【地方标准】 食品中过敏原卵蛋白的测定 酶联免疫法

ICS 67.100
方标准
河北省地
DB13/T1109—-2009
食品中过敏原卵蛋白的测定
酶联免疫法
Determination of egg protein in foodsEnzyme-linked immunosorbent assay method2009-05-27发布
河北省质量技术监督局
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2009-06-11实施
本标推出河北省质景技术监督局提出。前言
DB13/T1109—2009
本标准起草单位：河北医科大学基础医学院、河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院。
本标准丰要起草人：吕品、张岩、李挥、周正、李丛芬、刘东、玉丽霞、刘辰魁、范斌、康素芬。http：//foodm
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酶联免疫法
食品中过敏原卵蛋自的测定
本标准规定了食品中过敏原卵蛋白的酵联免疫测定方法。本标准适用丁面制品利冷冻饮品中过敏原卵蛋白的测定。本部分的方法检出限：0.6mg/kg2规范性引用文件
DB13/T 11092009
下死文件中的条款通过本标准的引而成为本标准的条款。凡是注日期的引川文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标推达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用义件：其最新版本适用本标推。GB门6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样品中的卵蛋白与试剂盒中微孔条.上预包被的偶联抗原竞争抗卵蛋白的抗体，加入酶标抗体后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含卵蛋白的含量成负相关，与标雅曲线比较即可得出样品中刚蛋白的含最。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中均为分析纯试剂和GBT6682中规定的一级水。4.1的蛋白检测试剂盒
4.1.48孔板：6条×8孔（涂布有抗蛋清蛋百的抗体）。4.1.2全蛋粉标准辫液：0mg/L，0.5mg/L，1.5mg/L，4.5mg/L，13.5mg/L4. 1. 3酶标抗休。
4.1.4染色液。
4. 1. 5 终止液。
4.1.610倍浓缩洗涤液。
4.1.720倍浓缩萃取液。
4.2萃取T.作液：用水将20倍浓缩苯取液按1：19体积比进行稀释，萃取.1作液在4℃环境可保存个汀。
4.3洗涤T.作液：用水将10倍浓缩洗涤液按1：9体积比进行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤1.作液在4℃环境可保存个月
5仪器
5.1酶标仪：具450mm滤光片。
5.2单道移液器：20μL-~200 μL和200μL~-1 000μL。5.3漩涡混匀器。
5.4冷冻离心机。
5.5刻度吸量管
5.6均质器。
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5.7水浴锅
6分析步骤
6.1提取
DB13/T1109—2009
准确称取均质样品1.0各于50mL离心管中，加入20mL预热至60℃C的稀释萃取液，60℃水浴10min；2500r/min低温（4C）离心10min；过滤上清液：取100μuL用于分析。6. 2测定
6.2.1分别吸取取100uL标准工.作溶液或样品溶液到对应的微孔中，轻轻振荡混勾，用盖板膜盖板后室温反应 10 min。
6.2.2小心揭开盖板膜，将孔内液休甩T，川洗涤工作液（250L/孔），充分洗涤4~5次，每次间隔105：用吸水纸拍干（拍十后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。6.2.3每孔加入酶标二抗100 μL，轻轻振荡混勺，用盖板膜盖板后室温反应10 min，取出垂复洗板步骤 6. 2, 2。
6.2.4每个孔中加入染色液100 μL，盖板膜盖板后室温反应10 min。6.2.5每孔入终止液100uL，轻轻振荡混勾，设定酶标仪于450nm处，测定每孔吸光度值。6.3空自试验
除不称取试样外，均按工述步骤进行。6.4监控试验
每次测定均应做个添加蛋清蛋白标准的显色剂样品。」结果计算
以吸光度值为纵坐标，蛋蛋白标准！作游液浓度为横坐标，绘制半对数标雅！作曲线。从标准1竹曲线上得到试样中相应的蛋清蛋白浓度后，结果按公式（1)计算：X=c×V×1000
mx1000
武中：
X-—试样中蛋清蛋白残留量，单位为微克每「克（rgkg）；心——从标准工作仙线上得到的试样中岱清强白浓度，单位为微克每Ⅱ（mg/1.)；V一—样品溶液的体积，单位为旁升（ml.)）m一样品溶液所含的试样质量，学位为克（g)。绍果表示到小数点后两位
注：计算果应除空凹值
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