【团体标准】 枸杞及其制品中二氢槲皮素的测定 高效液相色谱法

ICS67.160.10
团体标准
T/NAIA050-2021
枸杞及其制品中二氢皮素的测定高效液相色谱法
Determination of dihydroquercetin inLyciumbarbarumand its products high全国团体利
performanceliquid chromatography2021-05-30发布
宁夏化学分析测试协会
2021-06-01实施
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定编写。
本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏菲杰特检测有限公司、宁夏早康枸杞股份有限公司、银川伊百盛全国团体标准信息
生物工程有限公司、宁夏华信达生物科技有限公司、宁夏化学分析测试协会。本文件主要起草人李亚辉、张海星、朱斐全、林桦、贾丽茹、唐亚楠、柳春海、张小飞。
本文件为首次发布。
1范围
枸杞及其制品中二氢皮素的测定高效液相色谱法
本文件规定了枸杞、枸杞制品和加工产物中的二氢榭皮素含量检测的高效液相色谱方法。本文件适用于枸杞、枸杞制品和加工产物中二氢皮素含量的测定。本方法取样量为10mg时，方法检出限为5mg/g。2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682-2008《分析实验室用水规格和试验方法》NY/T2741-2015《仁果类水果中类黄酮的测定液相色谱法》3原理
采用甲醇减压蒸馏提取试样中二氢榭皮素，利用高效液相色谱法检测，保留时间定性，外标法定量。
4试剂与材料
4.1试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-2008中规定的一级水。4.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯。
4.1.2乙醇（C,H.O）：色谱纯。4.1.3层析用聚酰胺(80—100目)。4.2试剂配制
4.2.1乙醇溶液（70%）：量取70mL乙醇，加水稀释至100mL，混匀备用。4.2.2乙醇溶液（50%）：量取50mL乙醇，加水稀释至100mL，混匀备用。4.2.3处理过的聚酰胺：称取100g聚酰胺，加100mL甲醇，润湿后备用。4.3标准品
二氢榭皮素标准品（C15H,207，CAS号：111003-33-9）：纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.4标准溶液配制
二氢榭皮素标准使用液：称取二氢皮素标准品2.5mg（精确到0.0001g），用甲醇超准信息平台
声振荡溶解，并定容至50mL棕色容量瓶中，既得50μg/mL的标准使用液，冷藏保存4.5.材料
一次性微孔滤头：0.22μm，有机系。5仪器和设备
5.1高效液相色谱仪，配备二极管阵列或紫外检测器。5.2分析天平：感量0.001g和0.0001g5.3超声波清洗机。
5.4回流冷凝装置。
5.5旋转蒸发仪。
6试样制备
取混匀的试样进行粉碎后，备用。7分析步骤
7.1试样处理
取粉碎好的试样200g（精确到0.001g），于1000mL具塞圆底烧瓶中，加入2000mL70%乙醇（十倍量），回流两次，2h/次，合并滤液后，过滤并减压收于：加入20mL水，分散静置，过夜得棕黄色溶液及黑绿色沉淀，过滤、并将滤液减压蒸干，得浸膏，备用。取甲醇处理过的聚酰胺，按径高比1:3的比例装入直径7.5cm，长60cm的玻璃层析柱中。浸膏用水溶解，湿法上柱，用0%～100%乙醇溶液进行梯度洗脱（乙醇溶液变化梯度为10%/6L），只收集50%乙醇溶液洗脱体积内的馏分，减压蒸干得残渣。称取残渣10mg（精确到0.001g），加适量甲醇进行超声溶解，并转移至10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀：溶液过0.22um有机系滤头，供高效液相色谱仪进行测定。7.2色谱参考条件
7.2.1色谱柱：C18色谱柱(250×4.0mm,5μm)，反向色谱柱，或具有同等性能的色谱柱。7.2.2流动相：甲醇+水=50+50（体积），等度洗脱。7.2.3流速：1.0mL/min。
7.2.4柱温30℃。
7.2.5进样量10μL
7.2.6检测器：二极管阵列或紫外，检测波长均为：320nm。7.3测定
7.3.1标准曲线的制作
分别精密进样5μL、10μL、15μL、20μL、25μL二氢榭皮素标准使用液，供高效液相色谱仪测定，最终浓度分别为25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL、100μg/mL、125μg/mL，以峰面积为纵坐标-浓度为横坐标作图，得到标准曲线回归方程。7.3.2试样溶液的测定
待测溶液中待测化合物的响应值应在标准曲线线性范围内，浓度超过线性范围的样品则信息
应稀释后重新进行分析。
7.3.3空白试验
不称取试样，按7.1的步骤做空白试验。8结果计算合表述
按式（1）计算试样中二氢榭皮素的含量。V
x一一试样中二氢皮素的含量，单位为mg/g。V-
一最终定容体积（mL）
样品残渣称样量（mg）
一曲线中查得的二氢皮素含量（mg/mL）。计算结果需扣除空白值，测定结果保留两位有效数字。9
精密度
在重复条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过其算数平均值的10%。全国团
色谱图见附录A