【国家标准(GB)】 动物源食品中阿维菌素类药物残留量的测定免疫亲和-液相色谱法

ICS67.120
中华人民共和国国家标准
GB/T21321—2007
动物源食品中阿维菌素类药物
残留量的测定
免疫亲和-液相色谱法
Determination of avermectins residues in foodstuffs of animal origin-Immunoaffinity-highperformanceliquidchromatograph声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http：//biaozhun.ys168.com2007-10-29发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
1范围
动物源食品中阿维菌素类药物
残留量的测定
免疫亲和-液相色谱法
GB/T21321-—2007
本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量检测的免疫亲和-液相色法。本标准适用于牛肝脏和牛肌肉组织样品中阿维菌素、伊维菌索，多拉菌紊和埃普利诺菌素残留量的定。
本标准的方法检测限：阿维菌素、伊维菌素、多拉荫素和埃普利诺荫索均为1Hg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注H期的引用文件，其随后所存的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标谁达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标谁。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992，ncqISO3696：1987）3原理
用甲醇提取试样中四种阿维菌素类药物，经免疫亲和色谱柱净化，用甲醇洗脱。洗脱液经氮气吹干，衔生化后，用商效液相色诺-荧光检测法测定，外标法定量。4试剂和材料
除吴竭盟外暨用剂均为分析为GB682靓定单级水。共学习和菱流，严
禁用手商业用途！自录下载：http://biaozhun.ys168.com声甲：串碧
4.2乙腊：色谱纯。bzxZ.net
4.3磷酸二氢钾。
4.4氛化钾。
4.5磷酸氢二钠（Na.HPO,·12H,O)。4.6化钠。
4.7乙酸酐。
4.81-N-甲基咪唑：含量≥99%。埃菁利诺菌索标准品：纯度≥98%。4.9
阿维菌素标准品：纯度≥98%。
多拉菌素标准品：纯度≥94.3%。4.11
伊维菌素标准品：纯度≥98%。
4.13免疫亲和色谱柱（IAC柱）：长4cm，内径1cm，IAC凝胶体积为1mL。4.14组织稀释液：0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4)。称取磷酸二氢钾（4.3）0.2g、氧化钾（4.4）0.2g、磷段氢二钠（4.5）2.9g、氯化钠（4.6）8.8客，用水溶解并稀释至1L4.15洗涤液：A液、B液和C液。A液为0,01mol/L磷酸盐缓冲液（4.14）十甲醇（80十20，体积比）：B液为20%甲醇溶液；C液为50%甲醇游液。GB/T21321—2007
4.16衔生化A液：1-N-甲基咪唑十乙（2+5,体积比）现配现用。4.17衍生化B液：乙酸萨+乙肺（3十4，体积比），现配现用4.18埃普利诺菌素、阿维菌索、多拉菌素和伊维菌素标准储备液：100g/mL。准确称取适量埃普剂诺菌素、阿维菌素、多拉荫素和价维菌素标椎品（4.9~4.12），分别用乙肪配成100μ/mL的标准储备液。一20℃保存六个月。
4.19混合标准储备液：1/mL。取四种标准储备液（4.18）各1.0mL于100mL容益瓶中，用乙膜溶解并稀粹至刻度，4℃保存三个月。4.20标准工作液：分别量取适量上述混合标准储备液（1.19），用乙睛稀释成浓度为1、5、10、20、50、100和200ng/mL的系列标准溶液。5仪器
5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。5.2组织勾浆机。
5.3离心机。
5.4旋转蒸发仪。
5.5涡动仪。
5.6氮吹仪。
5.7恒温加热器。
6试样制备与保存
取新鲜或解冻的动物组织，剪碎，10000r/min勾浆1min。一20℃下保存。7分析步骤
7.1提取
称取试样1g（精确到0.01g），于30mL离心管中，加4mL甲醇，竭动1min，300r/min振荡30.min，909min高心10min，取上消液，残流用4ml甲醇重享提取1次，合并两次提取减粤：森资料夜撰学习和交，取
禁用于商业用途！自录下载：http：//biaozhun.ys168.com提取液中加20mL组织稀释液（4.14），涡动混合均勾后，过1AC柱，自然重力下流出，依次用洗涤液A液20mL，B液15mL和C液3mL（4.15）洗涤，用4mL甲醇洗脱于试管中，40℃氮气吹干。7.3衍生化
试样残渣中加100μL行生化A液（4.16），动0.5min，再加100μl.衔生化B液（4.17)，涡动0,5min，密阅，于96℃恒溢箱中衔生化反应100min。取出，冷却至室温。用乙腩稀释室2.5mL，过0.2μm滤膜进行HPLC分析。
注：标准溶液经氮气吹干后同法进行衍生化操作。7.4测定
7.4.1液相色谱条件
色谱柱：Cl，250mm×4.6mm粒径5m，或相当者。流动相：甲游+水（97+3，体积比）。流速：1mL/min。
住温：30C。
进样是：20#l。
激发波长：365nm。
发射波长：475nm.
2液相色谱测定
GB/T21321—2007
分别取适鼠衔生化后的试样液和标准工作液进行液相色谱测定，做单点校准或多点校准，以色谱峰的峰面积积分值定，标准工作液及试样液中阿维菌素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样液测定过程中应参插标准工作液，以便准确定量。标准品液相色谱图见附录人。结果计算
按式（1)计算试样中阿维菌素类药物的含量。x=cxf
式中：
X—试样中阿维菌素类药物的残留基，单位为微克每千克(rg/kg);（—试样液色谱峰对应的阿维菌素类药物浓度，单位为微克每升(g/L)；f——稀释倍数；
m试样质量，单位为克（g）。
注：测定结果用平行测定后的算术平均值表示，计算结果表示到小数点后两位。9精密度
本方法的批内变异系数≤20%，批间变异系数≤30%。（1)
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埃普利诺荫素：
阿维菌素；
影拉鼠紧；
伊维首索。
附录A
（资料性附录）
色谱图
829\91-AI
图A12\g/L阿维菌素类药物的标准溶液色谱图声明：本资料仅供学习和交流，严禁用于商业用途！目录下载：http：//biaozhun.ys168.com版权专有侵权必究
书号：155066·1-30852
GB/T21321-2007
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