【商检行业标准(SN)】 柑桔溃疡病菌检疫鉴定方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 2622—2010

柑桔溃疡病菌检疫鉴定方法

Detection and identification of Xanthomonas axonopodis pv. citri

2010-05-27 发布 2010-12-01 实施

前 言

本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国四川出入境检验检疫局、四川省植物检疫站。

本标准主要起草人：何万兴、向勇、何天江、宁红、燕京安、何羽。

柑桔溃疡病菌检疫鉴定方法

1 范围

本标准规定了进出境植物检疫中柑桔溃疡病菌的检疫鉴定方法。

本标准适用于进出境芸香科植物及其产品感染柑桔溃疡病菌的鉴定。

2 原理

柑桔溃疡病菌，Xanthomonas axonopodis pv. citri (Hasse) Vauterin et al.1995,异名 X. campestris pv. citri (Hasse) Dye 1978,属原核生物总界 Procaryotae，细菌界 Bacterium，薄壁菌门 Gracilicutes，黄单胞杆菌科 Xanthomonadaceae，黄单胞菌属 Xanthomonas，是为害芸香科植物叶片、枝条、果实的重要病原菌。其为害引起的典型症状及病原菌形态特征等信息参见附录A。该病原菌的为害症状、形态特征、致病性反应、免疫学特性、PCR 特异性反应是制定本标准的依据。

3 试剂

除非另有说明，在本标准中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

3.1 分离用试剂

次氯酸钠（NaClO）、氯化钠（NaCl）、蛋白胨、蔗糖、磷酸氢二钾（K₂HPO₄）、硫酸镁（MgSO₄·7H₂O）、琼脂、盐酸（HCl）、95%乙醇等。培养基配方详见附录B。

3.2 PCR、ELISA 检测所用试剂

PCR 检测试剂及配制见附录C，ELISA 试剂及配制见附录D。

4 仪器及用具

超净工作台、天平、高压灭菌锅、培养箱、摇床、生物显微镜、高速台式离心机、PCR扩增仪、水平电泳仪、凝胶成像系统、PCR反应管、离心管、酶标板、微量移液器、移液器、剪刀、接种针、镊子、培养皿、三角瓶、试管、酒精灯、吸管、自封式塑料袋等。

5 实验室检验

5.1 症状观察

观察待检样品是否有柑桔溃疡病菌为害的症状，柑桔溃疡病典型症状参见附录A第 A.5章。对有柑桔溃疡病典型症状样品可任选分离鉴定、PCR或间接 ELISA三者之一进行检测，对无柑桔溃疡病典型症状或可疑柑桔溃疡病典型症状的样品选用 PCR 或间接 ELISA 进行检测。

5.2 柑桔溃疡病菌的分离鉴定

5.2.1 分离培养

将待检样品用3%~5%的次氯酸钠（NaClO）表面消毒处理 5 min ~ 15 min，然后无菌水冲洗三次。