【商业标准】 孢子数测定法

中华人民共和国行业标准

SB/T 1035-1999
代替ZB X 66028—87

孢子数测定法
Enumeration of spore

本方法适用干酿造酱油半成品——菌种的孢子数测定。

1 仪器与试剂

• a. 显微镜、血球计数板、盖片；
• b. 95%酒精，稀硫酸 (1:10)；
• c. 天平：感量 0.001g。

2 操作方法

2.1 样品稀释：准确称取曲或级菌种 1g（标准至 0.002g），倒入盛有玻璃珠的 250mL 锥形瓶内，加 95%酒精 5mL、加无菌水 20mL、加稀硫酸 10mL，充分振摇，使分子孢子个个分散。然后用多层纱布过滤、冲洗，务使滤渣不含孢子，稀释至 500mL。

2.2 载片：取稀释液 1 滴，滴于血球计数板的计算格上，然后将盖片轻轻由一边向另一边压下，使盖片与计数板完全密合，液中无气泡，用滤纸吸干多余的溢出悬浮孢子液。静置数分钟，待孢子沉降。

2.3 观察计数：用低倍镜头或高倍镜头观察。由于稀释液中的孢子，在血球计数板上处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而计时时必须浮游移动微细螺旋，才能不使遗漏。孢子常位于大格的划线上，应一律取二边计数，而弃另二边，以减少误差。

使用 16×25 的计数板时，只计板上四个角上的 4 个大格（即 100 个小格）。如果使用 25×16 的计数板，除计四个角的 4 个大格外，还需要计中央一大格的数目（再 80 个小格）。每个样板重复观察数不少于 2 次，然后取其平均值，即为该样品种曲的孢子数。

3 计算

3.1  16×25 的计数板

孢子数（个/克） = ⁿ/₁₀₀ × 400 × 10000 × V/G
= 4×10⁵ × nV/G …………………(1)

式中：n——100 小格内孢子总数，个；

V——分子稀释液体积，mL；

G——样品重量，g。

3.2 25×16的计数板

孢子数（个/克） = ¼ × 400 × 10000 × V/G
= 5 × 10⁴ × nV/G .................................................. (2)

式中：n——80小格内孢子总数，个；

v——孢子稀释液体积，mL；

G——样品重量，g。

4 注意事项

4.1 称样要尽量防止孢子的飞扬。

4.2 测定时，如果发现有许多孢子结集成团或成堆，说明样品稀释未能符合操作要求，因此必须重新称量、振摇、稀释。

4.3 生产实践中应用时，种曲以干物原计算。因而需要同时测定种曲水分。计算时样品重量则改为绝干重量。

式中：G——样品重量，g；

  W——样品水分的百分比含量，%。

附加说明：

本标准由国家国内贸易局提出。

本标准由上海市酿造科学研究所起草。

本标准主要起草人须凤高。