【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

ICS 07. 100. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.8--2008
代替（B/T4789.82003
食品卫生微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
Microbiological exarnination of food hygiene--Examination of Yersinia enterocolitica2008-11-21发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
中华人民共利
国家标准
食品卫生微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
GB/T 4789. 8 --2008
中国标准出版社出版发行
北京复兴门外三里河北街16-号
邮政编码：100015
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电话：6852394668517548
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开本880×1230
印张 0.75
字数 11千字
2009年3月第一次印刷
2009年3月第－版
书号：155066：1-36034
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GB/T 4789.8—2008
本标雅代替GB/T1789.8-2003《食品卫生微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验》。本标准与GB/T4789.82003相比主要修改如下：操作步臻6.1中4℃冰箱冷增菌改为26℃±1℃，18h～72h；操作步骤6.7生化鉴定增加了：API20E利tVITEKGNI：一增加了附录 A\培养基和试剂”。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由中华人民共和国卫牛部挺山井归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准负责起草单位：江苏省疾病预防控制中心.中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准参加起草单位：浙江省疾病预防控制中心、河南省疾病预防控制中心、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、南京市疾病预防控制中心。本标准主要起草人：袁宝君、刘秀梅、戴建华、沈赞、梅玲玲、廖兴广、祝长青、陈晓蔚、田静.本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB4789.8-1984、GB/T4789.81994.GB/T4789.8—2003。合品成伴网httn：
1范围
食品卫生微生物学检验
小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
GB/T 4789.8—2008
本标推规定了食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocotitica）的检验方法。本标准适用丁食品和食源性疾病样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检验。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验3设备和材料
除微作物实验室常规尤菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1
冰箱.2℃~5℃
3.2恒温培养箱：26℃±1℃、36℃+1℃。3.3显微镜：10×~100×。
均质器或灭菌乳钵。
3.5天平：感量0.1g。
灭菌试答：16mm×160mm，15mm×100m灭菌吸管：1mL（具0.01ml.刻度）、10trL（具0.1mL刻度）。3.7
3.8火菌锥形瓶：200mL、500mL.3.9灭菌培养Ⅲ：直径90mm。
3.10全自动细菌生化鉴定仪，如VITEK\4培养基和试剂
改良磷酸盐缓冲液见第A,1章。
4. 2 CIN-1 培养基:见第 A. 2 章。改良 Y培养基：见第A,3章。
4.4改良克氏双糖培养基：见第A.4章4.5糖发酵管:见第 A.5 章。
4.6鸟氮酸脱羧酶试验培养基:见第A.6章。4.7半固体琼脂：见第A.7章。
4. 8 缓冲葡萄糖蛋白膝水「甲基红(MR)和 V-P 试验用]:见第 A. 8 章4.9碱处理液：见第A.9章。
4.10尿素培养基：见第A.10章。API20E生化鉴定试剂盒或VITEKGNI*生化鉴定卡!，4.11
1）由法国生物梅里埃公司提供的产品商品名。给出这一信息是对了方便本标推的使旧者，并不表示对该产品的认可。如果其弛等效产品具有相同的效果，刻可使用这些等效的产品，1
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5检验程序
小肠结肠炎邪尔森氏菌检验程序见图1，祥品25g（或25mI.）~225mL改良磁酸盐缓冲液26 ℃±1 ,48 h-72 h
肉及其制品,其他食品
4. 5 ml. 碱处埋液+U. 5 InL 样液,作用接种CIN-I,改良Y培养基
26 C±1 ℃
48h±2h
挑取可疑菌落，墩良克氏双糖试验26 ℃=1℃
尿素酶试验
26 ℃±1 ℃bzxZ.net
半固体动力战验
26 Y--1 C,24 36 C-1 C,24 h
尘化鉴定
AP120E
6操作步骤
6.1增菌
VIIEK GNI+
常规生化
2 h~4 h
图1小豚结肠炎耶尔森氏菌检验程序乳及其制品
血清分型
（可选做）
以无菌操作称取25g（或25m）样品放入含有225mL改良磷酸盐缓冲液的无菌均质杯或均质袋2
ht
GB/T 4789.8—2008
中，以8000r/min均质1trii或拍击式均质器均质1min。液体样品或粉末状样品，应振荡混勾。于26 ±1 ℃增菌 48 h~72 h。
6,2臧处理
除乳及其制品外，其他食品的增菌液0.5mL与碱处理液4.5mL充分混合15s。6.3分离
将乳及其制品增菌液或经过碱处理的其他食品增菌液分别接种CIN-1琼脂平板和改良Y琼脂乎板，于26℃士1℃培养48h主2h，典型菌落在CIN-1琼脂平板上为红色牛眼状菌落，在改良Y琼脂乎板上为无色透明、不粘稠的菌落。6.4改良克氏双糖试验
分别挑取上述可疑菌落3个~5个，接种改良克氏双糖斜面，丁26C士1℃培养24h，将斜面和底部皆变黄不产气者做进一步的生化鉴定。6. 5 尿素酶试验和动力观紊
将改良克氏双糖的可疑培养物接种到尿素培养基上，注意接种最要大，挑取一接和环，振摇儿秘钟，于26℃+1℃培养2h～4h，然后将阳性者接种两管半固体，分别于26℃士1℃和36℃上1℃忆温培养箱中培养24h。将26有动力的可疑菌落接种營养琼脂平板，进行苹兰氏染色和生化试验，6.6革兰氏染色镜检
小肠结肠炎耶尔森氏菌呈革兰氏阴性球杆菌，有时呈椭圆或杆状，大小为（0.8m～3.0μm）×0.8μm.
6.7生化鉴定
6.7.1常规牛化鉴定：从营养琼脂平板上挑取单个菌落做生化试验，所有的生化反应皆在26℃土1℃培养。小肠结肠炎耶尔森氏菌的主要生化特性以及与其他菌的区别见表1。表1小肠结肠炎耶尔森氏菌与其他相似菌的生化性状鉴别表小肠结肠炎
动（26℃）
尿素酶
V-P试验(26 )
鸟氨酸脱羧酶
锦子糖
山梨醇
甘露醇
鼠李糖
耶尔森氏菌
Yersinia
enteracotitirn
中间型耶
尔森氏菌
Yersinia
intermedia
注：「阳性；一阴性d有不同生化型。6.7.2生化鉴定系统
弗氏耶
尔森氏茵
Yersinia
frederiksenti
点氏耶
尔森氏菌
Yersinia
Bristensenii
假结核
耶尔森抚菌
Yersinia
peudotubercnlasis
鼠疫耶
尔森氏菌
Yersinid
pestis
可选择使用两种生化鉴定系统（API20E或VITEKGNI+）中任一种，代替常规的生化鉴定，6.7.2.1API20E：从营养琼脂平板上挑取单个菌落，按照API20F操作手册进行并判读结果。6.7.2.2VITEK全自动细菌生化分析仪：从营养琼胎平板上挑取单个菌落，按照VITEKGNI-操作手册进行并判定结果，
bt
GB/T4789.8—2008
血清型鉴定
除进行生化鉴定外，可选择做血清型鉴定。具体操作方法按GB/T4789.4中沙门氏菌O因子血消分型。
7结果报告
综合以上生化特性报告结果，报告25g(或25mL)样品中检或术检出小肠结肠炭炎耶尔森氏菌。http://foodmate.net....Y.
A. 1改良磷酸盐缓冲液
厦.1.1成分
磷酸氢二钠（NaHPO,）
磷酸二氢钠(NaH,PO,·H,O)
氯化钠(NaCI)
三号盐
山梨醇
A. 1. 2制法
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
GB/T 4789.8—2008
将磷酸盐及氯化钠溶丁蒸馏水中，再加人三号胆盐及彤梨醇,溶解后校正PH为7.6,分装试管，于121C高压灭菌15min,备用.
A.2CIN-1 培养基
A,2、1基础培养基：
酵母浸膏
甘露醇
氯化钠
去氧胆酸钠
硫酸镁（MgSO·7H.0)
燕馏水
pH7. 5±0. 1
950 mL
将基础培养基于121 ℃高压灭菌 15 min,备用。A,2.2lrgasan：以95%的乙醇作溶剂，落解二莱醚，配成0.4%的溶液，待基础培养及冷至80℃时，加人1 mL匀。
A,2. 3 冷率 50 ℃时,加入:
中性红(3 mg/mL)
结晶紫(0.1mg/mL）
头孢菌素（1.5mg/mL）
新牛霉素(0.25 mg/mL）
最后不断搅拌加人10.0 L的10%氯化锶，倾注血，A.3改良Y培养基
A.3. 1成分
蛋白陈
氯化钠
草酸钠
http:/
wunwfooc
atenet
GB/T 4789.8—2008
去氧胆酸钠
号胆盐
丙酮酸钠
孟加拉红
水解酪蛋白
蒸馏水
A.3.2制法
1 000 ml.
将上述成分混合，饺正pII7.1士0.1。于121℃高压灭菌15min，待冷至45℃左右时，注平血。A.4改良克氏双糖培养基
A.4.1成分
蛋白陈
牛肉耆
酵母膏
山梨醇
葡萄糖
氮化钠
柠檬酸铁铵
硫代硫酸钠
蒸馏水
A,4,2制法
1 000 mL
将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pFI。加人0.02%的酚红水溶液12.5nL，操匀，分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压火菌15min，放置高层斜面备用A.5糖发酵管
A.5.1成分
牛肉膏
氯化钠
磷酸氢二钠(NazHIPO,12H,O)
0.2%溴麝香草酚蓝溶液
蒸馏水
A.5.2制法
1000mL
A.5.2.1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加人葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
A.5.2.2其他各种糖发醇管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml,121℃高压灭菌15min。另将名种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加人100tmL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：熟糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。6
品伴网httn
A.5.3试验方法
GB/T4789.8-2008
从琼脂斜面上挑取少量培养物接种于26℃十！℃培养，一般观察2d~3d。迟缓反应需观察14 d~-30 d,
A, 6乌氨酸脱羧酶试验培养基
A,6.1成分
蛋白陈
酵母浸膏
葡翻糖
蒸馏水
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
L-鸟氨酸或 DL 鸟氨羧
A.6.2制法
1 000 mL
0.5 g/100 mL或 1 g/100 rml
除鸟氨酸以外的成分加热溶解后，分装，每瓶100mL，分别加人鸟氢酸。L-鸟氨酸按0.5%加人，IDI-鸟氨酸按1%加人。再饺正pH至6.8。对照培养基不加乌氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡,115℃高压火菌10 min。A.6.3试验方法
从琼脂斜面上挑取培养物接种，于26℃+1℃培养18h～24h，观察结果。鸟氨酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基呈紫色。阴性各无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管为黄色。A7半固体琼脂
A.7.1成分
蛋白陈
牛肉酱
氮化钠
蒸馏水
0.35g~0.4g
度.7.2制法
按以上成分配好，煮沸使溶解，并校止pH。分装小试管，121C高压灭菌15min，直立凝固备用。注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。A.8缓冲葡萄糖蛋白陈水(MR和V-P试验用）A.8. 1成分
磷酸氢二钾
葡葡糖
蒸馏水
A.8.2制法
1 000 tnl.
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭荫15min。http
GB/T 4789.8-2008
A.8.3甲基红(MR)试验
白琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于26℃士1℃培2d～5d，哈夫尼亚菌则应在22℃～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性，甲基红试剂配法：10mg甲基红游于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。A 8. 4 V-P 试验
用琼脂培养物接种本培养基中，于26℃土1℃培养2d～4d。哈失尼亚菌则应在22℃~-25℃境养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL剂40%氢氧化钾溶液0.2mI.,充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内山现红位，如为阴性，应放在36℃士1℃培养4h再进行观察。A.9碱处理液
A.9.10.5%氯化钠溶液
氯化钠
蒸馏水
A,9.20.5%氢氧化钾溶液
氢氧化钾
蒸馏水
A.9. 3制法
将0.5%氯化钠及0.5%氢氧化钾等量混合。A.10尿素培养基
A.10.1成分
酵母浸膏
磷酸氢钾(KH,PO)
磷酸氢二钠（NazHPO）
蒸馏水
A.10.2制法
1000mL
将上述成分于蒸馏水中溶解，校正pH为6.8土0.2。不要加热，过滤除菌，无菌分装于灭菌小试管中，每管为约3mL
A,10.3试验方法
挑取琼脂培养物接种在尿素培养基，26'C土1℃培养24h。尿素酶阳性者由十产碱而使培养基变为红色。
版权专有侵权必究
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