【国家标准(GB)】 肉与肉制品 维生素B1含量测定

GB/T9695.27-91
中华人民共和国国家标准
肉与肉制品
维生素B1含量测定
Meat and meatproducts-Method fordetermination of vitainB, contentGB/T9695.27-91
1主题内容与适用范围
本标准规定了肉与肉制品中维生素B,含量的测定方法。本标准适用于肉与肉制品中维生素B含量的测定。2引用标准
GB9695.1肉与肉制品取样方法
试样用酸水解使维生素B1（硫胺素）游离，维生素B经酶解、纯化后在碱性高铁氰化钾作用下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素。在激发波长365nm，发射波长435nm处测定其荧光强度，荧光强度与硫色素含量成正比，以此计算维生素B的含量。4试剂
所用试剂均为分析纯，水为蒸罐水或同等纯度的水。4.1乙酸钠（GB694)：2mol/L溶液。4.2盐酸（GB622）：0.1mol/L溶液。4.3溴甲酚绿pH指示剂：变色范围：pH值为4.0（绿）~5.8（蓝）。0.1g指示剂与0.05mol/L氢氧化钠溶液2.8mL在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至200mL。4.4溴酚蓝pH指示剂：变色范围：pH值为3.0（黄）~4.6（蓝）。0.1g指示剂与0.05mol/l氢氧化钠溶液3mL在玛瑙乳钵中研磨溶解，以水稀至250mL。4.5高峰淀粉酶：10%溶液。
4.6氯化钾（GB646)：25%溶液。4.7酸性氯化钾溶液：每升氯化钾溶液中加入8.5mL浓盐酸。4.8氢氧化钠（GB629)：15%溶液。4.9铁氰化钾（GB644)：1%溶液。4.10氧化剂：1%铁氰化钾溶液1mL，用15%氢氧化钠溶液稀释至100L。临用前配制。4.11异丁醇。
4.1295%乙醇（GB679)：20%溶液。4.13酸性乙醇：20%乙醇溶液用0.1mol/L盐酸溶液调节pH为3.4~4.3。4.14人造沸石：市售品要经活化处理活化方法：将粒度40~60目的人造沸石置于烧杯中，加约5倍量的热水搅拌，静置后倾出上清液弃去。重复此操作，直至上清液透明。接着加入5倍量的3%乙酸溶液搅拌浸泡10min，静置后倾去上清液，重复此操作3次。然后加入约5倍量热的酸性氯化钟溶液，在沸水浴中加热25min，弃去上清液，加3%乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至无氯离子为正（用硝酸银溶液检查）。将处理好的人造沸石浸没于水中保存，也可于80℃备用。维生素B，回收率要大于85%
4.15维生素B标准溶液wwW.bzxz.Net
国家技术监督局1991-03-26批准1991-12-01实施
GB/T9695.27-91
4.15.1标准贮备液100ug/mL：
称取50.0mg维生素B，标准品于500mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀释至刻度，置冰箱保存。
4.15.2标准工作液10μg/mL：
取标准贮备液10.0mL，用酸性乙醇定容至100mL棕色容量瓶中。5仪器和设备
5.1实验室常规设备；
5.2绞肉机：孔径不超过4mm；
5.3培养箱：可控制温度45~50℃；5.4棕色具塞试管：25~40mL；
5.5荧光分光光度计；
5.6人造沸石玻璃层析柱：构造如图1。层析柱可控制流速为1mL/min。准备方法：将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和控制溶液流速。把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中，其高度约10cm（约用1.5g人造沸石）仔细洗下贮液槽壁上的人造沸石颗粒。在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。
单位：mm
图1玻璃层析柱
5.7高压釜。
6试样
6.1按GB9695.19取样。
6.2取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少两次使其混匀，贮于密闭器中备用。尽快分析试样。
7分析步骤
7.1水解
称取4~6g试样（精确至0.001g）（约含维生素Bi10~25ug）于150mL具塞锥形瓶中，加入0.1mol盐酸溶液50mL，搅匀，于沸水浴中水解30min。取出冷却至室温。7.2酶解
用乙酸钠溶液调节试样水解液，使pH为4.0~4.5，用溴甲酚绿指示剂在点滴板上检查。加入高峰淀粉酶溶液5mL，混匀，在45~50℃培养箱中保温3h。取出冷却后0.1mol/L盐酸调整pH为3.5左右，用溴酚蓝指示剂在点滴板上检查。将溶液全部转移到100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。摇匀，用滤纸过滤，取滤液备用。7.3净化
取酶解滤液25.0mL，注入人造沸石层析柱，层析柱流速控制在1mL/min左右，弃去流出液。用3份5mL近沸热水洗涤层析柱，弃去流出液。用25mL60~80℃热的酸性氯化钾溶液分5次洗脱维生素B1，收集于25mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化钾溶液定容。混匀备用。
国家技术监督局1991-03-26批准1991-12-01实施
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7．4氧化
取2支40mL具塞棕色试管，加入1.5g氯化钾或氯化钠。再加入净化后的样液5.0mL，一支试管中加入氧化剂3mL，立即旋摇试管，混匀，加入异丁醇10mL萃取，塞上塞子振摇90s。静置分层。另一支试管作为空白对照，加入15%氢氧化钠溶液3mL，旋摇混匀，加入异丁醇10mL萃取，静置分层，异丁醇层用无水硫酸钠脱水。7.5荧光测定
准备好荧光分光光度计，调节激光波长为365nm，发射波长为435nm，狭缝为5mm，取异丁醇萃取液，置于比色血中，测定氧化样品管中的荧光强度为I，空白样品管中的荧光强度为Ig。
7.6维生素B,标准的测定
取维生素B,标准工作液2.0mL，于150mL具塞锥形瓶中，同样按7.1~7.5条操作步骤进行水解、酶解、净化、氧化、测定。氧化标准管中荧光强度为Q，空白标准管中荧光强度为Qo。
8分析结果的计算
计算公式：
1-1。×20
9-Q。m
式中：X试样维生素B的含量，mg/kg:I氧化样品管中的异丁醇液的荧光强度I空白样品管中的异丁醇溶液的荧光强度；Q氧化标准管中的异丁醇溶液的荧光强度：Qo—空白标准管中的异丁醇溶液的荧光强度；m-
一试样质量，g。
当符合允许差规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果。9允许差
由同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过其算术平均值的20%。附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人王津生、张燕婉。国家技术监督局1991-03-26批准1991-12-01实施
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