀粉指示剂 1 ml.,继续滴定至蓝色去即为终点。同时做试剂空白试验。
甲醛标准溶液的浓度按式(3)计算。X (V -V,)X X15
式中;
甲醛标准溶液的浓度，单位为亳克每毫升（mg/mL)；空试验所消耗的硫代硫酸钠标推溶液的体积，单位为毫升（mL)；滴定甲醛溶液所消耗的硫代硫酸钠标溶液的体积，单位为毫升(mI)；硫代硫酸钠标准溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；与1.000mo1/L硫代硫酸钠标准溶液1.0mL相当的甲醛的质量，单位为毫克（mg）。用上述已标定甲醛浓度的溶液，用水配制成含中醛1μg/mL的甲醛标推使用液。4.4.3仪器
4.4.3.1分光光度计。
4.4.3.2水蒸气蒸馏装置。
4.4.3.3500mL蒸馅瓶。
4.4.4分析步骤
4.4.4.1试样处理
吸取已除去二氧化碳的啤酒25mL移入500mL蒸馏瓶中，加200g/L磷酸溶液20mL于蒸馏瓶接水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏山液于100mL容量瓶中（约100mL)冷却后加水稀释至刻度。4.4.4.2测定
精密吸瑕1 g/mL 的甲醛标摊溶液各 0. 00 mL.0. 50 ml、1. 00 mL,2.00 ml. z3.00 ml-4. 00 mL,8. 00 mL于 25 rmL, 比色笋中,加水至 10 mL。吸取样品罐出液10 mL移人 25 mL比色管中。标准系列和样品的比色管中,各加入乙酰丙酮溶液2 mL,摇匀后在沸水浴中加热 [0 min,取出冷却,于分光光度计波长 415 nm 处测定吸光度,绘制标准曲线。从标准曲线上套出试样的含量。4.4.5结果计算
试样中甲醛的含量按式(4)计算。x=
x-试样中甲醛的含量，单位为毫克每升(mg/L);m一从标推曲线上查山的相当的甲醛的质量，单位为微克（g)：测定样波中相当的试样休积,单位为毫升(m山)。计算结果保留两位有效数字。
4.4.6精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。品伙伴网
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开本 880×1230 1/16
印张0.75字数12千字
2009年3月第一次印刷
2009年3月第一版
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