【国家标准(GB)】 饲料中亚硝酸盐的测定方法

中华人民共和国国家标准
饲料中亚硝酸盐的测定方法
Method for determination of nitritein feeds
1主题内容与适用范围
本标准规定了饲料中亚硝酸盐的测定方法。本标准适用于饲料原料（鱼粉）、配合饲料（包括混合饲料）中亚硝酸盐的测定。2原理
GB13085—91
样品在微碱性条件下除去蛋白质，在酸性条件下试样中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应，生成重氮化合物，再与N-1-萘乙二胺盐酸盐偶合形成红色物质，进行比色测定。3试剂和溶液
本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。3.1四硼酸钠饱和溶液：称取25g四硼酸钠（Na2B,O，10H,O,GB632），溶于500mL温水中，冷却后备用。
3.210.6%亚铁氰化钾溶液：称取53g亚铁氰化钾CKFe(CN)。3H.O,GB1273}，溶于水，加水稀释至500mL。
3.322%乙酸锌溶液：称取110g乙酸锌[Zn(CH:COO)2·2H,0,HG 3—1098],溶于适量水和15mL冰乙酸(GB676)中，加水稀释至500mL。3.40.5%对氨基苯磺酸溶液：称取0.5g对氨基苯磺酸（NH,C.H,SO.H·H,O,HG3992），溶于10%盐酸中，边加边搅，再加10%盐酸稀释至100mL，贮于暗棕色试剂瓶中，密闭保存，周内有效。3.50.1%N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液：称取0.1gN-1-萘乙二胺盐酸盐（Ci.H,NHCH,NH2·2HCI），用少量水研磨溶解，加水稀释至100mL，贮于暗棕色试剂瓶中密闭保存，-一周内有效。3.65mol/L盐酸溶液：量取445mL盐酸（GB622），加水稀释至1000mL。3.7亚硝酸钠标准贮备液：称取经115土5℃烘至恒重的亚硝酸钠（GB633)0.3000g，用水溶解，移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于400μg亚硝酸根离子。3.8亚硝酸钠标准工作液：吸取5.00mL亚硝酸钠标准贮备液（3.7），置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10g亚硝酸根离子。4仪器、设备
4.1分光光度计：有10mm比色池，可在538nm处测量吸光度。4.2分析天平：感量0.0001g。
4.3恒温水浴锅。
4.4实验室用样品粉碎机或研钵。国家技术监督局1991-07-16批准132bzxz.net
1992-04-01实施
4.5容量瓶：50（棕色）、100、150、500mL。4.6烧杯：100.200.500ml.。
4.7量筒：100、200、1000mL。
4.8长颈漏斗；直径75~90mm。
4.9吸量管：1、2、5ml。
4.10移液管：5、10、15、20mL，5试样制备
GB13085--91
采集具有代表性的饲料样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过1mm孔筛，混匀，装入密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。6测定步骤
6.1试液制备
称取约5g试样，精确到0.001g，置于200mL烧杯（4.6）中，加约70mL温水（60士5℃）和5mL四硼酸钠饱和溶液（3.1），在水浴（4.3）上加热15min（85±5℃）,取出，稍凉，依次加入2mL10.6%亚铁氰化钾溶液（3.2）、2mL22%乙酸锌溶液（3.3），每一步须充分搅拌，将烧杯内溶液全部转移至150ml容量瓶（4.5）中，用水洗涤烧杯数次，并入容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，静置澄清，用滤纸过滤，滤液为试液备用。
6.2标准曲线绘制
吸取0、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00mL亚硝酸钠标准工作液（3.8），分别置于50mL棕色容量瓶（4.5)中，加水约30mL，依次加入2mL0.5%对氨基苯磺酸溶液（3.4）、2mL盐酸溶液（3.6），混匀，在闭光处放置3～5min，加入2mLo.1%N-1-乙二胺盐酸盐溶液（3.5），加水稀释至刻度，混匀，在闭光处放置15min，以0mL亚硝酸钠标准工作液（3.8）为参比，用10mm比色池，在波长538nm处，用分光光度计（4.1)测其他各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，各溶液中所含亚硝酸根离子质量为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。
6.3测定
准确吸取试液约30mL，置于50mL棕色容量瓶（4.5）中，从“依次加入2mL0.5%对氮基苯磺酸溶液（3.4）、2mL盐酸溶液（3.6）\起，按6.2的方法显色和测量试液的吸光度。7测定结果
7.1计算公式
m2×225
X=m×vXm
× 1. 5 =
式中：X试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)含量，mg/kg;V---试样测定时吸取试液的体积，mLm，—-Vml试液中所含亚硝酸根离子质量，μg（由标准曲线读得或由回归方程求出）；m试样质量，g；
1.5亚硝酸钠质量和亚硝酸根离子质量的比值。7.2结果表示
每个试样取2个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。结果表示到o.1mg/kg。
7.3重复性
GB13085--91
同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定，所得结果之间的差值；在亚硝酸盐含量小于或等于1mg/kg时，不得超过平均值的50%；在亚硝酸盐含量大于1mg/kg时，不得超过平均值的20%。附加说明：
本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由中国农业科学院畜牧研究所负责起草。本标准主要起草人冯学勤、汪傲、雷祖玉。134
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