【团体标准】 兽医检测用核酸标准物质研制技术规范

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 3-2018 兽医检测用核酸标准物质研制技术规范 Technical specifications for Producing Nuclear Acid Reference Materials for Veterinary Detection 2018-10-24发布 2018-10-24实施 中国兽医协会 发布 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国兽医协会提出并归口。 本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心。 本标准主要起草人：王传彬、杨林、原霖、宋晓晖、辛盛鹏、董浩、刘玉良、顾小雪、刘洋、韩焘、陈亚娜。 1 范围 本标准规定了兽医检测用核酸标准物质的制备、均匀性及稳定性评估、不确定度评定、定值及结果表示、标签和使用说明书、包装、贮存和运输、生物安全。 本标准适用于利用细菌、病毒等微生物或其核酸制备兽医检测用核酸标准物质。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 JJF 1005-2016 标准物质通用术语和定义 JJF 1343-2012 标准物质定值的通用原则及统计学原理 3 术语和定义 JJF 1005-2016界定的下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了JJF 1005-2016中的某些术语和定义。 3.1 标准物质（又称标准样品） reference material 具有足够均和稳定的特定特性的物质，其特性适用于测量或标称特性检查中的预期用途。[JJF 1005-2016，第3.1条] 3.2 有证标准物质 certified reference material 附有由权威机构发布的文件，提供使用有效程序获得的具有不确定度和溯源性的一个或多个特性值的标准物质。[JJF 1005-2016，第3.2条] 3.3 特性值 property value 与标准物质的物理、化学或生物特性有关的值。[JJF 1005-2016，第4.1条] 3.4 定值 characterization 作为研制（生产）程序的一部分，确定标准物质特性值的过程。[JJF 1005-2016，第3.12条] 3.5 均匀性 homogeneity 标准物质中特定部分的某个规定特性值的一致性。[JJF 1005-2016，第3.14条] 3.6 稳定性 stability 在特定的时间范围和存条件下，标准物质的特性值保持在规定范围内的能力。[JJF 1005-2016，第3.17条] 3.7 不确定度 uncertainty 根据所用到的信息，表征赋予被测量量值分散性的非负参数。[JJF 1005-2016，第4.15条] 4 兽医检测用核酸标准物质制备 4.1 候选物选择 4.1.1 兽医检测用核酸标准物质的原料应选择具有代表性的病毒、细菌或其他微生物，或含有其全部核酸或特定核酸片段的质粒。所有原料应获得全部核苷酸序列。 4.1.2 制备标准物质的候选物不应含有干扰性杂质，应有足够的稳定性和高度的特异性，并有足够的数量。特性值范围应适合该标准物质的用途。 4.2 标准物质原料制备 4.2.1 兽医检测用核酸标准物质应根据候选物的性质，选择合理的制备程序和工艺，并防止污染及待定特性量的量值变化。需加保护剂等物质的，该类物质应对标准物质的活性、稳定性和试验操作过程无影响。 4.2.2 兽医检测用核酸标准物质的分装精确度应在±1.0%以内。需要干燥保存的应在分装后立即进行冻干和密封。冻干水分含量应不高于3.0%。 4.2.3 分装、冻干和密封过程中，应保持各瓶间含量的一致性和稳定性。 5 均匀性评估 5.1 抽取单元数 按照JJF 1343-2012中4.3.1的规定，若记总体单元数为N： - 当N<200时，抽取单元数不少于11个； - 当2001000时，抽取样品数不少于30个。 对于均匀性好的样品： - 当N<500时，抽取单元数不少于10个； - 当N>500时，抽取单元数不少于15个。 一般情况下，每个抽取单元应独立取样，重复测量次数不少于两次。 5.2 抽样方式 按照JJF 1343-2012中4.3.2的规定，抽样方法可以是随机抽样或分层随机抽样。 5.3 检测方法 采用实时荧光定量PCR或数字PCR的方法进行均匀性评估。使用的方法不低于定值方法的精密度和灵敏度。 5.4 最小取样量 将均匀性评估的取样量作为最小取样量。 5.5 均匀性评估的结果评价 按照JJF 1343-2012中4.3.5～4.3.7的规定，对标准物质的m个包装单元重复检测n次，采用方差分析方法对标准物质进行均匀性评估。按式（1）和（2）计算组间差方和与组内差方和： S_b = Σ_{i=1}^{m} n_i (\bar{x}_{i.} - \bar{x}_{..})^2 (1) 式中： S_b — 组间差方和； n_i — 第i个单元重复测定的次数； \bar{x}_{i.} — 第i个单元的测定平均值； \bar{x}_{..} — 所有测定值的总平均值。