【国家标准(GB)】 饲料中异硫氰酸酯的测定方法

中华人民共和国国家标准
饲料中异硫氟酸酯的测定方法
Method for determination of isothiocyanatesin feeds
1主题内容与适用范围
本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸酯的测定方法GB 13087-91
本标准适用于配合饲料包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸酯的测定。第一篇气相色谱法
2原理
配合饲料中存在的硫葡萄糖苷，在芥子酶作用下生成相应的异硫鼠酸酯，用二氯甲烷提取后再用气相色谱进行测定。
3试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1二氯甲烷或氯仿(GB682)。
3.2 丙酮(GB 686)。
3.3pH7缓冲液：市售或按下法配制。量取35.3mL0.1mol/L柠檬酸（C.H.O，H2O)溶液，置入200mL定容瓶中，用0.2mol/L磷酸氢二钠(NazHPO·12H2O,GB1263)稀释至刻度，配制后检查pH值。3.4无水硫酸钠。
3.5酶制剂：将白芥（Sinapis alba L.）种子（72h内发芽率必须大于85%，保存期不超过两年）粉碎后，称取100g，用300mL丙酮（3.2）分10次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用400mL水分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混感液体，合并，于合并混悬液中加入400mL丙酮（3.2)沉淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮（3.2)洗沉淀5次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸酯。3.6丁基异硫氰酸酯内标溶液：配制0.100mg/mL丁基异硫氰酸酯[CH,(CH2),NCS)二氯甲烷或氯仿（3.1)溶液，贮于4℃，如试样中异硫氰酸酯含量较低，可将上述溶液稀释，使内标丁基异硫氰酸酯峰面积和试样中异硫氰酸酯峰面积相接近。4仪器、设备
4.1气相色谱仪：具有氢焰检测器。4.2氮气钢瓶：其中氮气纯度为99.99%。4.3微量注射器：5μL。免费标准bzxz.net
4.4分析天平，感量0.0001g。
国家技术监督局1991-07-16批准138
1992-04-01实施
4.5实验室用样品粉碎机。
4.6振荡器（往复，200次/min）。4.7具塞锥形瓶,25mL。
4.8离心机。
4.9离心试管：10ml。
5试样制备
GB13087—91
采集具有代表性的配合饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6测定步骤
6.1试样的酶解
称取约2.2g试样于具塞锥形瓶（4.7)中，精确到0.001g，加入5mLpH7缓冲液（3.3），30mg酶制剂（3.5），10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液（3.6)，用振荡器（4.6)振荡2h，将具塞锥形瓶（4.7)中内容物转入离心试管（4.9）中，离心机（4.8）离心，用滴管吸取少量离心试管（4.9）下层有机相溶液，通过铺有少量无水硫酸钠（3.4)层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。6.2色谱条件
6.2.1色谱柱：玻璃，内径3mm，长2m。6.2.2固定液：20%FFAP（或其他效果相同的固定液）。6.2.3载体：ChromosorbW，HP，80100目（或其他效果相同的载体）。6.2.4柱温：100℃。
6.2.5进样口及检测器温度：150℃。6.2.6载气（氮气）流速：65mL/min。6.3测定·
用微量注射器（4.3)吸取1~2uL上述澄清滤液，注入色谱仪，测量各异硫氰酸酯峰面积。7测定结果
7.1计算公式
-[(4/3× 99.15× S)+(4/4 × 113.18 × S,)X=
115.19×S。Xm
+(4/5 X 127.21 X S,)) X 1 000me
(1.15S.+ 0.98S+ 0.88S,) × 1 000s.x.m
式中：X一试样中异硫氰酸酯的含量，mg/kg；m试样质量.g#
-10mL丁基异硫氰酸酯内标溶液中丁基异硫氰酸酯的质量，mg：S。丁基异硫氰酸酯的峰面积，
S.—丙烯基异硫氰酸酯的峰面积;Sb—丁烯基异硫氰酸酯的峰面积；S，戊烯基异硫氰酸酯的峰面积，7.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到1mg/kg。·（1)
7.3重复性
GB13087-91
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值；在异硫氰酸酯含量小于或等于100rng/kg时，不超过平均值的15%。在异硫氰酸酯含量大于100mg/kg时,不超过平均值的10%。第二篇银量法
8原理
籽饼粕中存在的硫葡萄糖苷，在芥子酶作用下可生成相应的异硫氰酸酯。用水气蒸出后再用硝酸银-氢氧化铵溶液吸收而生成相应的衔生硫腺。过量的硝酸银在酸性条件下以硫酸铁铵为指示剂用硫氰酸铵回滴，再计算出异硫氰酸酯的含量。9试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。9. 1 乙醇(GB 679):95%(V/V )。9.2去泡剂：正辛醇(C.H1,OH)。9.36mol/L硝酸溶液：量取195mL浓硝酸（GB626），加水稀释至500mL。9.410%氢氧化铵溶液：取氨水（30%，GB631)100mL，加200mL水混匀。9.5硫酸铁铵溶液：称取100g硫酸铁铵［NH,Fe（SO,)2·12H2O,GB1279]，溶于500mL永中。9.60.1 mol/L硝酸银标准溶液：准确称取在硫酸干燥器中干燥至恒重的基准硝酸银16.987g，用水溶解后加水定容至1000mL。置棕色瓶中避光保存。9.70.1mol/L硫氰酸铵标准贮备液：称取7.6g硫氰酸铵（NH,CNS,GB660），溶于1000mL水中。按下法标定：准确量取10.00mL0.1mol/L硝酸银标准溶液（9.6），加1mL硫酸铁铵（9.5)指示剂和2.5mL6mol/L硝酸（9.3），摇动下用0.1mol/L硫氰酸铵标准贮备液滴定，终点前摇动溶液至完全清亮后，继续滴定至溶液所呈淡棕色保持30s。硫氰酸铵标准贮备液的摩尔浓度按式(2)计算：N-N.V
式中：N—一硫氰酸铵标准贮备液摩尔浓度，mol/L；N，--硝酸银标准溶液摩尔浓度，mol/L;V.硝酸银标准溶液的用量，mL；V--—消耗硫氰酸铵标准贮备液的体积，mL。（2）
9.80.01mol/L硫氰酸铵标准工作液：临用前将0.1mol/L硫氰酸铵标准贮备液（9.7)用水稀释10倍，摇匀。
9.9pH4缓冲液：称取42g柠檬酸(C.H.O,·H,O),溶于1L水中，用浓氢氧化钠溶液调节pH至4。9.10粗酶制剂：取白芥（Sinapis alba L.)种子（72h内发芽率必须大于85%，保存期不得超过两年），粉碎后用冷石油醚（沸程40~60℃）或正已烷脱脂，使脂肪含量不大于2%，然后再粉碎一次使全部通过0.28mm筛，放4℃冰箱可使用6周。10仪器、设备
10.1分析天平：感量0.0001g。
10.2恒温箱：温度范围30～60℃，精度±1℃；110
GB 13087- 91
10.3异硫氰酸酯蒸馏装置：见下图，其中a为500mL三角烧瓶（具塞），b为250mL圆底烧瓶（在70mL 处有一刻度)。
尺寸(mm）
漏斗10 mL
接口14/23
接口29/32
三角烧瓶a
圆底烧瓶250mL（70mL处有刻度）异硫氰酸酯蒸馅装置图
10.4冰水浴。
10.5沸水浴。
10.6三角烧瓶：100、500（具塞）mL。10.7容量瓶：100mL。
10.8移液管：10、25mL。
10.9吸量管：5、10mL。
10.10半自动滴定管：5mL，最小分度为0.02mL。10.11滤纸。
回流冷凝器,可与瓶b相配。
接口19/26
接口19/26
·接口29/32
11试样制备
GB 1308791
采集具有代表性的样品至少250g，四分法缩分至50g。若样品含脂率大于5%时需要事先脱脂，测定脂肪含量，若含脂率小于5%时，则进一步磨碎使其80%能通过0.28mm（40目）筛，混匀，装入密闭容器中，置一15℃保存备用。
12测定步骤
12.1称取试样2.2g于事先烘烤并精确称重至0.001g的烧杯中，103士2℃烘烤至少8h，在干燥器中冷却至室温后精确称重至0.001g。12.2试样的酶解
将上述烘烤过的试样全部转移至500mL三角烧瓶a中，加入100mLpH4缓冲液（9.9），同时加入0.5g粗酶制剂（9.10）。另取1个500mL三角烧瓶（10.6)加人100mLpH4缓冲液（9.9)和0.5g粗酶制剂（9.10），将三角烧瓶塞好塞子，置40℃恒温箱（10.2）中保温3h，中间不时轻摇几次。12.3蒸馏接收瓶准备
准确量取10.00mL硝酸银标准溶液（9.6)至250mL圆底烧瓶b中，并加入2.5mL氢氧化铵溶液（9.4）。将此瓶b与蒸馏装置（10.3)相连并置于冰水浴（10.4)中，冷凝器（10.12)末端必须没于硝酸银~氢氧化铵液中。
12.4蒸馏
将盛试样的三角烧瓶a冷至室温，加入几粒玻璃珠和几滴去泡剂（9.2），然后与蒸馏装置（10.3)相连，从上面漏斗中加入10mL95%乙醇（9.1），另加3mL乙醇（9.1)于接收瓶上的安全管中。缓慢加热蒸馏，至馏出液达到接收瓶b70mL刻度处。12.5试样测定
取下接收瓶b，将安全管中的乙醇（9.1)倒入此瓶中，将它与回流冷凝器（10.12)连接，于沸水中加热瓶中内容物30min，然后取下冷却至室温。将内容物定量地转至100mL容量瓶（10.7）中，用水洗接收瓶b2～3次，用水稀释至刻度，摇匀后过滤于100mL三角烧瓶（10.6)中，用移液管（10.8)取25mL滤液于另--100mL三角烧瓶（10.6)中，加lmL6moi/L硝酸（9.3）和0.5mL硫酸铁铵指示剂（9.5），用0.01mol/L硫鼠酸铵标准工作液（9.8)滴定过量的硝酸银，直到稳定的淡红色出现为终点。12.6空白测定
按同样测定步骤操作，但不加试样，得到空白测定值。13测定结果
13.1计算公式
X = 4× (V- V2) ×c× 56. 59 = c(Vi= V) × 226. 36 m
式中：X一一试样中异硫氰酸酯的含量，以每克绝干样中丁基异硫氰酸酯的毫克数表示；V,—空白测定所耗硫氰酸铵标准工作液的体积，mL，V2试样测定所耗硫氰酸铵标准工作液的体积，mL；c--—硫氰酸铵标准工作液的浓度，mol/L；m-—试样的绝干质量，g。
13.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到0.01mg/g。
13.3重复性
GB13087—91
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值：在异硫氰酸酯含量小于或等于0.50mg/g时，不得超过平均值的20%；在异硫氰酸酯含量大于0.50mg/g而小于1.00mg/g时，不得超过平均值的15%；在异硫氰酸酯含量等于或大于1.00mg/g时,不得超过平均值的10%附加说明：
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人汪傲、雷祖玉、冯学勤、李建凡、姜云侠、高振川。143
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。