【商业标准】 孢子发芽率测定法

中华人民共和国行业标准

GB/T 10316-1989
代替 ZB X 66029—87

孢子发芽率测定法

Determination of the rate of conidia germination

本方法适用于酿造酱油时在制品菌种孢子发芽率的测定。

1 仪器及试剂

1. 凹玻片、盖玻片、显微镜；
2. 恒温箱；
3. 生理盐水、无菌水、察氏培养基；
4. 接种环、酒精灯等。

2 操作

2.1  制备悬浮液：取种曲少许入盛有 $25\text{mL}$ 事先灭菌的生理盐水和玻璃珠的锥形瓶中，充分摇动约 $15\text{min}$，务使孢子个个分散，制成孢子悬浮液。

2.2  制作标本：先在凹玻片的凹槽内滴入无菌水4滴，再将察氏培养基融化并冷却至 $45 \sim 50^\circ\text{C}$ 后，接入孢子悬浮液数滴。充分混匀后，用玻璃棒以薄层涂布在载玻片上，然后反盖于凹玻片的窝上，四周涂凡士林封闭，放置于 $30 \sim 32^\circ\text{C}$ 恒温箱内培养 $3 \sim 5\text{h}$。

2.3  镜检：取出标本在显微镜下观察孢子发芽情况。逐个数出发芽孢子和未发芽孢子数。

3 计算

式中：$a$ —— 发芽孢子数，个；
$A$ —— 发芽及未发芽孢子总数，个。

4 注意事项

4.1  为了正确起见，要同时制作两张以上标本片镜检，取其平均值。

4.2  悬浮液制备后要立刻制作标本培养，时间不宜放长。

4.3  培养基中接入悬浮液的数量，应根据视野内孢子数多少来决定，一般以每视野内有 $10 \sim 20$ 个孢子为宜。

国家国内贸易局1989-04-15批准 1989-04-15实施

4.4 每次镜检，要在不同视野中连续观察100~300个孢子的发芽情况。

4.5 由于发芽快慢与温度有密切关系，所以培养温度要严格控制。为了加速发芽，可提高培养温度至35℃左右，但必须与30~32℃法进行对照。

4.6 菌种不同，驯化强度不同，测定用培养基配方允许稍有不同，例如3.9.51菌株可在察氏培养基中加几滴豆饼浸出液。

4.7 察氏培养基配方如下：

将上述药品按顺序溶解后，加入琼脂加热溶化。分装15×150mm试管中，加压灭菌后备用。

附加说明：

本标准由 国家国内贸易局提出。

本标准由上海市酿造科学研究所起草。

本标准主要起草人须凤高。