【商检行业标准(SN)】 菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2343—2009

菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法

Quarantine identification of bean pod mottle virus

2009-07-07 发布 2010-01-16 实施

中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布

前 言

本标准的附录B、附录C、附录D为规范性附录，附录A为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：廖富荣、陈青、沈建国、郑耘、林石明、陈红运、郭琼霞、黄逢英、王宏毅、吴媛、游源浅、虞赟。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了菜豆荚斑驳病毒检疫鉴定的程序和方法。

本标准适用于可能携带菜豆荚斑驳病毒的大豆、菜豆等种子，苗木等植物繁殖材料的检疫鉴定，也适用于介体昆虫中该病毒的检疫鉴定。

2 原理

2.1 分类地位

菜豆荚斑驳病毒（Bean pod mottle virus）属于豇豆花叶病毒科（Comoviridae）、豇豆花叶病毒属（Comovirus）的成员。可以分为亚组Ⅰ和亚组Ⅱ两个亚组。相关资料参见附录A。

英文缩写：BPMV

2.2 血清学特性

BPMV具有很强的免疫原性，制备的多克隆抗体可以检测大豆叶片、种子、草本寄主植物和介体昆虫中的病毒。

2.3 分子生物学特性

BPMV是一种正链RNA病毒，其基因组由两条正链RNA-1（约3.6 kb）和RNA-2（约6.0 kb）组成，分别包裹在两个直径为28 nm的等轴多面体粒体中。RNA-1编码5个复制所需的蛋白，RNA-2编码一个推导的细胞间运动蛋白和两个外壳蛋白。根据其基因组序列可以设计用于分子检测的特异性引物和探针，用来该病毒的特异性检测。

BPMV所在的豇豆花叶病毒属的种划分标准是：

1. 大外壳蛋白（Coat protein, CP）的氨基酸序列同源性小于75%；
2. 聚合蛋白酶的氨基酸序列同源性小于75%；
3. 在可能的成分间没有假重组；
4. 抗原反应有差异。

3 主要仪器设备与试剂

3.1 主要仪器设备和用具

• ——微量研磨仪；
• ——酶标仪；
• ——洗板机；
• ——微量天平（感量：0.001 g）；
• ——PCR仪；
• ——电泳仪；
• ——水平电泳槽；
• ——凝胶成像仪；
• ——高速冷冻台式离心机；
• ——水浴槽；
• ——pH计；
• ——各种量程的可调移液器（1 000 μL、200 μL、20 μL、2 μL）；