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中华人民共和国进出口商品检验行业标准
SN 0206—93
出口活鳗鱼中噁喹酸残留量检验方法
Method for determination of oxolinic acid residues in live eel for export
1993-06-04发布 1993-08-01实施
中华人民共和国国家进出口商品检验局 发 布
中华人民共和国进出口商品检验行业标准
出口活鳗鱼中噁唑酸残留量检验方法
SN 0266-93Method for determination of oxolinic acid residues in live eel for export
1 主题内容与适用范围
本标准规定了出口活鳗鱼中噁唑酸残留量检验的抽样、制样和液相色谱测定方法。
本标准适用于出口活鳗鱼中噁唑酸残留量的检验。
2 抽样与制样
2.1 检验批和抽样数量
按出口活鳗鱼同一养殖池塘、同一规格鳗鱼为一检验批。随机抽取活鳗鱼0.5 kg作为实验室样品，标明标记并及时送实验室。
2.2 试样制备
送实验室待测活鳗鱼，将其窒息后，开膛，去除内脏，用捣肉机捣碎成浆状，然后按四分法分样，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。
2.3 试样的保存
将试样于-18℃冷冻保存。
注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
3 测定方法
3.1 方法提要
样品经捣碎后，用二氯甲烷提取，除去溶剂后，残渣用稀盐酸溶液和正己烷处理以去除脂肪，然后用二氯甲烷萃取。在减压下除去提取液中有机试剂，然后在重氮甲烷-乙醚溶液中甲基化，吹干，残留物溶于甲醇水溶液中，用液相色谱仪进行测定。
3.2 试剂和材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，能蒸馏者须经重蒸馏，水指蒸馏水或相适应的去离子水。
- 3·2·1 乙醚。
- 3·2·2 二氯甲烷。
- 3·2·3 正己烷。
- 3·2·4 甲醇。
- 3·2·5 无水硫酸钠。
- 3·2·6 盐酸溶液：1 mol/L。
- 3·2·7 海砂；分析用。
- 3·2·8 重氮甲烷溶液配制：
将装有氢氧化钾水溶液（浓度：0.6 g/mL）10 mL、乙醇 35 mL及乙醚 10 mL的混合液的双口蒸馏瓶，置于有磁力搅拌器加热板上的水浴中，水温70 ℃。将搅拌子放入瓶中，接上滴液漏斗和高效冷凝器。
SN 0206—93
冷凝器后串连两个125 mL的烧瓶。在二个烧瓶中各放10 mL乙醚，出口管均应插到乙醚液面以下。在冰水浴中冷却这两个接收瓶。边用磁力搅拌器搅拌，边通过滴液漏斗滴加盛有21.5 g N-甲基-N-亚硝基-p-甲苯磺酰胺溶解于140 mL乙醚的溶液。滴完全部溶液的时间控制在20 min以上。当蒸馏液近于无色时，停止蒸馏，将两个接收瓶中的液体合并，在70℃水浴上再蒸馏，其蒸馏馏份为重氮甲烷溶液，此溶液应密闭置于冰箱中保存，保存期为一个月。
3.2.9 呫嗪酸标准品：纯度＞99%。
3.2.10 呫嗪酸标准溶液：准确称取10.0 mg呫嗪酸标准品溶于丙酮中，并在100 mL容量瓶中稀释至刻度。准确吸取该溶液10 mL，用丙酮配成1.0 μg/mL的呫嗪酸标准工作液。
3.3 仪器和设备
3.3.1 玻璃抽滤器。
3.3.2 砂芯漏斗：2号或3号。
3.3.3 均质器或研钵。
3.3.4 旋转蒸发器。
3.3.5 液相色谱仪并配备紫外检测器。
3.3.6 微量注射剂：10 μL或50μL。
3.4 测定步骤
3.4.1 提取和净化
称取经捣碎成浆的试样约5.0 g(精确至0.1 g)于研钵中，加入少量无水硫酸钠及海砂，经仔细研磨后用60 mL二氯甲烷分数次研磨并将试样溶液通过砂芯漏斗过滤。收集滤液于鸡心瓶中，置旋转蒸发器上浓缩，然后用氮气流吹至干。在残留物中加入30 mL 1 mol/L盐酸溶液，摇匀后，分二次，每次加入20 mL正己烷，振摇5 min，分层后弃除正己烷层。下层酸性溶液，每次用30 mL二氯甲烷萃取二次。萃取液通过无水硫酸钠柱脱水，二氯甲烷萃取液经旋转蒸发器浓缩后，继用氮气流吹至溶剂完全蒸发除去为止。
3.4.2 甲基化
残渣用1 mL甲醇水(7+3)溶解。加入3 mL重氮甲烷溶液，轻轻摇混后，在室温下反应1 h。反应完毕后在减压下蒸干溶液，再用1.0 mL甲醇水(7+3)溶解残渣。此溶液供液相色谱仪测定。
3.4.3 测定
3.4.3.1 色谱条件
- a. 色谱柱：内径4.6 mm、长25 cm不锈钢柱；
- b. 固定相：YWG-G18，粒度5 μm；
- c. 流动相：甲醇:水=7+3(V/V)；
- d. 检测器波长：234 nm；
- e. 温度：室温。
3.4.3.2 色谱测定
分别将等体积标准工作液、样液注入液相色谱仪，测量其峰面积(或峰高)。
3.4.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
3.5 结果计算和表述
按下式计算试样中呫嗪酸的含量：
X = A样 · csAs · m
式中：X——试样中呫嗪酸含量，mg/kg；
A样——样液中呫嗪酸色谱峰面积(或峰高)，mm2(或mm)；
