【国家标准(GB)】 动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法

1CS67.120
中华人民共和国国家标准
CB/T21314--2007
动物源性食品中头孢匹林、头孢肤残留量检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
Deterinination of cephapirin and ceftiofur residuesin foudstuffs of animal origin-LC-MS/MS method
2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局数码防伪
中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准附录 A,附录 B、附录 C 为资料性附求。本标摊出中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。GB/T21314—2007
本标准起单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院本标滩主要起草人：李
、尘钵维宣、虏英章、田哲、彭涛、于灵荫凯、杨春光、正宏作。术标难为首发布。
１范围
动物源性食品中头孢匹林、头孢噻呋残留量检测方法
液相色谱-质谱/质谱法
GB/T 21314—2007
本标准规定了动物源性食品中头孢匹林、头孢理味残解最液相色谱-质谱/质碧测定和确证方法，不标准适用动物趾肉、脏、肾旺，鸡蛋和牛奶中头孢匹样（ccphapirir）头孢噻味（ccttiofur)残留量的险测。
2 规范性引用文件
下列文件十的条款追适本准的引用而成为本标谁的条款，凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不色括就误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓厕根培本标准达成协议的各方研究是否可使而这降更情的最新版不，凡是不注日期的引用受，其最新版來适周于和标雅。GB/T5582--1992分析卖验室用水规格和读店法（尺eIS03695：1987)3原理
样品中头抱殊、头抱蜜味残留物用之水漆液提取，提取液经浓缩后，用缓冲溶液溶解、固拍求取小性净化，洗脱液经氮气吹干后.月液柱色满-质谱/质谱测定，外标法定量。4、试剂和材料
除另有说明外，所月试杰均为分析纯，水为6B/T 66821992规定约-级水：4.1乙購：高效液相色谱级。
4.2甲高效液相色谱级。
4.3甲酸：高效液相色谱级
4.4氨化钠。
4.5氢氧化钠，
4. 6磷酸一氢钾。
4. 7 磷酸氢二钾。
4. 8C.1 mol/L氢氧化钠:称取 4 g 氢氙化钠,活用水稀释至 1 000 ml.,4.9乙靖+水(15－2,体积比)。
乙晴十水（30－70.体积比）。
4. 110. 05 mul/L 磷酸扯缓冲溶液（pII=8. 5):称取 8. 7 多磷酸氢二钾，超纯水溶解，稀释至10C0 mL,用磷酸二室钟谢节pH值至 8. 5土0. 1。4. 12 0. 025 mol/I. 磷酸盐缓冲溶液(pH= 7. 0);称瑕 3. 4 磷酸二.氢钾,超纯水溶解,稀释至1000ml.，用氢氧化钠调节pH值至7.0士0.l。4.130.01mol/L乙酸铵溶液(pH-1.5):称取 0.77g乙峻铵,超纯水溶解,稀释至1000mL，用甲酸调节pH值至 4.5士C.1。
4.14头抱匹林，头抱噻味标推品：纯度均大于等于95%：4.15头孢匹林、头孢咳标准储备溶液：分别称取适量标准品（4.14），分别用乙睛水溶液（4.10)落解GR/T21314—2007
定容至100 m1.,溶液浓度为100μg/mL，置于-18℃冰箱避光保存，保存期5d。4.16头抱匹林、头孢噬吹混合标准4液：分别吸取适量标准储备液（4.15）于100mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液（4.12)定容至刻度，配成混合标滩中间液。混合标准间液中头孢匹林、头孢噻味的浓度分别为100ng/ml.50c心ng/al置于-1℃冰箱避光保存，保存期5d。4.17混合标准工作液：精密量取混合标准中间溶液（4.16）适量，用空样品基质配制成不同浓度系列的混合标准1.作液（用时现配)。4. 18 同相萃取 C1a柱:500 mg-6 m[。使用前用中醇和水预处理,即先用 2 mI,中醇游说小柱.然后用【mL水淋洗小柱。
5仪器
有电喷雾离子源。
5.1液相色谱质谱/质沿仪配
5.2旋转蒸发器。
5.3战相萃装罩。
5.4离心机。
5.5均质器。
5. 6旋涡据合器,
5.7 H计:
5.8氮吹仪。
试样制备与保
出织揭碎机充分据碎，装人洁净容器中，密封，取代表性祥品
并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。
7检剥步骤
7.1提取
7.1.1肝脏、肾脏、肌皮身织、鸡蛋样品称取约5g试样糖划c.01
g）于50mL离心管中，加人15mL乙腈水溶液（1.9），均质30s，1C00r/mim离心5min售设转移至50ml.离心量中：另取一离心管.加人10rL乙睛水溶液（4.9）：洗涤均质器刀头，用玻椎摄体心管中的沉淀，加入上述洗涤均质器刀头溶液，在旋涡混合器上振荡1 min,，1000 r/nmin离心5清液合片率50 mL离心管中，重复用10 m/七睛水溶液(4. 0)洗涤刀头并提取一次，上清液合并至离心管中，用乙晴水溶液（4的定容至10ml。准确移取20ml.人100ml.鸡心瓶。
7.1.2牛奶样品
称取10g样品（精确到0.1g）于50mL离心管中，加入20mL乙晴（1.9）.均质提取30s，4000r/min离心5min，上清液转移至50ml离心管中：另双-离心管，加人10ml.乙精水溶液（1.9），洗涤均质器刀头，用玻棒鹅碎离心臀中的沉淀，加入山述洗涤均质器月头熔液，在旋涡混合器工振荡I rrin4 000 r/min离心 5 min,上清液合并至50 mI.离心管中,重复用 l0 mL乙瞻水溶液(4. 9)洗涤刀头并提取次，上清凌合并至50mL离心管41,用乙水溶液（4.9)定容至50mL。推确移取25ml.人100ml.鸡心瓶。
将鸡心瓶于旋转蒸发器t（37℃水裕）蒸发除去乙晴（易起沫样品可加人4ml.饱和氯化钠溶液）7.2净化
立即向已除去乙睛的鸡心瓶中加人25mL麟酸盐缓冲溶液（4.11)，涡旋混勾1min-用0.1nol/L氛氧化钠调节pII值为8, 5,以 1 ml./min的速度通过经过预处理的固相萃取杜,先用2 rnL磷酸盐缓冲2
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溶液(1. 11)淋洗 2 次,再用 1 mL 超纯水淋洗。用 3 mL 乙瞻泌脱(速度控制在 1 ml. / min),将洗脱液于 45℃下氮气吹于,用 0.025 rml/L磷酸盐缓冲溶液(4.12)定容至1mL,过0.45mm膜店,立即用相色谱-质谱/质谱仪测定。
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
7.3.1.1色谱杠：（OsMOsH.Cla，250wuX4.6mm（内径），粒度5μm，7.3.1.2流动相：A组分是0.01mol/1.乙酸铰溶液（甲酸调pH至4.5)B绍分是乙。梯度洗脱程序见表1。
表 1 梯度洗脱程序
时间/nin
L/min。
7. 3. 1. 4
7.3.2质谱条
离子源喷雾离子源
7. 3. 2. 1
扫描准正离，扫描
7.3.2.3检测0多反应监测
既速/（nL/m）
组分A/%
红分关
雾化气、气育气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气便用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测7.3.2. 4
要求，参考条价贝A
7.3.3液相色请宽请/质谱测定
根据试祥中报#
的合量情况·选取响应值相近的标准工作液待测液中头孢匹林实布心
味的响
一起进律色谱析。标准上作液和对标准工作液和样液等体积进行测定。在上述色谱条跑匹林和头孢嘧呋的参考保留时间分别约为12.2min、13.0min。标准落液的选择性离子流图见图公
7.3.4定性测定
按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准浴液相比在土2.5%的允许偏差之内待测化全物的定性离子对的重树高子色谱峰的信燥比大于或等于3（S/N≥3），定量离子对的重构离了色谱峰的信噪比大于或等于10（S/N≥10）；定性离子对的相对十度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品存在相应的日标化合物。
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的拒对偏差
7.3.5定量测定
20§~50%
按外标法使用标准工作曲线进行定量测定。7. 3. 6空白试验
除不加试样外，均按上述携作步骤进行。>1C%--2C%
≤10%
二50%
GB/T 213142007
3结果计算与表述
用色谱数据处现机或按式(1)计算试样中头孢匹林、头拖嚏呋的残留量，计算结果需扣除空白值：XV×1000
mx1000
式中：
X一试群中头孢匹林、头饱璨呋残留量，单位为微克每于克（/k）；-从标准曲线上得到的头孢匹林、头孢呋落液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；V一一样液最终定容体积，单位为升（mL.)；m-最终样液代表的试质量，单位为克（g）。测定低限与回收率
测定低限(1.0Q)
头匹林为1g/kg，头孢噬吹为50μg/kg。回收率
死表C.1.
质谱/质谱测定参考质谱条件：
附录A
（资料性附录）
质谱/质谱测定参考质谱条件\bZxz.net
a）电喷雾电压(1S):5500 V;
募化气压力(GS1):0.111MPa(60Psi);6
气帘气压力(CUR):0.207 MPz(30 Psi);辅助气压力（GS2):0.621MPa(90Psi);离子源温度（TEM)：?00℃；
GB/T 213142007
头孢匹林、头孢呋的定性离十对、定量离子对、去簇压（DP)、碰撞能量（CE)及碰撞室出几电压(CXP)见表 A, 1。
头孢匹林、头跑噻呋的定性离子对,定量离子对,去簇电压、碰撞气能量和碰撞室出口电压定性
头沟匹林
头孢曦联
离了对
421.8/292.1
424.3/152.c
523.9/241.2
523.9/2J0.1
隐了对
42..3/292.1
523.9/211. 2
左璞电压
碰撞气
能量(CE))
碰潼室出口
电E(CXP))
1）所列参数是在API4C3C质语仪完成的，此处列出的实验用仪器型号仅是为了提供参考，并不泌及商业日的鼓励标准使用者尝试不同型号的仪器。5
GB/T 21314—2007
座5.00e43
附录B
（资料性附录）
头孢匹林，头孢噻味标准品的定量离子对重构离子色谱图12. 25
12151458
头孢匹林，头孢噻映标准品的定离子对蛋构高子色谱图6
待测物质
头泡匹林
头孢噻以
涨加浓度/
μe/kg
附录C
(资料性附录）
添加回收率
头孢匹林、头孢噻味添加回收率回收率%
86. 1~- 92. 7
62.2 ~-80.6
78.3--83.2
72.4~87.0
70.9~-83.7
69. 2 --78. 5
62. 8~71. 6
66.5-~78.7
71.6--82. 3
65, 8~81. 7
73.8~-88.2
69, 2--90. 6
70.5~91.0
65. 1-86.4
68.7~85.9
65.2~93,1
68.8~-80.7
GB/T 21314—2007
75. 3--91.1
72. 5~-85. 1
71. G--86. 5
75. 2-~91. 3
65. 7~90. 9
78.0~80.8
73.3--90.0
79, 4-93.5
77. 1-88. 6
72.5--90.8
76.1~85.7
73.0~92.2
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