【地方标准】 食品中军团菌的测定

ICS 67. 100
河北省地
方标准
DB13/T1115—2009
食品中军团菌的测定
Determination of Legionella bacteria in food2009-05-27发布
河北省质量技术监督局
h
2009-06-11实施
本标准参照IS011731-1998《军团菌的检测方法（英文版）》制定，本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。DB13/T1115—2009
本标准起草单位：河北省食品安全重点实验室、河北省食品质量监督检验研究院。本标准主要起草人：周丽、张岩、周巍、刘辰魁、康紫芬、刘东、穆燕魁。http：//foodm
atenet
1范围
食品中军团菌的检测方法
本标推规定了食品中军团菌的检验方法。该方法适用于饮用水中军团菌的检验。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
军团菌
Legionella
DB13/T1115—2009
杆形菌，宽度0.3~0.9um，长度为2~20um以上，不形成内孢子或小囊，无英膜，不酸，革兰长染色阴性，借一两根或以上直的或弯曲的极鞭毛和侧鞭毛可以运动，偶尔可见无动力菌株。需氧，牛长时需L-半胱氨酸和铁盐。氧化酶阴性或弱阳性，硝酸盐还原试验阴性，尿案酶阴性，液化明胶。细胞壁中有支链脂肪酸。可从有机化合物中摄取营养，可利用氨基酸作为能量来源。不发酵碳水化合物，亦不能使之氧化。可从地表水，泥土和热水及污染的湖水和河水中分离到本菌，但从士壤利动物中分离尚不了解，对人有致病性，DNA的G+Cmol%含量为39~43%（TmBd）。3试剂
3.1缓冲木炭酵母膏琼脂培养基（BCYE）。3.2无L-半胱氨酸缓冲木炭酵母膏培养基（BCYE-Cys）3.3选择性缓冲木炭酵舟培养基（GVPC）4仪器
4.1恒温培养箱：36℃±1℃。
4.2天平：感量0.1g。
4.3无菌吸头。
4.4无菌试管。
4.5无菌锥形瓶。
5操作步骤
5.1总则：如果液体样品军团菌的数量估计超过10，可以采用直接平板法。为了确保低于这个数量样品中军团菌的检测，需采用浓缩技本。为了浓缩水样，可采用膜过滤法（5.2）或离心法（5.3）。5.2，膜过滤法：如果样品是浑浊的、乳浊的或有颜色的，应采用离心法。采用膜过滤装置进行膜过滤，采用直径47～147mm，孔径0.22um和0.45um的膜。过滤后的膜应放置在带盖的无菌容器中，可用无菌剪刀剪碎，加5mL～25mL的无菌稀释液或无菌去离子水，不断摇动至少2min。也可将容器放入超声波中210min。
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DB13/T1115—2009
5.3离心法：取200ml.样品于300mL～500mL容积的离心瓶中，6000离心10min或3000g离心30min，保持温度在15℃～25℃，弃去上清液，将沉淀物悬浮在2mL～20mL无菌稀释液或无菌去离了水中。
5.4培养
5.4.1将制备好的样品（浓缩的或未浓缩的）分成3份，1份不做任何处理；1份进行热处理：1份进行酸处理。
5.4.2热处理：加lmL土0.5mL样品于一无菌容器中，50℃±1C水浴处理30min±2min。5.4.3处理：加1mL10mL样品于扩盖的器中，6000g离心10min或3000g离心30min，用无菌枪头吸去一半体积的上液，通过涡旋重新恐浮剩余物，用酸处理缓冲液补足原始体积。混合静置5 min±0. 5 min.
5.4.4选择性培养基的接种：分别接种未处理、热处理和酸处理的样品0.1mL～0.5ml于GVPC培养基上，热处理和酸处理的样品应在处理究立即接种，记录接种体积。5.4.5培养：翻转平板，36℃±1℃培养10d。5. 4. 6 检查平板
在10d的培养划间，册显镜在2d～4d内至少观察3次（军团菌生长较慢，很可能被其他菌掩盖），记录每一种菌落形态的数量。
6可疑军团菌的确证
从每个GVPC平板上至少选择3个可疑军团菌菌落接种到BCYE和BCYE-Cys两块平板上进行二次培养，36℃±1C培养至少2d。在BCYE上生长而在BCYE-Cys上不牛长的被认为是军团菌。通过血清学实验确证在BCYE上生长而在BCYE-Cys上不生长的菌落。注：血琼脂和营养琼脂可以代替BCYE-Cys培养基2
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