【团体标准】 斑马鱼胚胎急性毒性测试 A法和B法

团体标准 T/GDST1-2021 斑马鱼胚胎急性毒性测试A法和B法 Zebrafish embryo acute toxicity test method A and method B 2021-04-12发布 2021-04-12实施 广东省毒理学会 目次 1 范围 2 规范性引用文件 3 术语和定义 4 测试原理 5 仪器设备和试剂 6 测试方法 7 保证测试结果有效性的条件 8 测试结果评价 9 报告 附录A 附录B 附录C 附录D 附录E 附录F 前言 本标准按照GB/T 1.1-2020规则起草。本标准由广东省毒理学会归口。 本标准起草单位：南方医科大学公共卫生学院、无限极（中国）有限公司、水中银（国际）生物科技有限公司、广东完美生命健康科技研究院有限公司、浙江养生堂天然药物研究所有限公司、汤臣倍健股份有限公司。 本标准主要起草人：黄振烈、刘凤松、陆智、李延川、杜伟、陈子翔、陈雪平、黄葆茵、钟怡洲、林莉、毛新亮、高业成、方国珊、李晓娇、张旭光、何健。 1 范围 本标准规定了斑马鱼（Zebrafish; Danio rerio）胚胎急性毒性测试A法和B法的基本要求。 本标准适用于受试物的急性毒性筛查。受试物包含化学品、食品、药物、化妆品原料及产品。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 OECD (2013), Test No. 236: Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2, OECD Publishing, Paris HJ 1069-2019 水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 3.1 空白对照 Blank control 用作检测受试斑马鱼胚胎质量是否符合测试要求。 3.2 孔板对照 Plate control 用作检测暴露容器是否被生产商或实验操作人员污染或因其他情况可能影响测试结果。 3.3 鱼胚胎培养液 Fish embryo culture medium 用于培养斑马鱼胚胎的溶液。 3.4 半数致死浓度（LC50） Half lethal concentration 受试物引起50%受试鱼胚胎死亡的浓度。 4 测试原理 将4~128细胞期斑马鱼胚胎暴露于受试物稀释液中96小时（A法）或48小时（B法）后于显微镜下观察并记录具有凝结、没有心跳或尾巴未脱离特征的死亡鱼胚胎数目，对斑马鱼胚胎死亡率和受试物测试浓度之间进行剂量反应曲线拟合计算半数致死浓度（LC50）。 5 仪器设备和试剂 5.1 仪器设备 5.1.1 斑马鱼养殖设备：设备需配有温控装置，水循环和过滤装置，养殖容器用玻璃或其它惰性材料制成。可采用通用斑马鱼养殖设备或按实验室需求配备鱼缸（如45cm长×45cm宽×30cm高）。 5.1.2 斑马鱼产卵盒/缸：由玻璃、不锈钢或其它惰性材料制成，网筛（网格大小为2mm×2mm，由不锈钢或惰性材料组成用来保护鱼卵）。 5.1.3 水质监测设备：pH计、溶解氧测定仪、盐度计（电导率测定仪）。 5.1.4 丰年虾孵化器：设备需配有打气装置，用于孵化丰年虾卵。 5.1.5 分析天平：精度0.1mg。 5.1.6 显微镜：配带照相系统，最大放大倍数应大于80倍的立体显微镜。 5.1.7 恒温箱：精度±1℃。 5.1.8 测试容器：玻璃或聚苯乙烯实验容器（如24孔板、96孔板、培养皿）。如测试物可能吸附于聚苯乙烯容器时（如非极性化学品），应选用惰性材料（如玻璃）来减少吸附。实验容器在恒温箱中应随机摆放。 5.1.9 其他常规实验仪器和设备：移液管、离心管、玻璃容器（如烧杯、容量瓶等）、试管震荡器、低温冰箱、可调节移液器和吸头、广口吸头（≥1.5mm径口）用来吸取鱼胚胎等。 5.2 试剂 5.2.1 鱼胚胎培养液：用水质符合GB/T 6682要求的水和下列化学品配制而成： CaCl2: 294.0 mg/L MgSO4·7H2O: 123.3 mg/L NaHCO3: 63.0 mg/L KCl: 5.5 mg/L