【团体标准】 绵羊皮肤组织切片及染色技术操作规程

ICS 67.120.20 B 40 团 体标准 T/SHZSAQS 013—2020 绵羊皮肤组织切片及染色技术操作规程 2020-12-26发布 石河子市质量标准化协会 2020-12-31实施 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准附录A为资料性附录。 本标准起草单位：新疆农垦科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：甘尚权、徐梦思、石国庆、代蓉、万鹏程。 1 范围 本规程规定了石蜡切片法观察绵羊皮肤组织的术语和定义、试剂配制、样品处理、切片制作、苏木素一伊红（HE）染色、镜下观察等。本规程适用于绵羊皮肤组织切片的制作及观察。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 DB32/T 1824 禽肉肌纤维特性的测定 石蜡切片法 3 术语和定义 以下术语和定义适用于本文件。 3.1 毛囊 (hair follicle) 包围在毛发根部的口袋形囊状组织。内层是上皮组织性毛囊，外层是结缔组织性毛囊，内层与表皮相连，外层与真皮相连。毛囊包括连接组织鞘，内根鞘，外根鞘，毛球和毛干几个部分。大部分哺乳动物毛囊分为初级毛囊和次级毛囊。 3.2 初级毛囊 (primary hair follicle) 发生较早，毛球大，毛囊较长、较粗，有两个发达的皮脂腺，毛干一般有髓质。 3.3 次级毛囊 (secondary hair follicle) 发生较晚，毛球小，毛囊短而细，无或仅有一个不发达的皮脂腺，毛干没有髓质。 4 试剂配制 4.1 10%福尔马林 取1体积的37%甲醛与9体积的水混匀配成10%福尔马林，用于固定组织样品。 4.2 75%酒精 取7.5体积的无水乙醇与2.5体积的水混匀配成75%酒精。 4.3 85%酒精 取8.5体积的无水乙醇与1.5体积的水混匀配成85%酒精。 4.4 95%酒精 取9.5体积的无水乙醇与0.5体积的水混匀配成95%酒精。 4.5 1%盐酸分化液 取99体积的无水乙醇与1体积的盐酸混匀配成1%盐酸分化液。 5 样品处理 5.1 取材与固定 绵羊屠宰后，取0.8cm×0.8cm×0.4cm腹部皮肤组织，用20倍体积的10%福尔马林固定24h，再用20倍体积的10%福尔马林重复固定24h。切取皮肤组织时动作要轻，勿用力牵拉，以免组织内部结构发生变化。 5.2 洗涤 固定后的皮肤组织在进行逐级脱水之前需用流水冲洗24h。 5.3 梯度脱水 组织脱水的目的是将组织内的水分用酒精置换出来，使组织逐渐变硬，便于后期二甲苯透明及石蜡浸蜡。脱水过程需逐级增加。具体步骤如下： 75%酒精过夜 → 85%酒精1h → 95%酒精1h → 100%酒精1h。 5.4 透明 组织透明的目的是将组织内的无水酒精用透明剂置换出来。一般常用的透明剂有二甲苯、甲苯等，都是能分别与石蜡和酒精相溶的有机溶剂。透明时要特别注意观察，组织周边透明即可。 5.5 浸蜡 （注：原文此处内容截断，仅保留标题） 5.6 包埋和修块 （注：原文此处内容缺失，仅保留标题结构） 6 切片制作 6.1 切片 （注：原文此处内容缺失，仅保留标题结构） 6.2 展片、贴片及烤片 （注：原文此处内容缺失，仅保留标题结构） 7 脱蜡、苏木素一伊红（HE）染色及封片 （注：原文此处内容缺失，仅保留标题结构） 8 镜下观察 （注：原文此处内容缺失，仅保留标题结构） 附录A（资料性附录） 绵羊皮肤组织横切、纵切图