【商检行业标准(SN)】 非洲猪瘟病毒红血球吸附试验操作规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T 1559.3—2005

非洲猪瘟病毒红血球吸附试验操作规程

Protocol of haemadsorption test for African swine fever virus

2005-02-17 发布2005-07-01 实施

中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局   发布

前  言

本标准参照了国际动物卫生组织(OIE)公布的《诊断试验和疫苗标准手册》(2004年版)中关于非洲猪瘟诊断的红血球吸附试验方法。

本标准的附录A为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局负责起草。

本标准的主要起草人：游洪、许如芬、刘中勇、王彭军。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

非洲猪瘟病毒红血球吸附试验操作规程

1 范围

本标准规定了红血球吸附试验检测非洲猪瘟病毒的方法。

本标准适用于检测组织或外周血中的非洲猪瘟病毒。

2 仪器设备

• 2.1 组织研磨器或捣碎器。
• 2.2 离心机。
• 2.3 二氧化碳培养箱。
• 2.4 恒温培养箱或水浴箱。
• 2.5 显微镜、倒置显微镜。
• 2.6 leighton管（150 mm × 16 mm）。

3 试验材料

• 3.1 0.9%氯化钠：配制方法参见附录A。
• 3.2 0.01 mol/L, pH7.4 PBS（磷酸盐缓冲液）：配制方法参见附录A。
• 3.3 青霉素、链霉素、庆大霉素和制霉菌素。使用前首先用上述PBS分别配成 10 000 IU/mL、10 mg/mL、500 IU/mL 和 500 IU/mL的溶液。
• 3.4 肝素：使用医用0.9%氯化钠配成 1 000 IU/mL。
• 3.5 细胞基础培养液（如MEM等）：配制方法参见附录A。
• 3.6 1%猪红血球：配制方法参见附录A。
• 3.7 非洲猪瘟标准毒株。
• 3.8 被检材料：包括肝素抗凝血和脾脏、扁桃体、肾脏、淋巴结等组织。被检材料应置于尽可能低的低温，但不冻结的容器内保存、运送。

4 操作方法

4.1 原代白细胞血球吸附试验

4.1.1 制备组织悬液

用组织研磨器或捣碎器将被检组织研碎，加入0.01 mol/L, pH7.4 PBS和抗菌素，配制成20%的组织悬液（每毫升组织悬液的抗菌素含量为：青霉素 1 000 IU，链霉素 1 mg，庆大霉素 50 IU，制霉菌素 50 IU），备用。

4.1.2 制备白细胞

采取健康猪血，用抗凝管采红或用肝素抗凝（每毫升猪血加肝素 100 IU），700 g离心30 min，吸取血清或血浆备用。另外吸取白细胞，并用细胞基础培养液洗涤3次，备用。

4.1.3 配制细胞培养液

将上述血清或血浆加入细胞基础培养液内配制成细胞培养液，血清或血浆的终浓度为10%～35%，同时加入抗菌素。

4.1.4 培养白细胞

将白细胞悬浮于细胞培养液中，使细胞含量为 10⁷/mL，分装于 150 mm × 16 mm的leighton管中。