【国家标准(GB)】 动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法

ICS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21311—2007
动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法
高效液相色谱/串联质谱法
Determination of residues of nitrofuran metabolites in foodstuffs ofanimaloriginHPLC-MS/MSmethod声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法
高效液相色谱/串联质谱法
-KAONrKAca-
GB/T21311—2007
本标准规定了动物源性食品中硝基味哺类药物代谢物3-氮基-2-恶唑酮（3-amino-2-oxalidinaneAOZ)，5-吗啉币基-3-氮基-2-恶唑烷基篇（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxalidinonc，AMOZ），1-氮基-乙内酰腺（1-amino-hydantoin，AHD）和氮基腺（scmicarbazide，SEM）残留量的高效液相色谐/申联质谱测定方法。
本标准适用于肌肉、内脏、鱼、虾、蛋、奶、蜂蜜和肠衣中硝基呋哺类药物代谢物3-氨基-2-恶唑响、5-吗晰甲基-3-氨基-2-恶唑烷基、1-氨基-乙内酰脲和氨基眠残留其的定性确证和定甚测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格利试验方法（GB/T6682—1992：nenISO3696：1987）3原理
样品经盐酸水解，邻硝基苯甲醛过夜衔生，调pH值7.4后，用乙殿乙酯提取，正已烷净化，分析物采用简效液相色谱/电联质请定性检测，来用稳定同位紧内标法进行定量测定。声明试刹材料供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4,1甲醇：高效液相色谱级。
4.2乙脂：高效液相色谱级。
4.3乙殿乙酯：高效液相色谱级。4.4正已烷：高效液相色谱级。
4.5浓盐酸。
4.6氢氧化钠。
4.7甲截：高效液相色谱级。
4.8邻硝基苯甲醛。
4.9三水磷酸钾。
4.10乙酸铵。
4.110.2mol/L盐酸溶液：准确量取17mL浓盐酸（4.5），用水定容至1L。4.122.0mol/1.氢氧化钠溶液：准确称取80g氢载化钠（4.6）,用水溶解并定容至1L。4.130.1mol/L邻硝基苯甲醛溶液：准确称取1.5名邻硝基苯甲醛（4.8），用甲醇溶解并定容至100mL
4.140.3mol/1磷酸钾溶液：准确称取79.893g三水磷酸钾（4.9）,用水溶解并定容至1L。1
GB/T21311—2007
4.15乙饱和的正已烷：量取正已烷80mL于100mL分液蒲斗中，加人适量乙后，剧烈探摇，待分配平衡后，充者乙睛层即得。
4.160.1%酸水溶液（含0.0005mol/L艺酸铵）：准确基取1ml.印酸（4.7）和称取0.0386g乙酸铵(4.10)于1L容显瓶中，用水定容至1L。4.17标准物质：3-氨基-2-恶唑酮、5-吗晰甲基-3·氨基-2-恶唑烷基酮、1-氮基-乙内酰脲、氨基脉，纯度99%。
4.18内标物质：3-氮基-2-恶唑酮的内标物，D,-A07.;5-吗甲基-3-氨基-2-恶唑烷苯酮的内标物，Ds-AMOZ：1-氨基-乙内酰脉的内标物，3C-AHD：氨基脲的内标物，3C\N-SEM.纯度≥99%。4.19标准储备液：分别准确称取适标准品（精确至0.0001g），用乙肪溶解，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。4.20混合中闻标准溶液：准确移取标准储备液（4.19）各1mL于100mL容量瓶中，用乙肪定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。4.21混合标准工作溶液：准确移取0.1ml.混合中间标准液（4.20）于10ml.容抵瓶中，用乙睛定容至刻度，配制成浓度为0.01m/的混合标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效均1周。4.22内标储备液：准确称取适整内标物质（精确至0.0001g），用乙腈溶解，配制成浓度为100mg/L的标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月。4.23中问内标标准济液：准确移取1mL内标储备液（4.22）于100mL容瓶中，用乙崩定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的中间内标标准溶液，4℃冷凝避光保存，有效期1个月。4.24混合内标标准溶液：准确移取中间内标标准溶液（4.23)各0.1mL于10mL容量瓶中，用乙定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/1.的混合内标标准浴液，4℃冷藏避光保存，有效期1周。4.25微孔滤膜：0.20以m，有机相。4.26氧气：纯度≥99.999%。
氯气：纯度≥99.999%。
5仪器和设备
5.1液相色谱/中联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）惠明：组氛擒释秘供学习和交流，严禁用宇商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com5.3分析天平：感量0.0001g，0.01g。5.4均质器，10000x/min。
5.5振荡器。
5.6恒温箱。
5.7pH计：测量精度士0.02pH单位。5.8离心机：10000z/min。
5.9氮吹仪。
5.10旋祸混合器。
容量瓶：1L，100mL，10mI..
具塞塑料离心管：50mL。
刻度试管：10mL。
移液枪：5mL，1mL.100μL
6试样制备与保存
6.1肌肉、内脏、鱼和虾
从原始样品取出有代表性样品约500多，用组织捣碎机充分捣碎混勾，均分成两份，分别装人洁净容2
器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。6.2肠衣
-TiKAONTKAca-
GB/T21311—2007
从原始样品取出有代表性样品约100g，用剪刀剪成边长5mm的方块，混匀后均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。6.3蛋
从原始样品取出有代表性样品约500，去壳后用组织碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装人活净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。6.4奶和蜂蜜
从原始样品取出有代表性样品约500多，用组织碎机充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含质发生变化。7样品处理
7.1永解和衍生化
7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣称取约2g试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL甲醇-水混合溶液（1十1，体积比），振荡10min后，以4000z/min离心5min，弃去液体。残留物中加人10mL0.2mo!/L盐酸，用均质器以10000/min均质1min后，再依次加入混合内标标准落液（4.24）100μL，邻硝基苯甲醛落液（4.13)100μL，涡动混合30s后，再振荡30min，置37℃恒温箱中过夜（16h）反应。7.1,2蛋、奶和蜂蜜
称取约2g试样（精确至0.0lg）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20mL0.2mol/L盐酸（以样品完全浸润为准），用均质器以10000/min均质1min后，再依次加人混合内标标准落液（4.24）100μL，邻硝基苯甲醛溶液（4.13）100μL，涡动混合30s后，冉振荡30min，罩37℃恒温箱中过夜(16h）反应。
7.2提取和净化
取史模冷帮案滑加合1森品酸钾（盐酸资液加0.lm磷酸弹溶容科复氧花7用磨再上艺艺艺积
与盐酸溶液休积一致），振荡提取10min后，以10000r/min离心10min，收集乙殿乙层。殁留物准10mL20mL乙酸乙酯再提取一次，合并乙酸乙酯层。收集液在40℃下用Nz吹干，残渣用1mL0.1%甲酸水浴液（4.16）溶解，再用3mL乙髓饱和的正已烷（4.15）分两次液液分配，去除脂肪。下层水相过0.20μm微孔滤膜后，取10μL供仪器测定。7.3混合基质标准溶液的制备
7.3.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL甲醇-水混合浴液（1+1，体积比），振荡10min后，以4000r/min离心5min，弃去液体。残留物中加人10mL0.2mol/L盐酸，用均质器以10000r/min均质1min后，按照最终定容浓度：15，10，50.100ng/mL，分别加人混合中间标准溶液（4.20）或混合标准工作浴液（4.21），再加人泥合内标标准溶液（4.24）100μL，余下操作同7.1.1和7.2。7.3.2蛋、奶和蜂蜜
称取5份约2g的阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，加人10mL~20ml0.2mo1/L盐般（以样品完全浸润为准），用均质器以100001/min均质1min后，按照最终定容浓度：15.10、50、100ng/mL，分别加人混合中间标准浴液（4.20）或混合标准工作浴液（4.21），再加人混合内标标准搭接（4.24）100L，余下操作同71.2和7.23
GB/T21311-2007
8测定wwW.bzxz.Net
8.1液相色谱条件
色谱柱：XTerraMsCu150mmx2.1mm（内径），3.5μm，或相当者；a
b）柱温：30℃；
流速0.2mL/min；
进样量：10μL：
流动相及洗脱条件见表1。
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
8.2串联质谐条件
参见附录A。
8.3液相色诺/串联质谱浏定
8.3.1定性测定
流动相A（乙睛）
流动相3（4.16）
按照上述条件测定样品和混合基质标准溶液，如果样品的质鼠色谱峰保留时间与浪合基质标准液一致：定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。混合基质标准溶液的液相色谱/申联质谱色谱图参见图B.1。
表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差声明：报戏满俊麒学习利交流>禁用升商业途-50因录下载：10t9%/biaozhu198168.com允许的相对谢差
8.3.2定量测定
按照内标法进行定量计算。
8.4平行试验
按照以上步骤对同一试样进行平行试验测定。8.5空自试验
除不称取试样外，均按照以上步骤进行。9结果计算
按式（1)进行计算：
式中：
X试样中分析物的食量，单位为微克每于克(μg/kg)；一群液中的分析物与内标物峰面积比值；R
混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/ml）：4
-（1)
V：样液最终定容体积，单位为磨升（mL）;R，——混合基质标准溶液中的分析物与内标物峰面积比值；m
试样的质量，单位为克（g）。
注：计算结果带将空白值扣除。测定低限（LOQ)
本方法的测定低限回收率和精密度
参见表C,1。
niAoNikAca
GB/T21311—2007
声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http：//biaozhun.ys168.comGB/T21311—2007
毛细管电压：3.5kV；
离子源温度：120℃，
去溶剂温度：350℃；
锥充气流：氮气，流速100L/h
去溶剂气流：氮气.流速600L/h，附录A
（资料性附录）
串联质谱条件\
碰撞气：氢气，碰撞气压2.60×10-Pa：扫描方式：正离子扫描，
检测方式：多反应监测（MRM>，监测条件见表A.1。表A,1
多反应监测(MRM)的条件
化合物
D-AMOZ
\CtN·SEM
母离子
子离子
驻留时向/s
锥孔电压/V
碰撞能低/eV
声明：本盗料仅供学冰和交流，1禁用于商业用途！目录下载：gbttp：//iaozhuniays168.cbmAOZ
D,-AOZ
a用于定量。
1）所列参数是在WalersQuattroUltimaTMPT质错仪上完成的，此处列出试验用仅器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，较励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仅器，6
附录B
（资料性附录）
标准样品质量色谱图
供学习和交流，严禁用于商业用途声明：本资料
D,AMOZ
-AMO2;
\CIN-SEM;
iiKAoNiiKAca
GB/T21311—2007
340>296
335>291
335>262
212>16B
209>192
209>166
252>134
249>134
目录下载：http://biaozhun.ys168.com249>104
5-UC-AHD:
6---AHD;
240>134
236>134
236>104
注：在选定条件下，AMOZ、SEM、AHD.AOZ的保留时间分别为6.03.6.96、7.06和7.39min，图B.1硝基呋哺代谢物IIPLC-MS/MS质量色谱图GB/T21311—2007
附录C
（资料性附录）
添加回收率
表C.18种动物源性食品中硝基肤喃代谢物的添加回收率（n=10）食品名称
化合物
声明：本资料仅供学习和交流，AMOZ
添加浓度/
(pg/kg）
平均测定值/
(μg/kg)
回收率范围/
97.0107.9
95.8100.0
96.8102.8
94. 3~102. 6
96.9~102.1
100.4~105.3
88.7~~99. 9
92,1~103.g
97.2~105.3
94,1~107.4
98. 6104.0
98.7~105.7
96.8~101.2
98.4~103.1
95.4~103.9
相对标据偏差/
严禁用于商业用途s目录下载99heps/2biaozhun.7ys168.coom
96.0101.7
96.8~105.1
91.5~101.9
96.0~105.3
96,6~100,7
102.6103.7
97,1~104,7
95.9~107.7
94.7~101.7
95.3~105.4
94.8~105,0
96.0~102.6
96.2100.6
食品名称
化合物
表C.1(续）
添加浓度/
(eg/kg)
平均测定值/
(μg/kg)）
回收率范围/
89.5~101.9
92.3104.6
97.5~~105.1
96.2~108.7
97.2~100.7
97.9~106.2
95.2~105.4
94.5~102.4
96.7~105,7
94,2~101.6
96.8102.1
98.3~105.8
88.9~10t.9
93.0~104.5
97.2~104.4
100.4~107.7
97.7~103.8
97.8~105.4
98.8~107.1
-TiiKAONiKAca-
GB/T21311—2007
相对标准偏差/
，严禁用于商业用途0录下载：9httj03%biaozhun.3168.com声明：本资料使供学与和交流，4.6
95.3~106.8
94.4103.8
96.6~103.1
100.0~103.4
88.5~101.6
92.6103. 5
97.3103.8
97,2~106. 7
97.5~103.9
97. 6~103. 5
95.5~107.9
95.9~102.3
99,9106.4
GB/T2131I—2007
食品名称
化合物
声明：本资料仅供学
习和交源
表c.1(续）
深加浓度！
(μg/kg)
平均测定值/
(pg/kg)
每业用途1再录
严森用于商
回收率范国
96.4~105.6
96.4~101.7
96.6~104.4
91.9~97.3
92.6~104.5
95.1~102.1
94.6-109.4
98.0~102.5
98.2~105.3
103.0~106,5
96.6~103.6
100.1~106.2
94.5~103.6
97.5~103.3
96.5~102.3
89.7~95.0
94,1~102.0
94.1105.2
97,2~108.9
相对标准偏差/
99,4~104,8
bidozhun. ys168. com
98.3~106.0
94.1105.6
97.2~102.7
99,2~106.7
100.6~105.6
96.8~101.0
97,2~105.7
88.3~96.7
93.9100.7
95.7~105.7
96.2~108.6
99.7~~104.5
103.3~106.4
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。