【国家标准(GB)】 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

ICS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21316—2007
动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
Determination of residues of sulfonamides in foodstuffs of animal origin-LC-MS/MS
声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http：//biaozhun.ys168.com2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
1范围
动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法
GB/T21316—2007
本标准规定了动物源性食品中磺胺类共计23种磺胺药物残留量高效液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于肝、肾、肌肉、水产品和牛奶等动物源性食品中磺胺咪、甲氧芋啶、磺胺索嘧啶、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺嚏唑、磺胺甲嘧啶、磺胺唑、碰胺一甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲二唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺达唻、磺胺多辛、磺胺甲唑、磺胺异唑，磺胺苯酰、磺胺地索辛、磺胺喹沙琳、磺胺苯吡唑和磺胺硝苯残留基的定性确证和定盘测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用丁本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682—1992分析实验室用水规格和试验方法（ncqISO3696：1987）3原理
试样中加人C填料后研磨均勾，其中磺胺类药物残留用乙肪-水在微波辐照辅助下进行提取，用乙睛饱和的正已烷液液分配净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。4试剂和材料
声明：除解集用秘鸿为思汞勇b：是录巍定卫级余iaozhun.ys168.com4.1乙：色谱纯。
甲酸：优级纯。
4.3正已烷：色谱纯。
正丙醇。
无水硫酸钠：优级纯，500℃灼烧4h，置于干燥器中备用。Cu填料：40gn。
硅藻土：化学纯。
乙睛-水（1000十30）溶液：取1000mL乙，加人30ml，水，混合均勾。4.9
乙睛-水（1+1)溶液：将乙腊(4.1)与水按体积比1，1混合均勾。4,10水-年酸（999+1）：准确吸取1mL甲酸（4.2）于1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度，混勾。4.11乙腈饱和正已烷：量取200mL正已烧（4.3）于250mL分液漏斗中，加于少量乙腈，剧烈振摇数分钟，静止分层后，弃去下层乙崩层即得。4.12标准物质：磺胺滕（sulfaguanidinc，SGV）、甲氧卡啶（trimnethoprim，TMP）、磺胺索嘧啶（sulfisomidine，SIM）、磺胺酰（suliacetamide，SAA）、磺胺嘧啶（sulfadiazine，SDZ）、磺胺吡啶（sulfapyri-dine，SPD）磺胺噻壁（sulfathiazole，STZ）、磺胺甲嘧啶（sulfamerazinc，SMR）、磺胺剑唑（sulfamox-ole，SMO）、磺胺二甲嘧啶（sulfadimidine，SDM）、磺胺甲氧嗪（sulfamethoxypyridazine，SMP）、磺胺甲GB/T21316—2007
二唑（sulfamcthizole，SMT）、磺胺对甲氧嘧啶（sulfamethoxydiazine.SMD）磺胺间甲氧嘧啶（sulfamonomethoxine，SMM）、磺胺氣达嗪（sulfachlorpyridazine，SCP）、磺胺多辛（sulfadoxine，SDx）、磺胺甲唑（sulfatnetloxazole，SMz）磺胺异剃唑（sulfafurazole，SFZ）、磺胺苯酰（sulFabenzamide，SBA）、磺胺地索辛（sujiadimethoxine，SDT）、磺胺唑沙啉（sullaquinoxaline，SQX）、磺胺苯吡唑（sulfaphenazoleSPA）、磺胺硝苯（sulfanitran，SAN)，纯度大于等子99%。4.1323种磺胺标准储备溶液：0.1mg/mL。分别准确称取按其纯度折算为100%的每种磺胺标准物质（4.12)10.0mg，用乙肺溶解并定容至100mL，该标准储备溶液一20℃避光保存，有效期12个月，4.1423种磺胺混合标准中间落液：10g/mlL。准确移取各种磺胺类标准储备浴液（4.13)10tnL于100ml.棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，该混合标准中间溶液在一20℃避光保存，有效期6个月。4.1523种磺胺泥合标准工作溶液：根据需要用乙-水(4.9）由混合标准中间溶液（4.14)稀释成合适的混合标准工作济液，现用现配。5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱串联仪：配有电喷雾离子源。5.2高速组织鹅碎机。
5.3均质器。
5.4旋转蒸发器。
5.5氮坎仪。
5.6涡旋泥匀器。
5.7分析天平感景0.1mg和0.01g各--台。5.8真空泵。
5.9移液器.1mL,2mL.
5.10棕色鸡心瓶：150mL。
5.11样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。5.12大号玻璃研钵。
5.13pH计：测量精度士0.2。
喜期：本落料夜供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com5.15棕色分液漏斗：100mL。
具螺旋盖聚四氟乙烯离心管：50ml-。5.17
超纯水仪。
微波炉：家用，带有光波模式，功率700W。5.19超声波发生器。
6试样制备与保存
6.1肌肉、内脏、鱼和虾
从原始样品中取出代表性样品，经高速组织捣降机均匀捣碎，用四分法缩分出适景试样，均分成两份，分别装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于一20℃保存。6.2肠衣
从原始样品中取出代表性样品，用剪刀成4mm的碎片，用四分法缩分出适最试样，均分成两份，分别装入洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于一20C保存。6.3牛奶
从原始样品中取出代表性样品，用组织捣碎机充分混勾，均分成两份，分别装人洁净容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。将试样于小C避光保存。2
7样品处理
7.1提取
7.1.1肌肉、内脏、鱼、虾和肠衣GB/T21316—2007
称取2g（精确至0.01g）试样置于皱璃研钵内，再称取约6g（精确至0.01g)Cls填料(4.6)加至试样上用玻璃杆轻轻研磨，使样品与填料混合均匀（色泽均，状态分散），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，加入25mL乙睛-水溶液（4.8），旋振荡1min，放入家用微波炉中在光波模式下微波输照30s，3000r/min离心Smin，将乙肪层移入100mL棕色分液凝斗中。离心后的沉淀物再加人25mL乙脑摇勾，微波辅助提取30s.3000z/min离心5mtn，合并乙腾提取液，待净化。7.1.2牛奶
取2g（精确至0.01g）牛奶，置于被璃研钵内，加人6g（精确至0,01g）硅藻土（4.7).另加入6g（精确至0.01g)C1填料（4.6），用玻璃柠轻轻研磨305，使样品与填料混合均勾（色泽均一，状态分散），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯试管中，加人25mL乙腈-水济液（4.8），旋涡振荡1min，故人家用微波炉中光波模式下微波辐照30s，于3000r/min离心5min，将艺睛层移人100mL棕色分液漏斗中离心后的沉淀物再加人25mL乙脂帮，微波辅助提取305，于3000z/min离心5min，合并乙婧提取液，待净化。
7.2净化
提取液中加人25mL乙睛饱和正已烷济液（4.11），掠摇5min，将底层乙腩溶液移人150ml棕色鸡心瓶中，加入10mL正丙醇（4.4），用旋转蒸发仪于45C水浴中减压蒸发至近干，氮气流吹干，准确加入1mL乙腊-水溶液（4.9），超声30s溶解残渣，将溶解液移人10mL棕色离心管中，加0.5mLz肺饱和正巴烷（4.11），涡旋板荡2min，于3000/min离心5min，弃去正已烷溶液，取底层乙脑-水溶液过0.22μm微孔滤膜，供商效液相色诺-质谱/质谱测定。8定
8.1标准工作曲线制备
声明：用相疫料电播品摄质超瓶液制缺混冷标雅液康列刷快载/t/20tunlo0s8mdom200ng/ml.1000ng/mL（分别相当于测试样品中含有5ug/kg、10μg/kg、20μg/kg.100ug/kg、500μg/kg的目标化合物）按8.2和8.3规定测定并制备标准曲线。8.2液相色谱条件
色谱柱：IntcrsilODS-3，5μm，150mmX4.6mm（内径）或机当者；a)
流动相及洗脱条件见表1：
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
流速：0.8mL/min
柱温：20℃；
进样量：20μL。
流动相A（乙游）
疏动相B(0,1%甲酸）
GB/T21316—2007
8.3质谱/质诺条件
参见附录A。
8.4液相色谱-质谱/质谱测定
8,4.1定性测定
按照上达条件定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质最色谱峰的保留时问与标唯浴液相比在土2.5%的允许偏差之内：待测化合物的定性离了对的重构离子色谱峰的信哚比大于或等于3（S/N≥3），定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大丁或等于10（S/N≥10）：定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对车度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的尽标化合物。23种磺胺混合标准工作溶液的液相色谱/申联质谐多反应监测（MRM）色谱图和各磺胺药物相对保留时间参见图B.1和表B.1。
定性时相对离子丰度的最大允许偏差裹2
相对离子丰度
允许的相对偏差
8.4.2定意测定
按照外标法进行定量计算。
9结果计算
>20%~50%
>10%~20%
试样中每种磺胺药物残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：X=××1000
式中：
x一—一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg)；c-一从标准工作曲线得到的被测组分溶被浓度，单位为纳克每毫升（ng/mI.）；V—试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m—试样溶液所代表的质量，单位为克（g)。10%
声明·苯赞释疫摩身籍交流，严禁用于商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com10定量限（L0Q）
本方法在动物肝、肾、肌肉组织和牛奶中23种磺胺药物残留的定量限均为50ug/kg：在水产品牛23种磺胺药物残留的定限为10ug/kg。11回收率和精密度
参见表c.1表c.5。
质谱/质谱测定参考条件：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描：
附录A
（资料性附录）
质/质谱测定参考条件\
检测方式：多重反应监测(MRM)；电喷雾电压：5500V：
穿化气压力：0.065MPa；
气帘气压力0.016MPa
辅助气压力：0.060MPa
离子源溢度：175℃；
定性离子对、定量离子对、碰撞电压和去簇电压，见表A.1。CB/T21316--2007
表A。123种磺胺的定性离子对、定量离子对、碰撞电压和去簇电压名称
甲氧芹啶
磺胺索嘧啶
磺胺酷酰
声明：
定性离子对(m/2)
215/156
215/108
291.1/230
291.1/261
279.2/124
279.2/186
215/156
定量离子对（m/z）
215/156
291.1/230
279.2/124
215/156
215/108
严禁用于商业思途！
本资料仅供学习利和庭6
磺胺嘧啶
251/108
磺鞍吡啶
磺咽唑
磺胺甲嘧啶
磺胺唑
璜胺二伊嘧啶
磺胺甲氧喉
250/156
250/184
256/156
256/108
265/156
265/172
268/156
268/113
279/156
279/186
281/156
281/108
2517156
250/156
256/156
265/156
268/156
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281/156
硅速电压/V
去族电压/V
录下载：24http://biaozhun55ys168.com35
所列参数是在AP14000串联质详仪上完成的，此处列出的实验用型号仅是为了提供参考，并不涉及商业H的，12
鼓励标准使用者尝试不尚厂家和型号的仪器。5
GB/T21316—2007
磷胺甲二唑
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺间甲氧噬啶
磺胺氣达嗪
磺胺多辛
磺胺甲阈唑
磺胺异划唑
磺胺苯
磺般地索卒
磺胺唑沙啉
磺胺苯吡唑
磺胺硝苯
定性离子对(m/1)
271/156
271/108
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281/108
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276.9/156
276.9/108
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311/108
301/156
301/108
315/156
315/222
336.1/294
表A.1(续）
定量离子对(m/z)
271/156
281/156
281/155
285/156
311/156
254/156
268/156
276.9/156
311/156
301/156
315/156
336.1/294
吉明：本资料仅供学习租交98严禁用于商业用途！硅撞电压/V
去蕨电压/V
电录下载26http：/Xbiaozhur5ys168.co6. 3e6
附录B
（资料性附录）
标准溶液液相色谱/串联质谱色谱图和参考保留时间15.52
GB/T21316—2007
2426283032
声明：本资料仅供学国和交流种磺标准面作旁随随相龟谱伟联质谱色错图iaozhun.ys168.com23种磺胺标准工作溶液参考保留时间表B.1
化合物名称
磺胺咪
甲氧芊啶
磺胺索嘧啶
磺敲醋酰
磺胺嘧啶
磺胺吡啶
磺胺噻唑
磺胺甲嘧啶
磺胺剧唑
磺胺二甲咚啶
磺胺甲氧嗪
磺胺甲二唑
保留时间/min
化合物名称
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺间中氨嘧啶
磺胺氛达嗪
磺胺多辛
硕胺甲剧唑
磺胺异唑
磺胺苯酰
磺胺地索辛
磺胺壁沙嗽
磺胺苯吡唑
磺胺硝苯
保图时间/min
GB/T21316--2007
化合物
磺胺殊
甲氧苯啶
磺胺索嘧院
磺胺酸酰
磺胺嘧啶
附录C
（资料性附录）
添加回收率
鸡肉中磺胺类抗生素添加回收及相对标准偏差（n=6）添加浓度/
(μg/kg)
平均定装度/
(μg/kg)
平均回收率/
相对标准偏差！
耳录下载：thttp:/hiaozhuh.ys168.c声明：磺藤费科仅供学习和双流，严禁用王商业途！
磺胺噻唑
磺胺甲嘧啶
磺胺蝴唑
磺胺二甲噬啶
璜胺甲氧露
化合物
磺胺甲二唑
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺间甲氧嘧啶
硝磺胺氯达骤
磺胺多辛
磺胺甲對唑
磺胺异唑
添加浓度/
(μg/kg)
声明：本资料仅供学习和交5统，100
磺嵌苯酰
磺政地索辛
磺胺噻沙琳
磺胺苯吡唑
磺鞍硝萃
表C.1（续）
乎均测定浓度/
(μg/kg)
罕均回收率！
GB/T21316-—2007
相对标准偏差/
且录下载?-ittp://biaozhure.$s168.com严禁用于商限用途！
GB/T21316—2007
化合物
磺胺腺
中氧华啶
磺胺索嘧
磺胺醋酰
磺胺啶
磺胺吡啶
磺胺啰唑
表C.2鸡肝中磺胺类抗生素添加回收及柏对标准偏差（n=6)添圳浓度
(μug/kg)
声明本资料仅供学牙和器流
磺胺伊嘧啶
磺胺谢强
磺胺二甲嘧院
磺胺甲氧剪
磺胺驴二唑
平均测定浓度/
(μg/kg)
用途！
亚林用工市
平均回收率/
相对标准痛差/
/biaozhu,ys168.com
化合物
磺胺对甲氧嘧啶
锁腰间甲氧嘧啶
磺股数达畴
磺胺多辛
磺胺甲龄唑
磺胺异制唑
添加浓度/
(μg/kg)
表C.2（续）
乎均测定浓度！
(μg/kg)
藓瞬呼仅供学习和交统，严禁用于商业拥途！明：
磺胺她索辛
磺胺唑抄啉
磺腰莱吡唑
磺胺硝苯
乎均回收率
目录下载ohttp:/
CB/T21316—2007
相对标准偏差/
oiaozhun5.s168.co
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