【地方标准】 食品中总抗生素残留的快速测定 微生物抑制法

ICS 67. 100
河北省地
方标准
DB13/T1113—2009
食品中总抗生素残留的快速测定微生物抑制法
Examination of Residue of antibiotics in food- -MlA method2009-05-27发布
河北省质量技术监督局
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2009-06-11 实施
本标雅由河北省质量技术监督局提山并归口。DB13/T1113—2009
本标准起草单位：河北省食品安全重点实验空、河北医科大学基础医学院、河北师范人学生命科学学院。
本标滩主要起草人：吕品、周巍，张岩、周正、李摇、穆燕魁、刘敬泽、杨小龙、赵宝华。1
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1范围
食品中抗生素残留的检测方法，本标推规定了食品中抗牛素残留的检验方法。DB13/T 1113-2009
本标准第一法适用于肉、蛋利饲料巾总抗生素残留的检测；本标准第二法适用丁乳和乳制品中总抗生素残留的检测。
2规范性引用女件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标推的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用丁本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789,27食品卫生微生物学检验鲜乳中抗生素残留检验。第一法肉、饲料和蛋中抗生素残留的检测方法3原理
抗生素残留检验试剂盒的原理是基于抑制微生物生长。试剂盒是以96孔板的形式米设计，每个小孔里面都含有均匀扩散了芽孢杆菌孢子的琼脂培养基，同时还含有氧化还原指示剂。当试剂孔在65℃培养时，孢子开始被激活，并且生长殖，细胞的生长改变了培养基里面的氧化还原潜力，使琼脂的颜色从蓝色变成橘红色（橙色）。如果样品内的抗生素浓度超过了试剂盒的检测限，则孢子就不会被激活细菌就不会生长繁殖，琼脂的颤色不会改变4试剂
4.1检测板。
4.2抗生素残留检测试剂盒。
4.3粘胶纸
4.4PBST：45gNaCl：80mL的磷酸氢二钾溶液（0.5M），16.7mL的麟酸二氢钾液（0.5M），5mL吐温20，调节PH到7.4。
5仪器
5.1恒温培养箱：65℃±1℃。
5.2天平：感量0.1g。
5.3无菌吸头。
5.4无菌试管。
5.5无菌锥形瓶。
5.6离心机。
5.7均质器。
5.8磁力搅拌器。
全品秋伴欧
5.9酶标仪。
6操作步骤
6.1样品的前处理
6.1.1鲜肉样品
DB13/门1113—2009
取3g土0.5g没有脂肪或者其他组织的一片瘦肉样品，剪成小碎片；把瘦肉样品放入坡璃杯或者直径1.5cm的耐热塑料管中，密封：在100℃的水浴中加热3min土0.5min：把试管浸在冷水中降温：用镊子来压榨尽可能多的肉汁，丢掉肉，留下肉汁：把肉汁在2000r/min下离心3min，取上清液待测。
6. 1. 2肝脏
切取5g土0.5g肾带皮和髓汁在内：把样品放入玻璃杯或者直径1.5cm的耐热塑料管中，密封：在100C的水浴中加热4min土0.5min；把试管漫在冷水中降温；2000r/min下离心3min，取上清液待测。
6.1.3饲料
称取1土0.01多均匀的饲料样品，放入清洁的试管密封：加20mL的颁热后PBST（约40C）：均质混合样品液30min，使川磁力搅拌器直到样品全部游解：2000r/min下离心15min，取上清液待测。
6.1.4蛋样品
把蛋黄和蛋白都放进清洁的容器，然后拍打得到均匀的汲体，不能有块状；用蒸馏水接1：4的比例将样品稀释成均匀的液体（1mL样品+3mL水），装在玻璃杯或者是直径1.5cm的耐热塑料管中，密封：在100℃的水浴中加热样品12min土0.5min：用力搅拌样品20s～30s避免样品凝结成块状在案温冷却样品，待测。
6.2检测过程：
先用刀切开所需要捡测的小孔，从底部用力把切好的小孔顶出微孔板架。把带检测的试剂条上的铝薄纸撕去，每个小孔加100μL的样品，同时做一个阴性对照样（加100L的阴性控制样）。用粘胶纸把加好样的小孔密封好，放入65C的恒温器中培养30min，使样品充分均勾扩散开米。倒空扩散后的样品液，用蒸馏水冲洗样品孔，如果使用微最加样枪时每个孔需要加300L，如果使用冲洗瓶则充满个小孔。倒空所有的蒸馏水，并且在吸水纸上面吸去多余的水，重复冲洗3-~4后，用粘胶纸密封椅测孔：在65℃的恒温器巾培荠，直到阴控制样孔变橙色（橘黄色?，培养3h～3.5h，取出使用翻标仪分别在590nm和650nm读数。7结果判定
当阴性控制样的读数差值（AN加nm-AN品mm）在0.15~0.25之间时。样品的结果如果人丁阴性样品读数差值加0.15的和时为判断为阳性，即：阳性：AMs90nun-AM650mm≥ANst0mnl-ANescmin+0.15，（AM：样品的吸光度值：AN：阴性控制样品的吸光度值。）当于阴性控制样品的吸光度值超出0.15～0.25的范匝，检测结果通过肉眼米判读。样品管橙色为附性，蓝色为阴性。
本方法检测几种常见抗生素的最低检山限为：肯素G5g/kg，阿奠西林8g/kg，泰乐菌素80ug/kg，新霉素300μg/kg。
第二法牛奶和乳制品中抗生素残留的检测方法8原理
全品秋伴
DB13/ 1113—2009
试剂盒是一种微孔板，每个微孔中含有散播了芽孢杆菌的琼脂培养垫和pH指示剂。当在65\C下培养微孔板时，孢子发育生长，进而降低了培养基的pH值，在pH指示剂的作用下，原来的监（紫）色将会变为绿-黄色。如果牛奶中的抗生素浓度高于试剂盒的检测限，微生物的生长和酸的牛产将会受到抑制，出于没有酸牛成，颜色将不会改变。9试剂
9.1检测板。
9.2抗生素残留检测试剂盒。
9.3粘胶纸。
9.4 水。
10仪器
恒温培养箱：65 ℃±1 ℃。
10.2天平：感量0.1g。
10.3无菌吸头。
10.4无菌试管。免费标准下载网bzxz
10.5无菌锥形瓶。
样品处理
波体样品直接进样测试。固体样品便用无菌水稀释成1：10的稀释液后进样测试。12操作步骤
确定所需微孔数量，用介刀沿微孔外侧划开金属薄膜。注意不要剪开剩余的微孔板.上的金属薄膜，因为这会使微孔挥发以致下结。从塑料框上取下已剪开的做孔条。只需简单地用指尖向上压微孔条，微孔条即可分离山米。将要使用的微孔板（条）安放到空的白色塑料架上，剥开微孔上的胶粘金属膜，在每个微孔中加入50μL样品。用胶粘纸小心地密封微孔板（条），将其放入到已经预热到65℃的水浴或培养器中，培养2h～~2.5h，从微孔侧面观察结果。13结果判定
最终观察时，培养基依然保持原有的蓝紫色，可以报告为抗生素残留阳性。培养及变为黄色或黄绿色时，可以报告为抗生素残留阴性。本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素G3g/kg，阿莫四林4/kg：泰乐菌素80ug/kg，四环素100μg/kg，磺胺嘧啶100μg/kg3
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