【地方标准】 动物源性食品中泰乐菌素的测定 酶联免疫法

ICS67.100
方标准
河北省地
DB13/T 1108—2009
动物源性食品中泰乐菌素的测定酶联免疫法
Determination of tylosin residue in animal derived foodsEnzyme-linked immunosorbent assay method2009-05-27发布
河北省质量技术蓝督局
http：
2009-06-11实施
本标推由河北省质最技术监督局提出并归口。DB13/T1108-—2009
本标推起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、河北肺范大学生命科学学院、河北医科大学基础医学院、河北省食品安全重点实验室。本标准正要起草人：张岩、吕品、李挥、李从芬、刘辰魁、王丽霞、刘敬泽、范斌、周正、康素芬周巍。
//wwwfoodmate.net
http：
1范围
动物源性食品中泰乐菌素的测定酶联免疫法
本标准规定了动物源性食品中泰乐菌素残留最的酶联免疫测定方法。本标准近用于动物纽织中泰乐菌紫残留量的测定。本部分的方法检出限：10.0ug/kg。2规范性引用文件
DB13/T1108—2009
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注口期的引用文件，其随后所有的修改单【不包括勘误的内容）或修订版均不适用丁本标准，然而，敲励根据本标准达成协议的各方研究是否使用这些文件的最新版本。凡是不注百期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理
样本中的残留物券乐菌素与试剂盒中微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗拳乐菌素的抗体，加入酶标二抗后，用TB底物显色，样本吸光度值与其所含泰乐菌素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出残留物泰乐菌紫的含鼠。
4试剂和材料
除非另有说明，在分析中均为分析纯试剂利GB汀6682中规定的一级水。4.1泰乐菌素试剂盒：
4.1.196孔板：12条×8孔（包被有偶联抗原）。4.1.2泰乐菌素标准溶液：0μg/L，1.5μgL，4.5/L，13.5/L，40.5/L，121.5/L。4. 1. 3 酶标二抗。
4. 1. 4抗体1作液。
4. 1. 5底物液A液
4.1.6底物液B液。
4. 1. 7 终止液。
4.1.820 倍浓缩洗涤液。
4.1.92倍浓缩复游液。
4.28%氯化钠溶液：取8.0g氯化钠加水溶解定穿至100ml.m4.30.1M氢氧化钠-8%氯化钠溶液：称取0.4乌氢氧化钠加8%氯化钠溶液溶解定容至100ml.c4.40.1 M盐酸溶液：量取4.15 mL.浓羧，加水定容至500 ml.a4.5乙腈-0.1M盐游液：量取84mL无水乙睛和16mL0.1M盐酸溶液混合均勾。4.6复溶工作液：水将2倍浓缩复溶液按1：月休积比进行稀释，复溶T.作液在4℃坏境可保存-一个4.7洗涤工作液：门水将20倍浓缩洗涤液按1：19体积比选行稀释，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4'℃环境可保存-个月。
4.8无水乙晴。
4. 9三甲烷。
4.10氯化钠。
品伙欧ht
4.11盐酸。
5仪器
5.1酶标仪：具450 nm滤光片。
5.2多道移液器：50~300μL。
5.3单道移液器：20 μL～~200 μL 利100 μL～1 000 μL5.4漩涡混匀器。
5.5低温离心机。
5.6微孔过滤器：2mL，并带有孔径为0.45um的水相微孔过滤膜。5.7旋转燕发仪。
5.8氮吹仪。
5.9均质器。
5.10振荡器。
5.11天平：感量0.01g。
6分析步骤
6.1提取
DB13/T1108—2009
推确称取均质样品2.0马（精确到0.0lg）,置于50mL离心管中，加入8ml.乙睛-0.1M盐酸溶液，振荡器振荡5min：3000r/min空温（20℃25℃）离心0min；移取2ml上清液，加入2mL0,1M氢氧化钠-8%氟化钠溶液，泥匀混勾1min，加入8mL三氯甲烷萃取，振荡器振荡5min：室温（20℃~25℃）3000r离心10min，取下层有机相至10mL玻璃试管中，于50℃～60℃氮吹至T：用1mL复溶T作液溶解于燥后的残留物：取50 μL用于分析。6.2测定
测定中吸取不同试剂和样品辫液时应更换吸头。6.2.1分别吸取取50uL泰乐菌累标准T作溶液和样品溶液到对应的微孔中，创孔再加入50叫抗体工作液，轻轻振荡混勾，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min。6.2.2小心揭开盖板膜，将孔内液休甩十，用洗涤：1作液（250uL/孔），充分洗涤4~-5次，每次间隔10s用吸水纸拍于（拍下后长被清除的气泡可用未使用的枪头截破）。6.2.3每孔加入酶标二抗100μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min，取出重复洗板步骤6.2.2。
6.2.4每孔加入底物液A液50μL，再加底物液B液50uL，轻轻振荡混勾，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中显色15min。
6.2.5每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，设定酶标仪丁450nm处，测定每孔吸光度值。6.3空白试验www.bzxz.net
除不称取试样外，均按上述步骤进行。6.4监控试验
每次测定均应做一个添加泰乐菌素标准的显色剂样品。7结果计算
在半对数坐标纸上，以吸光度值为纵坐标，泰乐菌素标准1作溶液浓度为横坐标，绘制标准1作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的泰乐菌素浓度后，结果按公式（1)计算：X-c×V×1000
m×1000
式中：
ht
x—试样中暴乐菌素残留显，单位为微克每于克（ugkg）一从标准工许业线上得到的试样中泰长菌素浓度，单位为微克每片（吧.）；V—样品溶液的体积，单位为惑升（mL)：—样品游液所命的试样质量，单位为克（g）。结果表示到小数点后两位。
注：计算结果应扣除空白值
确证试验
如被测样品中泰尔菌素残留量的值大F检山限时，应用EC-MS/MS进行确证。http：//foodmate.netDB13/T1108—2009
http：//foodmate.net
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。