【国家标准(GB)】 肉与肉制品 L(一)-羟脯氨酸含量测定

中华人民共和国国家标准
肉与肉制品L(-)-羟脯氨酸含量测定Meat and meat products-Method for determinationof L(-)-hydroxyprolin contentGB 9695.23-90
本标准等效采用国际标准ISO3496-1978《肉和肉制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定》。1主题内容与适用范围
本标准规定了肉与肉制品中L（-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本标准适用于肉与肉制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。引用标准
GB9695.19肉与肉制品取样方法
3原理
试样在氯化亚锡的盐酸溶液中水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558nm处进行比色测定。4试剂
所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。氯化亚锡(GB638)：0.75%溶液。4.1
将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中，再加入500ml浓盐酸(GB622)。4.2盐酸(GB622):6mol/L溶液。
4.3氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4缓冲液：将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水，稀至1L，此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5氯胺T(HG3-972)溶液：将1.41g氯胺T,溶于10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。
4.6显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。
4.7L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1标准储备液500ug/mL：称取50.0mg/L()-羟脯氨酸用少量水溶解，加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。
4.7.2标准工作液5ug/mL：吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中，定容。5仪器和设备bzxZ.net
5.1实验室常规设备。
5.2绞肉机；孔径不超过4mm。
5.3配有冷凝管的三角瓶：250mL。5.4恒温水浴。
5.5试管加热器或水浴，可控温于60℃。5.6分光光度计。
6试样
6.1按GB9695.19取样。
6.2试样准备
6.2.1生肉与生肉制品：用快刀把完整的肉切成约0.5cm**3的小丁，装入密封样品盒中，或者用耐热塑料袋真空包装.在70℃以上保温30min.以下按6.22步骤进行。6.2.2熟肉制品：取有代表性的试样200g，于绞肉机中绞两次，使其混匀，贮于容器中备用。6.3制备好的试样要尽快分析，若不立即分析要密封冷藏保存，防止变质和成分变化。贮存的试样在启用时必须重新匀质。7分析步骤
7.1试样前处理
称取试样5g（精确至0.001g）放入250mL磨口三角瓶中，注意不要使样品粘在壁上。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL，置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和
滤纸,冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取5~25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8土0.2,过滤于250mL容量瓶中，用30mL水冲洗烧杯和滤纸
上的氢氧化亚锡沉淀，反复三次,把洗液并入滤液中，以水洗至刻度,摇匀备用。7.2测定
7.2.1标准曲线的绘制
吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.0010.00,20.00.30.00,40.00mL分别置于100ml容量瓶中，定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0ug/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL，分别加入20mL具塞试管中，加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色
剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴）中保温20min后取出,迅速冷却，在波长558土2nm处测定吸光值，绘制标准曲线。7.2.2试样测定
从250mL容量瓶中吸取已制备好的样液（7.1)4.00mL于20mL具塞试管中，以下按7.2.1步骤进行，同时作空白试验。
8分析结果的计算
计算公式：
式中：X样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,%;C从标准曲线上查得相应的 L(-)-羟脯氨酸量,ug:m——称取试样的质量，g;
V1一从200mL容量瓶中吸取滤液的体积,mL当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01%。
9允许差
同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5%。附加说明：
本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人张燕婉、焦烨。国家技术监督局1990-11-15批准1991-10-01实施
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