【国家标准(GB)】 饲料中 恶唑烷硫酮的测定方法

中华人民共和国国家标准
饲料中唑烷硫酮的测定方法
Method for determination of oxazolidinethionein feeds
GB 13089--91
本标准参照采用国际标准ISO5504一1983《含油种子及其去油后饼柏中异硫氰酸酯和唑烷硫酮的测定》。
主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中瞩唑烷硫酮的测定方法。本标准适用于菜子饼粕和配合饲料中嗯唑烷硫酮的测定。2原理
饲料中的硫葡萄糖苷被硫葡葡糖苷酶(芥子酶EC 3. 2. 3.1)水解,再用乙醚萃取生成的嗯唑烷硫酮，用紫外分光光度计测定。
3试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1乙醚：光谱纯或分析纯。
3.2去泡剂：正辛醇(C.Hi,OH)。3.3pH7.0缓冲液：取35.3 mL 0.1mol/L柠檬酸(C,H:O,·H,O,HG 3—1108)溶液(21.01 g/L)于—个200mL容量瓶中，再用0.2mol/L磷酸氢二钠(GB1263)溶液调节pH至7.0。3.4酶源：用白芥（SinapisalbaL.）种子（72h内发芽率必须大于85%，保存期不得超过两年）制备。将白芥籽磨细，使80%通过0.28mm孔径筛子，用正己烷或石油醚（沸程40~60℃）提取其中脂肪，使残油不大于2%，操作温度保持30℃以下，放通风橱于室温下使溶剂挥发。此酶源置具塞玻璃瓶中4℃下保存，可用6周。
4仪器、设备
分析天平：感量0.0001g。
样品筛：孔径0.28mm。
4.3样品磨。
玻璃干燥器。
恒温干燥箱：103土2℃。
三角烧瓶：25、100、250mL。
容量瓶：25、100tmL。
烧杯：50mL
分液漏斗：50mL。
国家技术监督局1991-07-16批准1992-04-01实施
4.10移液管：2mL。
GB 1308991
4.11振荡器：振荡频率100次/min（往复）。4.12分光光度计：有10mm石英比色池，可在200300nm处测量吸光度。5试样制备
采集具有代表性的样品至少500g，四分法缩分至50g，再磨细，使其80%能通过0.28mm筛。6测定步骤
6.1称取试样（菜籽饼粕1.1g，配合饲料5.5g）于事先干燥称重（精确到0.001g）的烧杯中，放入恒温干燥箱（4.5)，在103土2℃下烘烤至少8h，取出置干燥器（4.4)中冷至室温，再称重，精确到0.001g。6.2试样的酶解此内容来自标准下载网
将干燥称重的试样全倒入一250mL三角烧瓶（4.6）中，加人70mL沸缓冲液（3.3），并用少许冲洗烧杯，使冷却至30℃，然后加入0.5g酶源（3.4)和几滴去泡剂（3.2），于室温下振荡2h。立即将内容物定量转移至100ml.容量瓶（4.7）中，用水洗涤三角烧瓶（4.6），并稀释至刻度，过滤至100mL三角烧瓶（4.6中，滤液备用。
6.3试样测定
取上述滤液（菜籽饼粕1.0mL，配合饲料2.0mL），至50mL分液漏斗（4.9）中，每次用10mL乙醚（3.1)提取两次，每次小心从上面取出上层乙醚。合并乙醚层于25mL容量瓶（4.7)中，用乙醚（3.1)定容至刻度。从200nm至280nm测定其吸光度值，用最大吸光度值减去280nm处的吸光度值得试样测定吸光度值AE。
6.4试样空白测定（菜籽饼粕此项免去，AB为零）按6.1、6.2、6.3同样操作，只加试样不加酶源（3.4)，测得值为试样空白吸光度值AB。6.5酶源空白测定
按6.1、6.2、6.3同样操作，不加试样只加酶源（3.4），测得值为酶源空白吸光度值Ac。7测定结果
7.1计算公式
X=(Ag Aj A)×C ×25 ×100 ×10- ×=4±-4-Ac× 20.5m
式中：X试样中嗯唑烷硫酮的含量，以每克绝干样中唑烷硫酮的毫克数表示；Ag试样测定吸光度值；
A试样空白吸光度值，
Ac--酶源空白吸光度值；
（p—转换因素，吸光度为1时，每升溶液中嗯唑烷硫酮的毫克数，其值为8.2；一试样绝干质量，g。
若试样测定液经过稀释，计算时应予考虑。7.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到0.01mg/g。
7.3重复性
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值：在唑烷硫酮含量小于或等于0.20mg/g时，不得超过平均值的20%；1.18
GB13089-91
在唑烷硫酮含量大于0.20mg/g而小于0.50mg/g时，不得超过平均值的15%；在嗯唑烷硫酮含量等于或大于0.50mg/g时，不得超过平均值的10%。附加说明：
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人李建凡、姜云侠、高振川。.9
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