【国家标准(GB)】 动物源食品中3-甲基喹喔啉-2-羧酸残留的测定高效液相色谱法

ICS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21322—2007
动物源食品中3-甲基喹喔琳-2-羧酸残留的测定
高效液相色谱法
Determination of 3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid residues in animalorigin food-High performance liquid chromatography method2007-10-29发布
敬码防份
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录前言
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：华中农业大学、中国检验检疫科学研究院GB/T21322—2007
本标准主要起草人：袁宗辉、吴玉杰、陶燕飞、王玉莲、黄玲利、陈冬梅、彭涛、刘振利、彭大鹏、戴梦红。
1范围
动物源食品中3-甲基喹喔啉-2-羧酸高效液相色谱法
残留的测定
GB/T21322—2007
本标准规定了猪、鸡、鱼可食性组织中3-甲基唑喔啉-2-羧酸（3-methyl-quinoxaline-2-carboxylicacid,MQCA)残留检测的制样和高效液相色谱的测定方法。本标准适用于猪、鸡肌肉、肝脏和鱼肌肉中MQCA残留的定量检测。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987）3原理
肌肉或肝脏组织样在酸性溶液中水解，然后经乙酸乙酯提取，磷酸盐缓冲溶液反萃取，用混合阴离子SPE柱净化后，高效液相色谱法（紫外检测器）测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙：色谱纯。
4.2乙酸乙酯。
偏磷酸：优级纯。
4.4磷酸：优级纯。
4.5甲酸：优级纯。
4.6磷酸氢二钾。
4.7偏磷酸甲醇溶液：准确称取偏磷酸50.0g，加人水，加热至溶解，冷却后加人甲醇200mL，加水定容至1000mL，混匀，带温保存，有效期1个月。4.8氢氧化钠溶液（0.05mol/L）：准确称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，冷却后定容至250mL，常温保存，有效期3个月。
4.9甲酸-甲醇溶液：准确量取甲酸1mL于50mL容量瓶中，加甲醇，稀释并定容至50mL，混勾，现配现用。
4.10磷酸缓冲液（0.01mol/L）：准确称取磷酸氢二钾（K,HPO·3H,0)2.28g，加900mL水溶解，磷酸调pH值至7.0，加水定容至1000mL，常温保存，有效期1个月。4.11标准品：3-甲基唑喔啉-2-羧酸，含量高于98%。4.12标准备液：准确称取MQCA10.0mg，用甲醇配成浓度为1.0mg/mL的标准贮备液，4℃避光保存，有效期6个月。
4.13固相萃取小柱MAX柱（混合阴离子交换柱）：规格60mg，3mL。GB/T21322—2007
5仪器和设备
高效液相色谱仪：配紫外检测器。5.1
5.2高速离心机。
5.3高速组织捣碎机。
5.4涡旋混合器。
5.5真空泵。
固相萃取装置。
移液器：1mL~5mL，100ul~1000μL5.7
5.8pH计。
试样制备与保存
6.1试样的制备
取新鲜猪或鸡的肌肉肝脏或鱼肌肉组织·纹6.2
试样的保存
一20℃以下购
注：在制样的操
作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化，7样品处理
7.1提取
准确称取新鱼
国冻后的试样
oog置于离心管中，加偏磷酸中醇溶液8mL.旋涡混合2rnin，n，取出上清液，在残清中再加入偏磷酸用醇溶液8mL重复提取一次，合并2次6000r/min离心
上清液。于上清浴中加乙酸乙酯83mL，旋渴混合1min，4000r/min离心10mi，取有机相层，再加乙酸乙酯8mL重复提取
合并2次有机相
有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，旋涡混和1min，放置10min，收集下层水用磷酸盐缓冲液6ml7.2净化
MAX柱依次用#
1mL/min，先后用0.0%
，合并2次水相寺净化。
再反萃取有机相一次，
mL、水3mL潘化，加
脱，40℃以下氮吹至近于
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
氢氧化钠溶液3ml
1样品提取液至MAX栏中，控制流速小于甲醇3mL淋洗抽干/2%甲酸-甲醇溶液3mL洗享0.5mL溶解残渣，旋涡混匀，待测色谱柱：C，250mm×4.6mm（内径），粒径5μm，或相当者：流动相：1%甲酸水溶液+乙睛（80%20）；流速：1.0mL/min；
紫外检测器波长：320nm；
进样量：20μL；
柱温：30℃。
7.3.2液相色谱测定
取试样溶液和标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，标准工作液及试样液中的MQCA响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，MQCA保留时间在9.0min左右，标准溶液和试样溶液的液相色谱图参见附录A。7.4标准曲线的制备
准备移取MQCA标准贮备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为25μg/L、50μg/L、100μg/L、GB/T21322—2007
250μg/L、500ug/L、1000μg/L的标准工作液。每个浓度重复3次，将测得的峰面积与相对应浓度绘制标准曲线，拟合，求回归方程和相关系数。7.5空白实验
对于除不添加标准品工作液外的阴性样品采用完全相同的步骤进行操作。8结果计算
残留量按式（1)进行计算：
式中：
试样中分析物的含量，单位为微克每于克（ug/kg）样液中的分机物专内际物峰面积比值；混合基质标雄资液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)）样液最终
积，单位
试样的员
注：计算结果
9测定低限（L0Q)
在猪、鸡、
回收率和
参见表B
享位为克（
值扣除
中的测定低限均为
4ug/kg,猎，鸡肝脏中的测定低限均为10pg/kg：S
·（1)
GB/T21322—2007
附录A
（资料性附录）
标准样品高效液相色谱图
MQCA标准溶液浓度为50μg/L的色谱图图A.1
在选定条件下，MQCA的保留时间为8.8min。min
添加浓度/(μg/kg）
添加浓度/Cqug/kg）
批次1
批次1
附录B
（资料性附录）
添加回收率
喹乙醇代谢物MQCA在猪肌肉组织中的回收率回收率/%
批次2
批次3
批次4
GB/T21322-—2007
批次5
喹乙醇代谢物MQCA在猪肝脏组织中的回收率回收率/%
批饮2
批次3
批次1
批次5
平均值（n-25）
80.8±9.1
84.4±5.0
平均值（n=25）
80.6±6.3
80.5±3.0
85.5±3.6
GB/T21322—2007
添加浓度/(rag/kg）
添加浆度/(μg/kg）
批次1
批次1
喹乙醇代谢物MQCA在鸡肌肉组织中的回收率回收率/%
批次2
批次3
批次5
喹乙醇代谢物MQCA在鸡肝脏组织中的回收率回收率/%
批次2
批饮3
批次4
批次5
平均值（n=25）
78.0±2.4
79.5±7.2
82.9±6.8
平均值（n=25）
80.6±8.5
80.2±9.1
84.1±4.2
添加浓度/（μg/kg）
批次1
喹乙醇代谢物MQCA在鱼肌肉组织中的回收率回收率/%
批次2
批次：
批次4
GB/T21322—2007
批次5
表B.6喹乙醇代谢物MQCA测定日内和日间相对标准偏差（RSD）组织
猪肌肉
猪肝脏
鸡肌肉
鸡肝脏
鱼肌肉
添加浓度/（μug/kg）
月内平均值/%
平均值（n=25)
81.5±7.6
82.6±5.2Www.bzxZ.net
85.5±4.5
日间平均值/%
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