【国家标准(GB)】 食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数

ICS 07.100. 30
中华人民共和国国家标准
GB/T4789.39—2008
食品卫生微生物学检验
粪大肠菌群计数
Microbiological examination of food hygiene-Enumeration of faecal coliforms2008-11-21发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2009-03-01实施
GB/T4789.39—2008
本标准修改采用了美国食品药品管理局（FDA)《细菌学分析手册》第4章大肠杆菌和大肠菌群计数(20o2年)(Bacteriological Analytical Manual.Chaptcr 4:Fnuneration of Escherichia cuti and the co-liformbacteria,2002).
本标准与 FDA 方法的主要差别是：将样品制备时取样量50g（或50mL)修改为25g（或25mL）；.--将LST培养温度35℃士1℃修改为36℃±1℃；—将EC培养温度45.5℃10.2℃（一般食品）和41.5℃士0.2℃(贝类）统一为14.5℃±0.2℃。本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。本标准负责起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准参与起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、上海市疾病预防控制中心本标准主要起草人：刘秀梅、衰宝君,刘中学、卢行安、刘弘，陈敏、田静，品伙伴网
1范围
食品卫生微生物学检验
粪大肠菌群计数
本标推规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。本标准适用于各类食品中粪人肠菌群的计数。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标推
粪大肠茵群faccal coliform
GB/T 4789.39-2008
一群在44.5C培养24 h48 h能发酵乳糖,产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，摊断食品中肠道致病菌污染的可能性。
3设备和材料
除微生物实验案常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料妇下：3.1恒温培养箱：36℃+1℃。
3. 2 冰箱;2 ℃～5 ℃。
3.3恒温水浴箱:14.5 ℃±0.2 ℃。3.4天平：感量0.1g：
3.5均质器。
3.6振荡器。
3.7无菌吸管：1mL(具0.01tnL刻度）、10mL(具0.1mL刻度）或微量够液器及吸头。3.B无菌锥形瓶：容量500mL
3. 9无菌培养血:直径 90 mm：
3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。4
培养基及试剂
月桂基硫酸盐胰蛋白陈（laurylsulfatetryptose，L.sT)肉汤：见第A.1章。4.1
4.2EC肉汤(E.cotibroth).见第A.2章。4.3无菌生理盐水：称取8.5氯化钠于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，4.41mol/L氮氧化钠(NaOH)：称取10g氢氧化钠溶于1000mL馏水中。4.51mol/L盐酸（HC1)：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL。5检验程序
类人肠菌群检验程序见图1。
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GB/T 4789.39--2008
6操作步骤
6.1样品的稀释
25g（或25mL）样品1225ml稀释液，均质10倍系列稀释
月桂某硫酸盐胰蛋门藤（LST）肉肠36 ℃±1 ℃
不产气
18h±2h
EC肉汤
44.5 C±0. 2 C
不产气
肇大断菌群阴性管
查MPN表
报告结果
粪大肠荫群阳性管
医1粪大肠葡群MPN计数法检验程序6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000z/min～10000r/min均质1min-~2min，制成1:10样品匀液，或置225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置感有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的尤菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品勾液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaOH)或1mol/L盐酸(HCI)调节。
6.1.4用1mL尤菌吸皙或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入有9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1文1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1：100的样品勾液。6.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1tnL无菌吸节或吸头。从制备样品勾液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。6.2初发酵试验
每个样品，选择3个适官的连续稀释度的样品匀液（液体样品叫以选择原液），每个稀释度接种3管月住基硫酸热胰蛋白陈（LST)肉汤，每管接种1nL(如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃1℃培养24h土2，观察倒管内是否有气池产生，如末产气则继续培养至48h士2h。记录在2
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24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。6.3复发酵试验
用接种环从所有48 h上2h内发酵产气的LST肉杨管中分别取培养物1环,移种于45C EC肉汤管中。将所有接种的 EC肉荡管放入带盖的 44.5 ℃士0.2 ℃C恒i溢温水溶箱内,水浴的水面应高于肉泌培养基液面，培养24h士2h，记录EC肉汤管的产气情况。产气节为粪大肠菌群阳性，不产气为粪火肠菌群阴性。
6.4粪大肠菌群MPN计数的报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性臂数，查粪大肠菌群最可能数（MPN)检索表（见附录B)，报告每克（或毫升)粪大肠菌群的MPN值，3
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月桂基硫酸盐胰蛋白陈(LST)肉汤A.1.成分
胰蛋白陈或胰酪陈
氯化钠
磷酸氢二钾（K,IPO,）
磷酸二氢钾（KH,PO）
月桂基磺酸钠
蒸馏水
pH 6. 8±0. 2
A.1.2制法
附录A
(规范性附录）
培养基和试剂
1 000 mL
将上述成分溶解于燕馏水中，调节pI。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mI，121℃高压灭菌15 min。
A.2EC肉汤
A,2. 1 成分
胰蛋白陈或胰酪陈
3号胆盐或混合胆盐
磷酸氢二钾(K,HPO,）
磷酸二氢钾(KH,PO.)
氟化钠
蒸馏水
pH 6. 9±0. 1
A.2.2制法
1 000 mL
将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管8mL，121高压灭 15 min.
合品成伴网httn：/
ufoodmate.net
附录B
（规范性附录）
粪大肠菌群最可能数(MPN)表
每克（或亳升）检样中粪人肠菌群最可能数（MPN)的检索见表B.1。表B.1粪大肠菌群最可能数(MPN)检索表阳性管数
95%置信区间
阳性管数
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>1 100
95%置信区间
注1：本表采用3个稀释度[0.1g(或0.1mL),0.01g<或0.01mL)和0.001g(或0.001mL)],每个稀释度接种3管.
注 2：表内所列检样量如收用 1 g(或 1 nL)、0. 1 g(或 0. 1 L)和 U. U1 g(或 U. 0l IuL)时,表内数学应相应降低1倍如改用0.01g或0.01mL),0.001g(或0.001mL)、0.0001g（或0.0001mL)时则表内数字应相应增高10倍，其余类推。
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食品卫生微生物学检验
粪大肠菌群计数
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开本880×12301/16印张0.75字数 11千字2009年3月第一版
2009年3月第一次印别
书号：155066·1-36104定价14.00元如有印装差错出本社发行中心调换版权专有侵权必究bzxz.net
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