【农业行业标准(NY)】 食用植物油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法

ICS 67.050
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 1598—2008
食用植物油中维生素E组分和
含量的测定
高效液相色谱法
Determination of tocopherol content in edible vegetable oils-High performance liquid chromatography2008-05-16发布
2008-07-01实施
中华人民共和国农业部
本标准出中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质录临督检验测试中心。本标准主要起草人，谢立华、李培武、丁小霞、张义、陈小媚、汪驾芳，NY/T1598—2008
NY/T 1598-- 2008
食用植物油中维生素E组分和含量的测定·高效液相色谱法1范围
本标准规定广食用植物油中维生素E组分和含量的测定为法，本标准适用于食用植物汕中维生素E组分和含量的测定。本标准检出限分别为：α-VE:0.2mg/kgig-VE.0.2mg/kg;-VE：0.1mg/kg,-VE0.1 ng/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件：其最新版本适用于本标准。GB5524植物油脂检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（CB/T6682:-1992,ISO3696—1.987）3方法原理
样品皂化后，用无水乙醚提取不皂化物中的维生囊E，浓缩，高效液相色谱仪分离维生索E，紫外检测器检测，外标法定量。
4试剂
除非丹有说明，均使用分析纯试剂和二级水。4.1无水乙醛：不含有过氧化物。用5m乙醚加1nL10%棋化钟溶液，振摇1miu.水层星黄色或机滴0.5%淀粉溶液，水层量蓝色，则无水乙醚中含有过氧化物。4.2无水乙醇：不含有隆类物质。取2mL银氨溶液于试管中，加人0.5mL乙淳，摇勾，再加人氢氧化钠溶，加热，放置冷却后，如有银镜反应则表示无水乙醇中含有谨类物质。4.3光水硫酸钠.
4.4甲醇，色增纯。
4.5100g/L抗坏血酸溶激，现配现用。4.61&/L氢氧化钾辫液，
4.7100g/L氢氧化钠溶液。
4.8 50g/I硝酸银溶液。
4.9银氨溶液
4.9.1检查方法：取2㎡L银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇勾，再加入氢氧化钠落液，加热，放置冷都后，岩有银镜反应则表示乙醇中有醛。4.9.2脱醛方法：取;2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾人1L乙醇中，振摇后，放置暗处2d(不时遥动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸H的50mL。当乙醇中含醛较多时，硝峻银用量适当增加。1
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4.10维生素E标准溶液
4.10.1维生索E标准溶液配制
用无水Z醇(4.2)分别溶解 α”VE,3VE.？VE,VE四利维生素 E标品:使其浓度大约为1 ng/ml使用前用紫外分光光度计分别标定此四种维生素的浓度。4.10.2维生素E标准溶液浓度的标定取维生素E标准溶液若下微升，用尤水乙醇分别稀释定量至3.0rnL，按给定波长测定各维牛素的吸光值，用比吸光系数算出该维生素的浓度。测定条件见表1。表 1维生素E标准溶液浓度标定条件标物质
人标样的是,μL
维牛素E标准溶液浓度(c)式(1)计算：Ax
式中：
比吸光系数，
维生素标准溶液铱度的数俏，单位为克每毫（/mL)，维生索的平均紫外吸光值；
加入标准液体积的数值，单位为微升（μL)，某种维牛素1%比吸光度数的数值；VX10-
5仪器设备
标准液稀释倍数。
实验室常用仪器设备：
2电子天平，精度0.001。
5.3紫外分光光度计：
5.4高速离心机，5000r/min。
5.5振荡探床，120t/min
5.6高效液相色谱仪带紫外分光检测器，5.7 Nova-pak C色谱柱(3. 9 mX150 mm)6操作步骤
6.1样品制备
按GB5524要求制备样品。
6.2皂化
波长，num
准确称取5乌试样于皂化渐中，加30mL无水乙醇，混匀。加5n止抗坏血酸溶液(100/L),20tnl氢氧化钾（4.6)叠于搬荡摇床阜化1h6.3提取
将皂化后的试样移入分液漏斗中,用50ml.水分2次～3欧洗皂化瓶，洗液并人分液漏斗中。用药GOmL乙醚分3次洗启化瓶，乙醚液并人分液漏斗中。轻轻振操分液漏斗2min，静置分层，弃去水层。2
6.4洗涤
用约50mL水洗涤分液漏斗的乙醛层，用πH试纸检验至水层不靠臧性。6.5浓缩
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将乙醚提取过无水硫酸钠（药5g），滤液至100mL容最瓶}f，用40ml.z酵分3次冲洗分液漏斗及无水磁酸钠，并人容量瓶内，用乙醚定量，摇勺，取10mL乙醚提取液了40℃水浴中氮气吹干：立即加人1mL艺醇，充分混合，潜解提取物。6.6离心
将提取液转入离心管中，5000r/min离心5min，上清液供液相色谱检测。6.7高效液相色谱分析条件(参考条件）流动相：中醇-水(V/V)-98+2,混勾，临用前脱气，杜温：30℃
色谱柱：Ci反向柱
紫外检测波长：300nmWww.bzxZ.net
进样量：10L
6.8维生素E的标准色谱图，见图1。A
3— β-VE:
6.9试样分析
图1维生素E的标准色谱图
6.9.1定性：用标准物色谱峰的保留时间定性。6.9.2定量：计算样品位谱图中某维生索峰而积与其对应的标物色谱峰面积的比值，根据标准此线求其含量。
7结果计算
维生素含量按式（2)计算。
X =GxVxn
式中：
X-—某种维生素含量的数值：单位为率克每千克（mg/kg）：(2)
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-由标谁山线上查到某种维生素合量的数值，单位为微克每毫Ⅱ（u/ml)，C
V—样品浓缩定容体的数值，单位为毫升(mL)：n
·-稀释倍数，
样品质量的数值，单位为克（g).算结果保留一位小数。
精密度
8.1重复性
在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术均值的10%，以大于这两个测定值的算术平均值的10%的情说不超过5%为前提。8.2再现性
在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术均值的15%，以大于这两个测定值的算术平均值的15死的情况不超过5%为前提。4
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