【SN商检标准】 天竺葵锈病菌检疫鉴定方法

SN/T3429—2012 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 天竺葵锈病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Puccinia pelargoni-zonalis Doidge 2012-12-12发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 2013-07-01实施 前言 本标准按照GB/T1.1—2009起草，由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。起草单位包括中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局。主要起草人包括张建成、张慧丽、李生贵、郑炜、杜宇、陈先锋。 1 范围 本标准规定了天竺葵锈病菌（Puccinia pelargoni-zonalis Doidge）的检疫鉴定方法，以形态特征、地理分布、寄主范围为依据，明确了症状观察、显微镜检、保湿培养和病原物保存方法。本标准适用于天竺葵锈病菌相关寄主（参见附录A）的苗木、插枝等植物材料检验鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少。凡注日期的引用文件，仅适用注日期版本；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。SN/T1157 进出境植物苗木检疫规程。 3 原理 3.1 分类地位 学名：Puccinia pelargoni-zonalis Doidge 1926。 中文名：天竺葵锈病菌。 别名：马蹄纹天竺葵柄锈菌。 天竺葵锈病菌属真菌界（Fungi），担子菌门（Basidiomycota），担子菌纲（Basidiomycetes），锈菌目（Uredinales），柄锈菌科（Pucciniaceae）。地理分布和寄主参见附录A。 3.2 检疫鉴定依据 以病菌在寄主上的症状特征、病菌形态学特征作为检疫鉴定依据。 4 仪器设备 体视显微镜、生物显微镜、高压灭菌器、人工气候箱、手持放大镜、解剖针、载玻片、盖玻片。 5 试剂 乳酚油或80%（体积分数）乳酸。 6 抽样 口岸查验进境天竺葵属植物时，按照SN/T1157对苗木进行抽样与取样。 7 检疫方法 7.1 现场检疫 在光线充足条件下，肉眼或借助放大镜仔细检查叶片和叶柄是否有红褐色粉状脓疱，叶片正面有无黄色圆斑，将可疑样品挑出送实验室检疫，并标注品名、数量、生产国、取样地点、取样人和取样日期等信息。 7.2 实验室检疫 7.2.1 保湿培养 如样品植株仅有可疑病状，则置于人工气候箱中，于16℃～21℃，相对湿度≥75%，每天光照16小时培养，11～14天后观察叶片上病原菌孢子形成，并进行显微镜检。 7.2.2 显微镜检 挑取夏孢子堆或冬孢子堆上的孢子，置于乳酚油或80%乳酸浮载剂中制成玻片，在生物显微镜下观察记录孢子形态并测量大小。 8 鉴定方法 8.1 症状鉴定 白色小斑点（约0.5mm）最初出现在叶片下表面，48小时内上表面出现对应黄色斑点，斑点直径可达6～8mm。夏孢子堆通常形成于叶片下表面，两面可见红褐色斑，初期为粉状脓疱聚集，中后期病菌在白色斑点外围形成同心环状次生孢子堆群，后期斑点连合，中心坏死，叶片菱黄、干燥，最终脱落。托叶、叶柄和茎也可受害，表现为组织轻微隆起并产生子实体，坏死斑点可扩展至茎部。 8.2 形态鉴定 8.2.1 子器 性孢子器、锈孢子器未见。 8.2.2 夏孢子 夏孢子堆生于叶下面，散生或聚生，圆形，裸露，直径0.2～1.0mm，肉桂褐色，粉状；孢子球形或椭球形，23～32μm × 18～22μm，壁厚1.5～2μm，80%乳酸中可见外壁细密小刺，芽孔2个，腰生。 8.2.3 冬孢子 冬孢子堆偶见，通常围绕夏孢子堆形成小光泽棕褐色非粉状脓疱，聚生在叶上或独生在茎上。冬孢子堆生于叶下面，散生或聚生，深色、突起、圆形、垫状，直径0.5～1.5mm，常连合。冬孢子长椭圆形、长倒卵形或近棍棒形，38～55μm × 18～25μm，顶端圆钝或稍尖，基部圆形或略狭；隔膜缩，壁1.0～1.5μm厚，顶壁2～5μm厚，光滑栗棕色，每个细胞有单孔，上细胞芽孔顶生，下细胞芽孔近隔膜。柄褐色或近无色，不脱落或易折断，长达50μm。