【国家标准(GB)】 饲料中六六六、滴滴涕的测定

GB/T13090—1999
本标准是GB/T13090-1991《饲料中六六六、滴滴的测定》的修订版。本版本修订的技术内容如下：
--—标准英文名称：以《Determination of HCH and DDT in feeds》代替 GB/T 1309Q-—1991 中《Method for determination of BHC and DDT in feeds》。BHC 是 Benzen Hexachloride 的简称,现已改名为 HCH(Hexachlorocyclohexane);范围：增加了含量测定范围，并将六六六、滴滴递的名称、方法定量检测限(MLQ)列在表1中、显示出六六六的方法检测限是饲料卫生标准中规定的每千克样品中允许量0.3mg和0.4mg的1/60或1/80，滴滴递是0.2mg的1/20，完全满足了GB13078-1991饲料卫生标准的要求，提取方式：以振荡提取30min代替原国家标推在脂肪抽提器中回流提取6h，操作快捷简便，节省时间；
提取溶剂：以正已烷-丙酮（22+3)取代了正已烷-丙酮（1十1），降低了提取溶剂的极性.减少极性杂质的萃出，易于净化；
一标推溶液：补充规定了混合标准工作液的配制方法、浓度范围及存效期限；一柱层析净化方法：经过多次试验，证明不需预淋，可节约四分之三的正己烷，并试验了淋洗速度大致为50~~90滴/min时，淋洗效果好；一测定步骤：增加了仪器的调试、灵敏度和性能的检查步骤、补充了毛细管色谱柱检测技术，与最近的国际标准ISO6468：1996（E）《水中六六六、滴滴涕的测定》和ISO4389：1997（E)《烟叶中有机氯农药残留的测定》基本接轨；
重复性：根据不同含量范规定了有效位数和允许的相对偏差。自本标准实施之日起，同时代替GB/T13090—1991。本标准由中华人民共和国农业部和全国饲料工业标推化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）。本标主要起草人：韩华琼、范理、李伟格。150
1范围
中华人民共和国国家标准
饲料中六六六、滴滴递的测定
Determination of HCH and DDT in feedsGB/T 13090-- 1999
代替GB/T13090—1991
本标准规定了饲料中六六六的四种异构体和滴滴涕的四种衍生物的含量的气相色谱测定方法。本标准适用于配合饲料、植物性原料及鱼粉中六六六、滴滴涕异构体及衍生物（见表1)的检测。检测范围：每于克饲料中六六六为5ug～500μg，滴滴涕为10μg～1000μg。表1主分名称和方法定量检测限
国际系统名
通用名
六六六
甲体-六六六
乙体-六六六
丙体-六六六（林丹）
丁体-六六六
滴滴沸（DDT）
对，对\-滴滴依
邻，对\-滴滴涕
对、对\-滴滴滴
对，对-滴滴涕
(ISO 1750)
HCH(BHC)
α-HCH(α-BHC)
β-HCH(β-BHC)
化学名称（IUPAC\）
六氯环己烷（有下列四个异构体）1,3,5/2.4，6-六氯环己烷
1,2,4,5/3,6-六氯环已烷
y-HCH(-BHC或Lindane）1,2,3，4,5,6-六环己烷α-HCH(8-BHC)
P,p'-DDE
p,p'-DDD(TDE)
P,p'-DDT(DDT)
1）国际理论和应用化学联合会。2引用标准
1,2,3/4,5,6-六氯环已烷
二氯二苯基三氯乙烷（有下列四种衍生物)
1,1-二氯-2,2-双（4-氯苯基）乙烯1,1,1-三氯-2-(2-氯苯基)-2-(4-氯苯基）乙烷
1,1-二氯-2,2-双（4-氯苯基）乙烷1,1,1-三氯-2,2-双（4-氯苯基）乙烷方法定望检测限
(MLQ）
（每于克饲料中 μg）
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T8170—1987数值修约规则
GB/T14699.11993饲料采样方法
IS) 1750:1981 Pesticides and other agrochemicals---Common names3原理
样品中的六六六、滴滴涕采用含有少量丙酮的正已烷混合溶剂提取、过滤并定容，从中吸出一定量的提取液直接用硫酸酸化过的硅藻土微柱净化，正已烷洗脱液直接注人气相色谱仪，用电子捕获检测器检测，以外标法定性和定量。
国家质量技术监督局1999-08-10批准2000-02-01实施
4试剂
GB/T13090—1999
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水或相应纯度的水。4.1所有试剂在条件允许情况下，使用色谱纯的试剂。4.2异辛烷：配置标准溶液用，在六六六、滴滴涕出峰处应无干扰峰，最好选择优级纯或色谱纯的试剂。4.3正包烷：沸程67.5C~69.5C。4.4丙酮。
4.5提取液：正已烷-丙酮（22十3）。4.6发烟硫酸：含三氧化硫（SO3)20%~25%，优级纯。4.7浓硫酸：优级纯。
4.8磷酸。
4.9无水硫酸钠：500C烘4h，在高温烘箱中冷至200℃左右，放入于燥器中冷后密封备用。4.10吸附剂：柱层析用
硅藻士
孔径：177μm～600μm（30且～80目）；Celite 545 孔径:20 μm~45 μm。500C烘4h，在高温烘箱中放冷至200℃，置于干燥器中冷后密封备用。4.11脱脂棉：用丙酮浸泡30min后，倾去丙酮，再用正已烷浸泡30min，弃去正己烷，晾干备用。4.12六六六标准贮备液：PHCH=1.00mg/mL，国家标准物质研究中心制，贮于安中，低温及避光下保存，有效期壹年。
甲体-六六六（α-HCH)
乙体-六六六（β-HCH)
丙体-六六六(-HCH)
丁体-六六六（-HCH)
GBW(E)060081
GBW(E)066082
GBW(E)060083
GBW(E)060084
4.13滴滴涕标准贮备液：Pppr一0.100mg/mL，国家标准物质研究中心制，贮于安韶中，低温及避光下保存，有效期壹年。
P,p'-DDT
O,p'-DDT
p,p'-DDE
P,p\-DDD
GBW(E)060102
GBW(E)060103
GBW(E)060104
GBW(E)060105
4.14六六六中等浓度贮备液：PHCH=1.00ug/mL。将四支六六六标准贮备液（4.12），分别用异辛烷（4.2)在棕色容量瓶中稀释1000倍，密封贮放于暗处，4左右保存可稳定半年。
4.15滴滴沸中等浓度贮备液：PpDr=10.0μg/mL。将四支滴滴沸标准贮备液（4.13），分别在棕色容量瓶中用异辛烷（4.2）稀释10倍，密封贮放于暗处，4（左右保存可稳定半年。
4.16系列混合标准工作液：分别用移液管吸六六六中等浓度标准贮备液（4.14)α-HCH10.0mL，βHCH 30.0 mL，-HCH8.00mL,8-HCH 20.0mL；滴滴涕中等浓度标准贮备液（4.15)p，p-DDE2.00mL，0，p-DDT4.00mL，p，p-DDD2.00mL和，p-DDT4.00mL置于一只100mL棕色容量瓶中加异辛烷（4.2)定容。此液则为6号混合标准工作液（见表2），并由此液逐步稀释后制得至少五种不同浓度的系列混合标准工作液，贮于暗处4C左右保存不超过6个月。162
标准工作液
GB/T 13090--1999
六六六、滴滴涕系列混合标准工作液的质量浓度表2
α-HCH
[p-DDEop-DDT
pg/μL
p.p'-DRD.p-DT
注：六六六、滴滴涕标准溶液有毒性，需经浓氢氧化钾(KOH)或六价铬酸洗液漫泡后，才能洗涤。5仪器、设备
5.1气相色谱仪：配备有电子捕获检测器和数据处理仪。5.2色谱柱：
玻璃填充柱：2mX×3mm，内装1.5%OV17+2.0%QF,/GCQ［孔径：149μm～177μm（80~~100目)J或 1.6%0V17+6.4%0V210/Chromosorb W-HPL孔径:149 μm-~177 μm,(80-~100 目)]。毛细管色谱柱：弹性石英毛细管柱，CP-Sil8CB或SE54。柱长：25m或50m；内径：0.32mm或0.53mm；膜厚：0.25μm。5.3电动振荡器或超声波提取器。5.4天平：感量1mg。
5.5三角烧瓶（具塞）：100ml。5.6简形漏斗：内径2cm，高5cm。5.7
容量瓶（棕色）：100ml，50mL，25ml，10mL。5.8
移液管:10 mL,5 mlL,2mLl mL。玻璃研钵：中型。
层析柱：内径8mm～10mm，长15cm～20cm。上端带一筒形漏斗贮液槽，容量为30ml左右。5.11
研磨机：带孔径为420 um(40目）筛子。5.12
实验室常用仪器设备。
载气：高纯氮99.99%。
6采样和试样的制备
6.1采样：按GB/T14699.1的规定。6.2试样制备：将送至实验室的平均样品，经四分法缩分至250g，用研磨机（5.11)研碎，过孔径420um筛子，并装进密闭玻璃广口瓶中，在4℃左右避光保存备用。7步骤
7.1相色谱仪调试
7.1.1色谱条件（见表3）
检测器温度
进样口温度
柱箱温度
分流比
载气流速（N2）
补充气（N2）
7.1.2仪器灵敏度检查
GB/T13090—1999
填充柱
250℃
230℃
210℃
60 mL/min
毛细管色谱柱
300℃
4 mL/min~10 mL/min
20 mL/min-~25 ml./min
进1号混合标准工作液（4.16)1.0μL或5.0μL，应能分别读出8个峰的峰面积或峰高，并记下相应的保留时间（RT)（见图1、表4）。注：毛细管色谱柱的出蜂顺序与本图略有不同，应以单个标样校对。图1六六六、滴滴涕的色谱图（填充柱图）表4
出峰顺序
化合物
β-HCH
O, p'-DDT
P,p'-DDT
保留时间（RT\）
7.1.3仪器性能考察
GB/T 13090—1999
注人P、p'-DDT单个标准溶液（4.15)约0.20μL，在p，p*-DDE的出峰位置上不应有分解峰。7.1.4仪器线性响应范围
进六种系列混合标准工作液（4.16）各1.00μL以及6号5.00μL，确定其线性响应范围，如采用镍源ECD,线性范围102~10。
7.2空白试验
在不加饲料样品的情况下，按7.3、7.4、7.5各步骤进行，各种化合物的空白测定值应低于方法定量检测限（见表1）。如高于方法定量检测限应扣除本底值。7.3提取
在100mL具塞三角烧瓶（5.5）中，称试样（6.2)5.000g左右，加入提取溶液（4.5）25mL，并滴加磷酸（4.8)4~5滴，摇匀后加盖，在电动振荡器（5.3）振摇30min（60~80次/min）或超声波（5.3）提取15min，在筒形漏斗（5.6）里塞少许脱脂棉（4.11）及1cm厚无水硫酸钠（4.9），将提取液过滤人25mL容量瓶（5.7)中，并洗涤残渣定容。此提取液摇匀备用。7.4净化
在层析柱（5.10)中塞人少许棉花（4.11)，加约0.5cm厚的无水硫酸钠（4.9），再加酸化硅藻土[1.5g硅藻土或Celite 545(4.10)置于玻璃研钵(5.9)中，滴加0.6mL浓硫酸（4.7)拌匀]，立即装进柱里，敲实后在上面加约1cm厚无水硫酸钠（4.9）。将5.00mL提取液（7.3）放在装好的层析柱上，用正已烷（4.3）连续不断地以速度为60～~90滴/min进行淋洗，并收集10mI淋洗液，即为待测样品净化液。7.5气相色谱测定
将样品净化液（7.4)1～~5uL，注进调试好的气相色谱仪中，根据保留时间定性为何种化合物，最后记下其峰面积（A.）。
8结果的计算和表述
8.1结果的计算
六六六、滴滴涕的含量以外标法测定。8.1.1单点校正计算公式（该点必须在线性响应范围内）六六六、滴滴的含量p，以每千克样品中该组分的质量（ug）表示，按式（1)计算：Wp
式中：—
每于克样品中该组分的质量，ug；A, Xmst XV
A.——样品净化液中该组分的峰打印面积或峰高，μV·s或mm；A与A,峰面积相近的标准溶液中该组分的平均峰打印面积或峰高，μV·s或mm;mst—与 A,相对应的标准溶液中该组分的质量,pg;m-试样质量，g;
V-试样净化液总体积,mL;
V.试样净化液进样体积，μI。
注：当空白试验该组分本底值高于MLQ时，A.应扣除本底值。8.1.2多点校正计算公式
进1.-6号系列混合标准溶液后，求各个组分峰面积或峰高与其组分质量的线性回归方程按式（2）、式（3）式（4）计算：（相关系数>0.999）Ast = a X mst +b
式中：A\-~标准溶液中该组分峰打印面积或峰高，uV·s或mm；一标推溶液中该组分的质量，Pg;m st
·（2)
GB/T 13090—1999
u·该组分校正曲线的斜率，μV·s/pg或mm/pg；h-一该组分校正曲线的截距，μV·s 或 mm。ms
式中：m.s样品净化液中该组分的质量，pg，A-— 6
A.-样品净化液中该组分的峰打印面积或峰高，μV·s或mm;aαb-.
一同式（2）：
式中：wp、AVVim——同公式1；α、b-—同式(2)。
8.2结果的表述
(A. - 6) × V
计算结果应按GB/T8170的规定进行修约，以每干克样品中含该组分的质量（μg)表述。每千克样品中该组分质量低于10ug，只以一位有效位数表述；每千克样品中该组分质量在10μg～100μg之间，以二位有效位数表述；-每于克样品中该组分质量高于100μg，以三位有效位数表述；·（3）
每千克样品中该组分质量低于方法定量检测限，而高于仪器检测限（2倍噪声）时，以“T”代表痕量；此内容来自标准下载网
·每千克样品中该组分质量低于仪器的检测限，以“ND”代表未检出。六六六总量的计算：
每千克样品含四种六六六的总质量（μug）以WHcH表示，按式（5)计算：WHCH = Wa-HCH + Wg-HCH + Wy-HCH + Ws-HCH滴滴涕总量的计算：
每千克样品含四种滴滴递的总质量（ug）以DDr表示，按式（6)计算：WDDT = pp-DDE + Wop'-DDT + wpp-DDD + Wpp-DDT9允许差
两次平行测定结果允许相对偏差值见表5。表5
每千克样品中六六六、滴滴涕的质量ug
10～100
10其他
0. 10 ~0. 100
允许相对偏差
（5）
10.1本法曾用于检测大米、小麦、玉米等植物性原料中六六六、滴滴涕，并适用于测定鱼粉中六六六、滴滴涕。
10.2使用填充色谱柱测定六六六时，有机氯农药七氯会干扰β-HCH测定，因我国没有使用过七氯，测定结果影响不大。如检测进口饲料原料或产品，应采用分离性能好的毛细管色谱柱。有条件应配置1.56
GC/MS设备。
GB/T13090-1999
10.3检测时，如电子捕获检测器的基流不断增高，证明净化程度不好，可增加净化柱中酸性硅藻土的硫酸量（1.5g硅藻土+1.0mL发烟硫酸+1.0mL浓硫酸拌匀后装柱）.硫酸用量不影响测定结果，10.4本方法中使用了易燃和毒性有机溶剂，应在通风橱中进行操作。157
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。