【国家标准(GB)】 动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量检测方法 高效液相色谱/串联质谱法

1CS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21310—2007
动物源性食品中甲状腺拮抗剂残留量检测方法
高效液相色谱/串联质谱法
Determinaiion of residues of thyreostats in foodstuffs of animal origin-HPLC-MS/MSmethod
声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http：//biaozhun.ys168.com2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
1范围
动物源性食品中甲状腺措抗剂残留量检测方法高效液相色谱/串联质谱法-iKAONrKAca-
GB/T21310—2007
本标准规定了动物源性食品中硫腺嘧啶（2-thiouracil，TU）、甲疏咪唑（methimazole，TAP）、甲基硫氧嘧啶（methylthiouracil，MTU）、丙碰氧嘧啶（propylthiouracil，PTU）、苯基硫氧嘧啶（phenylthiouracil，PhTU）、2-巯基苯并咪唑（2-mercaptobenzimidazole，MBI）残留量商效液相色谐/中联质谱测定方法。
本标准适用于动物源性食品肌肉（免肉、鸡肉、牛肉、猪肉）、内脏（免肝、鸡肝）、奶和蛋中硫嘧啶、甲巯咪唑，甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶，苯基硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑残留量的定性确证和定盐测定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682--1992，neqISO3696：1987）3方法捷要
采用乙酸乙酯提取试样中残留的硫腺嘧啶、甲疏咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶和雷萌基茶善曦咪经题液绿液液分配固想落取柱净化唇，采用高效液相色谱/串联质谱定性检/biaozhun.ysT68.com
测，内标法定量。
4试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：高效液相色谱级。
4.2甲酸：高效液相色谱级。
4.3乙酸乙：高效液相色谱级。
4，4正已烷，高效液相色谱级。4.5乙睛：高效液相色谱级。
4.6磷酸。
4.7巯基乙醇。
4.8二水乙二胺四乙酸二钠。
4.9无水硫酸钠：650℃灼烧4h，置手于燥器中备用。4.100.1mo1/L乙二胺四乙酸二钠溶液：准确称取37.2g二水乙二胺四乙酸二钠（4.8），用水溶解并定容至1L。
4.11乙睛饱和的正己烷：量取正已烷80mL于100mL分液漏斗中，加人适量乙脂后，刷烈振摇，待分配平衡后，弃去乙层。
4.120.1%甲酸水溶液：准确量取1mL甲酸（4.2),用水定容至1L。4.130.0025mol/L磷酸；准录取0.2mL磷酸，用水定容至1L.正
GB/T21310—2007
4.[4溶解液：90mL0.1%甲酸水溶液(4.12)中加人10mL甲醇。4.15标准物质：硫嘧啶、印咪唑、甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、苯基硫氧嘧啶、2-雍基苯并咪唑，纯度均99%，
4.16内标物质5，6-二甲基碰氧嘧啶（5，6-dimethyl-2-thiouracil，DMTU）纯度≥99%4.17标准储备溶液：准确称取适量标准品（精确至0.0001名），用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的标准偿备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个厅。4.18混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（4.17）各1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合中间标准溶液，4C冷藏避光保存，有效期1个月。4.19混合标准工作溶液：根据第要用甲醇把混合中间标准溶液（4.18）稀释成适合浓度的混合标准工作溶液，现用现配。
4.20内标标准储备液：准确称取适量5，6-二甲基硫氧嘧啶（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配制成浓度为100μg/mL的内标标准储备溶液，一18℃冷冻避光保存，有效期3个月，4.21内标标准工作落液：准确移取0.1mL内标标准储备液（4.20)于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为1g/mL的内标标准工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1个月。4.22HLB固相萃取柱：200mg，6mL，或相当者。4.23微孔滤膜：0.20m，有机相。4.24氮气：纯度≥99.999%。
4.25氩气：纯度≥99.999%。
5仪器和设备
5.1液相色诺/串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI)。5.2组织揭碎机。
5.3分析天平，感量0.0001g,0.01名。声朗：原科役供擎与釉交流，严禁用于商业用途！目录下载：http://biaozhun.ys168.com5.5振劳器。
5.6离心机.10000r/min。
5.7氮政仪。
5.8旋涡混合器。
超声波水浴。
减压浓缩仪。
5.1裂形瓶：100mL。
具塞塑料离心管：50mL。
刻度试管：10mL。
移液枪：5ml1mL,200μl。
5.15分液漏斗：50mL。
6试样制备
肌肉和内脏
从原始样品取出有代表性伴品约500，用组织碎机充分捣碎混勾，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于一18℃冷冻避光保存。6.2奶
从原始样品取出有代表性样品约500g，充分揽拌混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标朗标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。2
-KAoNiKAca-
GB/T21310—2007
从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织搭碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于4℃冷藏避光保存。注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化，7样品处理
7.1提取
称取约5多试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，依次加入150uL内标标准工作液（4.21）、50L蕴基乙醇（4.7）、30uL0.1m0L/L的乙二胺四乙酸二钠液（4.10）和适最无水硫酸钳（4.9），吸去样品中的水分，再加人20mL乙酸乙能，用均质器以100001/min均质1min后，荡提取20min，再以4000r/min离心5mia，收集上清液于100mL梨形瓶中。渣用20mL乙酸乙酯再提取-次，合并上清液，在40℃水浴中减压浓缩至近干。残留物用10mL乙睛溶解，并转移至50mL分液漏斗中，用30mL乙睛饱利后的正已烷（4.11）分三次液液分配，去除油脂。收集乙睛层，在40亡水浴中减压浓缩至近干，残留物用10mL00025mol/L磷酸（1.13)济解，超声波水浴助溶5min后，待净化。7.2净化
HLB固相萃敢柱依次用5mL甲醇、5mL水预淋流后，转入10mL样品提取液（7.1）。先用5mL水进行淋洗，弃去：再用5mL甲醇进行洗脱，收集洗脱液于10mL刻度试管中。整个固相萃取净化过程控制流速不超过2mL/min。洗脱液在40℃C下用Nz吹干。残留物用1mL溶解液（4.11）溶解，涡动1min后+过0.2产m微孔滤膜，供仪器检测。7.3混合基质标准溶液的制备
称取5份约5g阴性试样（精确至0.01g）于50mL塑料离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分别加人混合中间标准溶液（4.18）或泥合标准工作溶液（4.19），再加人15QμL内标标准工作液（4.21），余下操作同7.1和7.2。
商明资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http//biaozhun.ys168.com8.1液相色谱条件
色谱柱：WatersACQUITYUPLCmBEHC50mmX2.1mm（内径），1.7μm，或相当者：a)
柱温：30℃：
流速：0.2mL/min：
进样盘：5μL：
流动相及洗脱条件见表1。
表1流动相及梯度洗脱条件
时间/min
8.2串联质谱条件
参见附录A。
流动相A(甲醇）
流动相B(4.12)
GB/T21310—2007
8.3液相色谱/串联质谱测定
8.3.1定性定
按照上述条件测定样品和混合基质标准溶液，如果样品的质录色谱峰保留时间与混合基质标准溶液一致；定性离子对的相对丰度与浓度相当的混合基质标准溶液的相对半度一致，相对车度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。混合基质标准溶液的液相色谐/串联质谱色谱图参见图B.1。
表2定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度
允许的相对偏差
8.3.2定量测定
按照内标法进行定量计算。
8.4空白试验
除不称取试样外，均按照以上步骤进行。9结果计算
按式（1)进行计算：
>20%~50%
式中：
x一--试样中分析物的含量，单位为微克每千克（ug/kg）；R一—样液中的分析物与内标物蜂面积比值；>10%~20%
c—-混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)V一样液最终定容体积，单位为毫开（mL）：10%
声明服，本资台落质称准翻液折的分柜物韦内标物睡面积比值录下载：http://biaozhun.ys168.comm
一试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果带将空白值扣除。10测定低限（LOQ）
本方法的测定低限为：硫豚嘧啶、甲殖咪唑50ug/kg：甲基硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑30ug/kg；内硫氧嘧啶、苯基硫氛嘧啶5pg/kg。11回收率和精密度
参见表C.1。
毛细管电压：3.0kV；
源温度：120℃；
去溶剂温度：350℃：
锥孔气流：氮气，流速50L/h；
去溶剂气流：氮气，流速600L/h，附录A
（资料性附录）
串联质谱条件
碰撞气：氩气，碰撞气压2.60×10-*Pa扫描方式：正离子扫描：
检测方式：多反应监测（MRM)，监测条件见表A,1。表A.1多反应监测条件
化合物
甲巯咪唑
硫脲嘧啶
甲基硫氧嘧啶
母离子(m/z)
子离子（m/2）
驻留时间/
锥孔电压/
-TiKAONIKAca-
CB/T21310-2007
遗随能最/
富明统案翼供学习和交流，严禁用于翁业用途！目自录下载：
http35/biaothun.yaol68.cqm
5,6-二甲基硫氧密啶
《DMTU)（内标）
丙硫氧嘧啶
苯基巯氧密啶
(PhTU)
3用于定量。
1）所列参数是在WatersQuattroPremier质谱仅上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓通标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。5
GB/T21310—2007
声明：本资供学习和交流，
附录B
（资料性附录）
标准样品质盘色谱图bZxz.net
128.9>112
114.9>57.2
114. 9>88
142.6>83.6
142.6>125.6
156.7>139.8
严禁用于商业用途！目录下载：http://i.aaaun.ys168.com2.00
170.8>111.7
151>93
151>55
204.9>102.7
204,9>187.8
注：按保留时间先后依次为：硫脉噬啶、甲蔬殊唑、甲基硫氧嘧啶、5，6-二甲基硫氧嘧啶、丙硫氧嘧啶、2-巯基苯并咪唑和苯基硫氧嘧啶。
甲状腺拮抗剂标准样品质量色谱图食品名称
化合物
附录C
（资料性附录）
添加回收率
8种动物源性食品中甲状腺拮抗剂添加回收率（h=10）添加浓度/
(μg/kg)
平均测定值/
(pg/kg)
回收率范围/
96.9~105.8
98.7~108.9
99.0~107.8
98.9~105.8
90.8~101.5
92.0~98.9
98.9104.5
90.7~101.9
88,2~109.4
98.2~108.6
93.9~100.9
81.3~89.1
ikAoNikAca
GB/T21310—2007
相对标准偏差
，严禁用于商业明途！
目录下载：4ht98p2//biaozhun5.yps168.com告明：本资
料学习和交瀚，
94.7108.8
95.7~105,2
97.0105.4
97.9~103.8
92,.7~102.9
91.0~107.8
93.9~102.8
94.8~107.5
95.0108.9
88.9~~101.5
90,7~101.9
97.2~101.7
100.2~109.3
97.2~103.6
93.9~105.9
GB/T21310---2007
食品名称
化合物
添加浓度/
(pg/kg)
表C.1(续）
平均测定值/
(μg/kg)
回收率范围/
98.2~109.1
91.2~106.5
100.7~1D6.8
87.2~99.5
95.3~103.2
99.0~105,4
92.9~103,8
98.7~104.2
91,0~102.7
95.9~106.8
93.8~102.5
95.6~108.9
93.9~99. 5
96.7~108.9
98,2-109.7
100.2~109.4
相对标准偏差/
95,2~101.6
料仅供学习和交滋。
严禁用于商业途！自录下载g-btdsp3//baozhuns.gs168.cdm告明：本资
93.2~103.1
94.2~106.2
101.7~105.8
98.2~109.5
95.3101.2
97.0~108.4
96.9~105.8
92.7~102.2
92.0~98.7
94.7~102. 7
95,7108.9
91.9~108.9
96.6103.1
98.2~109.7
食品名称
化合物
添加浓度/
(μg/kg)
表C.1(续）
平均测定值/
(μng/kg)
回收率范限/
100.2~108.4
95.2101.6
94.9103.2
93.2~99.1
94.2106.2
101.7~109.8
98.2~109.5
95.3109.2
97.0108.7
92.9-103.8
92.7102.2
91.0~98,7
95,9~106.8
93.8~102.5
95.7~108. 9
100.9~109.5
-rKAoNiKAca-
GB/T21310—2007
相对标准偏萃/
95.6~108.9
吉明：本资料仅供学习和交源。严禁用于商业湖途！
百下：2.bidgpi//bjaozhuna.ys168.com免肝
100.2~108.4
95.2~101.6
94.9-103.2
94.2~106.2
101,7~109.8
98,2~109.5
95.3109.2
97.0~107. 4
92.9~103.8
98.7102.2
91.0~108.7
95.9~106.8
93.8102.5
95. 6~108. 9
GB/T21310—2007
食品名称
化合物
添加浓度/
(ig/kg)
声明：本资料钢供学习和交。
表C.1(续）
平均测定值/
(μg/kg)
回收率范围/
96.6~108.9
95.2~108.4
100.2~108.4
95.2~101.6
94.9~103.2
95.2~107.）
93.8106.5
95.0~99.8
83.2-99.5
95.5103.5
96.9~105.7
98.4~105.4
94.6~101.5
92.0~99.8
96.9~105.8
相对标推偏差/
。严禁用于商业用途！自隶下载-hitoaps//bliaozhun5.ys168.c200
99.0~107.8
92.2~98.3
98.2~108.8
93.2~100.2
96.6~103.5
90.7~101,9
93.2~109,4
95.7~105.9
97.0~104.6
90.2~108.1
97.4~108.2
101.7~108.8
食品名称
化合物
添加浓度/
(rg/kg)
表C(续）
平均测定值/
(μg/kg）
声明：本资料供学
匀和交流，
一严禁用于商业用速！
回收率范团/
95.9-105. 8
94,7~104.9
97.8-107.8
94.3~106.2
97.0~108.8
98.7-104.4
91.7~105.9
97,2~103.8
100.2109.3
96.2~106.6
93.9104.7
98.2~109.1
92.8106.5
95.0102.8
87, 2 ~ 99. 5
下餐：.5188.3
niKAoNiKAca-
GB/T21310-—2007
相对标准偏差/
ts168.com
//biaozhun
96.9~105.8
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