【国家标准(GB)】 饲料中游离棉酚的测定方法

中华人民共和国国家标准
饲料中游离棉酚的测定方法
Method for determination of free gossypolin feeds
GB13086—91
本标准参照采用国际标准ISO6866--1985《动物饲料中游离的和总棉酚的测定方法》。1主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。本标准适用于棉籽粉、棉籽饼(粕)和含有这些物质的配合饲料(包括混合饲料）中游离棉酚的测定。2原理
在3-氨基-1-丙醇存在下用异芮醇与正已烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。3试剂和溶液
除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1异丙醇((CH,),CHOH,HG 3—1167)。3.2正已烷。
3.3冰乙酸(GB676)。免费标准下载网bzxz
3.4苯胺（C,H.NH2,GB691)：如果测定的空白试验吸收值超过0.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸馏，弃去开始和最后的10%蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在（0～4℃）冰箱中，该试剂可稳定几个月。
3.53-氨基-1-丙醇(H,NCH,CH,CH,OH)。3.6异丙醇-正已烷混合溶剂：6:4（V/V）。3.7溶剂A：量取约500mL异丙醇、正已烷混合溶剂（3.6）、2mL3-氨基-1-丙醇（3.5）、8mL冰乙酸（3.3)和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用异丙醇-正已烷混合溶剂（3.6)定容至刻度。仪器、设备
4.1分光光度计：有10mm比色池，可在440nm处测量吸光度。4.2振荡器：振荡频率120～130次/min（往复）。4.3恒温水浴。
4.4具塞三角烧瓶：100、250mL。4.5容量瓶：25mL（棕色）。
4.6吸量管：1.3、10mL。
4.7移液管：10、50mL。
4.8漏斗：直径50mm。
国家技术监督局1991-07-16批准1992-04-01实施
4.9表玻璃：直径60mm。
5试样制备
GB 13086—91
采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6测定步骤
6.1称取12g试样（精确到0.001g），置于250mL具塞三角烧瓶（4.4）中，加入20粒玻璃珠，用移液管（4.7)准确加入50mL溶剂A（3.7)，塞紧瓶塞，放入振荡器（4.2)内振荡1h（每分钟120次左右）。用干燥的定量滤纸过滤，过滤时在漏斗（4.8）上加盖一表玻璃（4.9)以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收集滤液于100mL具塞三角烧瓶（4.4)中。6.2用吸量管（4.6）吸取等量双份滤液5~10mL（每份约含50~~100μg的棉酚）分别至两个25mL棕色容量瓶（4.5)a和b中，如果需要，用溶剂A(3.7)补充至10mL。6.3用异丙醇-正已烷混合溶剂（3.6)稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。6.4用移液管（4.7)吸取2份10mL的溶剂A（3.7)分别至两个25mL棕色容量瓶（4.5)a。和b。中。6.5用异丙醇-正已烷混合溶剂（3.6)补充瓶a。至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。6.6加2.0mL苯胺（3.4)于容量瓶b和b。中，在沸水浴（4.3)上加热30min显色。6.7冷却至室温，用异丙醇-正己烷混合溶剂（3.6)定容，摇匀并静置1h。6.8用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计（4.1)以a。为参比溶液测定空白测定液b的吸光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值，得到校正吸光度A。
7测定结果
7.1计算公式
Xm A×1250 XV 000m AXl25 × 10axmxy
式中：X-游离棉酚含量，mg/kg；A-—校正吸光度;
m -试样质量,g;
V-—测定用滤液的体积，mL
a——质量吸收系数，游离棉酚为62.5cm-1.g1.L。7.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg。
7.3重复性
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值：在游离棉酚含量小于500mg/kg时，不得超过平均值的15%；在游离棉酚含量大于500mg/kg而小于750mg/kg时，不得超过75mg/kg在游离棉酚含量超过750mg/kg时，不得超过平均值的10%。186
附加说明：
GB13086—91
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人姜云侠、李建凡、高振川。
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