【国家标准(GB)】 动物源食品中阿维菌素类药物残留的测定酶联免疫吸附法

ICS 67. 120
中华人民共和国国家标准
GB/T21319—2007
动物源食品中阿维菌素类药物
残留的测定
、酶联免疫吸附法
Determination of avernectins residues in foodstuffs of animal origin-Enzyme linked immunosorbent assay2007-10~29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局肪您
中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中国农业大学、中国检验检疫科学研究院。GB/T21319--2007
本标准宅要起草人：洗建忠、史为民、方宇平、何方洋、吴聪明、张素假、冯才伟、彭涛、国作。1范围bzxz.net
动物源食品中阿维菌素类药物
残留的测定酶联免疫吸附法
本标准规定了动物源食品中阿维菌素炎药物残留量的酶联免疫吸附测定法。本标准适用于牛肉和牛肝中阿维菌素、伊维菌素和埃普利诺菌索残留量的测定。GB/T21319—2007
本标准的方法检测限：阿维菌素类药物在牛肝纽织和牛肉组织中的检测限均为2μg/kg，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注月期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（G13/T6682—1992.nEqISO3696：1987）3原理
采用间接竞争EI.ISA方法，在微孔条上包被偶联抗原，试样中残留的阿维菌素类药物与嗨标板上的偶联抗原竞争阿维菌素抗体，加人酶标记的抗体后，显色剂色，终止液终止反应。用酶标在450nm处测定吸光度，吸光值与阿维菌素类药物残留量成负相关，与标准曲线比较即可得山阿维菌素类药物残留含量。
4试剂和材料
4.1阿维菌素类药物试剂盒
4.1.196孔板（12条×8孔）包被有阿维菌素偶联抗原。4.1.2阿维菌素标准溶液（至少有5个倍比稀释浓疫水平，外加1个空白）。4.1.3阿维菌素抗体溶液。
4.1.4过氧化物酶标记物。
4.1.5底物显色溶液A液：过氧化尿素。4.1.6底物显色溶液B液;四甲基联苯胺。4. 1. 7 反应终止液:1 rmol/L 硫酸。4.1.8缓冲液（2倍浓缩液）。
4.1.9洗涤液（20倍浓缩液）。
4.2乙腈、正已烷无水硫酸钠（分析纯）。4.3碱性氧化铝柱Scp-PakVac12ce(2g）。4.4水:GB/T 6682规定的一级水。4.5缓冲液工作液：用水将2倍的浓缩缓冲液按1：体积比进行稀释(1份2倍浓缩缓冲液十1份水），用于溶解干燥的残留物，缓冲液1作液在4℃可保存一个月。4.6洗涤波L.作液：用水将20倍的浓缩洗涤液按 119体积比进行稀释(1份 20倍浓缩洗涤液十19份水）,用于酶标板的洗，洗涤工作液在4℃可保存一个月。1
CB/T'21319—2007
5仪器
5.1酶标仪（配备450nm滤光片）。5.2超声波清洗器。
5.3离心机。
5.4氮气吹干仪。
5.5句浆机。
5.6振荡器。
5.7涡旋式混合器。
微量移液器，单道20uL、50μ100μ，多道50μ～300μ可调。5.8
6试样制备与保存
取新鲜或解冻的动物组织，剪碎，100001/min匀浆1.min。一20℃下保存。7试样测定
7、1提取
称吸下肉、牛肝试样3.0g士0.05g于50mL聚苯乙烯离心管中，加9mL乙睛、3ml.正已烷，置于振荡器上振荡10min加3g无水硫酸钠，再振荡10min3000r/rnin以上，15℃离心10min，去除上层正已烧，取下层4.0 ml.提取液备用。称取3g尤水硫较钠平铺在碱性氧化铝柱Scp-PakVacJ:加10mL乙腈洗柱，再加4.0mL提取液，开始收集滤，待提取液流干后，再加入4mL乙睛清洗柱子，合并洗液和滤液至10mLT净的玻璃试管中，于50℃～60℃水浴氮气流下吹干。取 1.0 tiL缓冲液工.作液溶解T燥的残留物,涡动 1 min,超市 10 min,涡动1 min，敢溶解后的样品液100μL加人100μL缓冲液工作液，充分混合，取20μL用于分析。7.2测定
使用前将试剂盒在室温(19℃～25℃)下放置 1 h～~2 h.7.2、1将标推和试样（至少按双平行实验计算)所有数鼠的孔条插人徽孔架，记录标准和试样的位置。7.2.2加20μL.系列标准溶液(1.1.2)或处理好的试样溶液到各自的微孔中。标准和试样至少做两个平行站验。
7.2.3加抗体T作液（4.1.3)80μL到每一个微孔中,充分混合，于37℃恒温箱中孵育30 min。7.2.4倒出孔中液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的液体。用250μL洗漆液[.作液充人孔中，再次倒掉微孔中液体，再重复操作两遍以上（或用洗板机洗涤）。7.2.5加100μL过氧化物酶标记物（4.1.4），37℃恒温箱中孵育301ui1。7.2.6衡出孔中液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打以保证完全除去孔中的获体。用250μL洗涤液下作液充人孔，再次倒掉微孔巾体，再重复操作两遇以上（或用洗板机洗禄）。7.2.7加50μL底物显色液A液(4.1.5)和50μL底物显色液B液（4.1.6),混合并在37℃恒温箱避光显色 15 min～30 min，
7.2.8加50ul反成终止液(4.1.7),轻轻振荡混勾，用酶标仪在450nm处测量吸光度值。8结果计算
用所获得的标准溶液和试样溶液吸光度值与空白溶液吸光度值的比值进行计算，见式（1）：A.=×100%
式中：
A,一相对吸光度值，%；
B—标推(试样)溶液的吸光度值；B.—，空白(浓度为0的标准溶液)的吸光度值。GB/T 21319-2007
将计算的相对吸光度值（%)对应阿维菌素（μ/L)的自然对数作半对数坐标系统曲线图，对应的试样浓度可从校正曲线算出，见式（2）：Axf
式中·
X一-试样中阿维菌素类的含量，单位为微克每干克（ug/kg)；A——试样的相对吸光度值(%)对应的阿维菌素类含量，单位为微克每升(μg/L)；于试样稀释倍数：
一试样的取样量，单位为克（名）)。计算结果表示到小数点后两位，阳性结果应用确证法确证。9
交叉反应
阿维菌素：100%；
埃酋利诺菌素：130%；
伊维菌素：33%；
多拉菌素：5%；
泰乐菌素：<0.1%，
替米考星：≤0.1%
10精密度
本方法的批内变异系数≤30%,批间变另系数≤45%·(2)
GB/T 21319-2007
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动物源食品中阿维菌素类药物
酶联免疫吸附法
残留的测定
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开本880×1230
2008年3月第版
字数？千字
印张 0.5
2.008年3月第一次印刷
书号：7550661-30860定价10.00元如有印装差错由木社发行中心调换版权专有侵权必究
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