【行业标准】 进出口食品中敌百虫残留量检测方法 液相色谱-质谱 质谱法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T0125—2010
代替SN0125—1992
进出口食品中敌百虫残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法
Determination of trichlorfon residues in meat and meat products for importandexport-LC-MS/MSmethod
2010-11-01发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2011-05-01实施
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准代替SN0125-1992《出口肉及肉制品中敌百虫残留量的检验方法》。本标准与SN0125-1992相比，主要技术变化如下：使用范围、指标包括原标准的内容：采用气相色谱质谱法：
增加阳性确证内容：
SN/T0125—2010
整合前处理条件。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：李爱军、王明泰、马旭、牟峻、卢利军、马书民、周晓。本标准所代替标准历次版本发布情况为：ZBX71002—1987、ZBX220091988.SN0125—19921范围
进出口食品中敌百虫残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法
SN/T0125—2010
本标准规定了出口农产品中敌白虫残留量的液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法。本标准适用于出口清蒸猪肉罐头、猪肉、鸡肉、牛肉、鱼肉、香肠、糙米、玉米、洋葱、核桃中敌百虫残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法方法提要
试样用环已烷+乙酸乙酯（1十1，体积比）提取，经凝胶色谱净化，用甲醇+水（1十1，体积比）定容，供液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1环已烷：高效液相色谱级。
甲醇：高效液相色谱级。
乙酸乙酯：残留级。
无水硫酸钠：650℃灼烧4h，储于密封容器中备用。4.4
环己烷+乙酸乙酯：（1+1，体积比）：量取100mL环已烷和100ml.正已烷，混匀。4.5
乙酸铵：优级纯。
50mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵溶于1000mL水中。4.7
敌百虫标准品（trichlorfon，CAS编号：52-68-6，分子式：C4H，Cl,O,P）：纯度大于等于98.0%。敌百虫标准储备溶液：准确称取适量的敌百虫标准品，用甲醇配制成浓度为100g/mL的标准储4.9
备溶液。该溶液在0℃～4℃冰箱中保存。4.10敌百虫标准工作溶液：根据需要将敌百虫标准储备溶液（3.10）用甲醇稀释成适用浓度的标准工作溶液。该溶液在0℃~4℃冰箱中保存。4.11有机微孔滤膜：0.20μm，0.45μm5仪器与设备
液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.1
SN/T0125—2010
5.2电子天平：感量：0.0001g。5.3凝胶色谱仪：配有单元泵、馏分收集器。5.4均质器。
5.5旋转蒸发器。
5.6浓缩瓶：250mL。
离心机：3000/min以上。
离心管：四氟乙烯，50ml
涡旋混匀器。
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1肉：将所取全部样品，缩分出有代衣性样器，密封，标明标记。
少于500，经捣碎机充分捣碎均勾，装人洁净容6.1.2罐头：将所取全部样品正罐倒出，缩分出有代表性样品不少于500g，经捣碎机充分捣碎均匀，装人洁净容器，密封，标明标记。6.1.3糙米、玉米、洋葱、核桃：取代表性样品约500名用粉碎机粉碎，混匀，装人洁净容器，密封，标明标记。
6.2试样保存
肉类试样于-18℃以下冷冻保存，粮谷类、坚果类及其他类试样于0℃～4℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品7测定步骤
7.1提取
称取解冻试样10g（精确
壹到污染
已烷+乙酸乙酯（4.6），均质2
min.在30001/m
成发生残留物食
高心管（
量的变化。
6g无水硫酸钠（4.5）和20mL环
离心3
min.吸品
查分别用
硫酸钠的桶形漏斗，收集于250
L浓缩瓶中，残
合并于250mL浓缩瓶中，于40℃
2mL，将
环已烷十乙酸乙酯层通过装有无水环已烷十乙酸乙酯提取两次，提取液提取液转移至试管中，并用3mL环已烷乙酸乙酯（4.6）分三次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于试管中，在室温下，氮吹浓缩近干，用环已烷-乙酸乙酯（4.6)定容10mL，过0.45μm滤膜，待凝胶色谱（GPC)净化。7.2净化
7.2.1凝胶色谱(GPC)净化
7.2.1.1凝胶色谱条件
凝胶色谱条件如下：
a）凝胶净化柱：BioBeadsSX3，700mm×25mm（内径），或相当者：b）流动相：乙酸乙酯-环已烷（1十1，体积比）；流速：4.7mL/min；
d）样品定量环：10mL；
预淋洗时间：10min；
凝胶色谱平衡时间：5min；
收集时间：21min28min。
7.2.1.2凝胶色谱净化步骤
SN/T0125—2010
将10mL待净化液（7.1)按7.2.1.1规定的条件进行净化，收集组分于室温下氮吹浓缩近干，用甲醇+水（1+1,体积比）溶解并定容至1.0mL,过0.20μm滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。7.3测定
液相色谱-质谱/质谱条件
液相色谱-质谱/质谱条件姆
a）色谱柱：kromasil100-
经），粒径5um或相当者；
C.色谱柱，150mm×2.1mm（内
b）流动相：甲醇（4.4）50m
流速：0.20mL/min
柱温：40℃；
进样量：10l.；
离子源：电喷雾离子源
扫描方式：正离子；
检测方式：多反应检测（MRI
质谱条件参见附录A。
色谱测定
各波（4.9）.梯度洗脱程序见表1：流动相梯度洗脱程序
50mmol/L乙酸胺溶液
根据试样中被测样液的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下敌百虫的参考保留时间约为：15.75min，敌百虫标准品多反应检测（MRM)色谱图参见附录B中B.1；外标法定量。7.3.3定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，如果检测的质量色谱峰保留时间与标准品一致，定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。3
SN/T0125—2010
相对离子丰度/%
允许的相对偏差/%
核空白试验
表2定性确证时相对离子丰度的最大充许偏差>50
除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8
结果计算和表述
>20~50
>10~20
用色谱数据处理机或用标准曲线按式（1）计算试样中敌百虫的残留量，计算结果需扣除空白值：X-cxVxn
mX1000
式中：
试样中敌百虫残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；.
从标准曲线上得到的待测液中敌百虫的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：稀释倍数：
最终样液所代表的试样质量，单位为克（g)。注：计算结果应扣除空白值。
9测定低限（LOQ)和回收率
测定低限（LOQ）
本方法对出口清蒸猪肉罐头、猪肉、鸡肉、牛肉、鱼肉、香肠中敌百虫残留量的测定低限均为0.002mg/kg（LOQ）：糙米玉米，洋葱、核桃中敌百虫残留量的测定低限均为0.004mg/kg（LOQ）。9.2回收率
回收率的实验数据（在不同添加浓度范围内）见表3表3本方法添加浓度及回收率范围样品名称
清蒸猪肉罐头
添加浓度
回收率范围
70.0~~86.5
71.0-107.0
81.8-~99.2
69.5~95.5
70.0--101.0
76.4~102.7
测定低限
样品名称
添加浓度
表3（续）
回收率范围
68.0~109.0
85.1~95.8
67.0-~86.0
85.7~100.0
69.0~101.5
71.0~-105.0
89.6-110.1
71.0~107.0
74.9~99.2
70.0~-87.5
70.0~~82,0
71.198. 9
70.0~96.0
71.0~95.0
72.3~87.9
71.0~~92.5
70.0-~96.0
93.4100.9
70.0~-95.0
70.0~94.0
71.6~92.6
SN/T 0125—2010
测定低限
rng/kg
SN/T0125—2010
检测离子对及电压参数：
附录A
（资料性附录）
API4000LC/MS/MS检测敌百虫色谱条件电喷雾离子源参考条件
气气（CUR）：15.00psi；
雾化气（GS1)：40.00psi；
辅助加热气（GS2)：45.00L/
碰撞气（CAD)：7.00psi；免费标准bzxz.net
离子源喷雾电压（IS)：5000.
离子源温度（TEM）：550℃；
定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见表A，1。表A.1
敌百虫
trichlorfon
Q1、Q3、去筷电压、碰撞能量、碰撞室出口电压表m
去赣电压
撞能量
碰撞室出口电压
1）非商业声明：附录A所列参考质谱条件是在API4000液相色谱质谱/质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业日的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器6
附录B
（资料性附录）
敌百虫标准品多反应检测（MRM）色谱图15.75
1.8.000.0
三4000.0-
1-57915.0
6.9617-419181078
2000.0/1.02-82.283:49
3.83,4.406.86.7.108.93
0717.2018.3
259.0/109.2
SN/T0125—2010
21.82 23.84 26.13.26.4227.9924
256.9./221.2
20.403E:58
30/main
25.68240027137.98
30/min
图B.1敌百虫标准品多反应检测
（MRM）色谱图（0.01μg/mL）
SN/T0125—2010
Foreword
ThisstandardwasdraftedaccordingtoGB/T1.1-2009Thissectionof theoriginalstandards(SN/T0125-1992)wasrevisedandconsolidatedindex,usetherange, including the original 2-related standards, using gas chromatography-mass spectrometry,increasepositiveconfirmation of content,integrationofpretreatment conditions.Please note that some of the content of this document may involvepatent. This file is not responsi-ble for the publishing sectorrecognizes the responsibility of these patents.This standard was proposed by and is under the charge of the Certification and Accreditation Admin-istration of the People's Republic of China.This standard was drafted by the Jilin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People'sRepublic of China、Tianjin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau of the People's Republic ofChina.
This main drafter of this standard is Li Aijun., Wang Mingtai,Ma Xu,Mu Jun, Lu Lijun,Ma Shumin,Zhou Xiao.
SN/T0125—2010
Determinationof trichlorfonresiduesinmeatandmeatproductsforimportandexportLC-MS/MSmethod
This standard specifies the method of testing trichlorfon residue in meat and meat products for exportbyLC-MS/MSmethod
This standard is applicable to the determination of residue content of trichlorfon in canned steamedpork,pork,chicken,beef,fish,sausage,rice(brownrice),corn,onion,walnutforexport.2 Normative references
This items of the following listed standard become the items of this standard due to the quotation bythis standard. The cited refences with date would not apply to this standard if their amendment(notincluding correctedprinting errors)or revisionappear.However,it is encouraged of studyof thene-west edition of these referces can be used. The newest edition is applicable to this standard if therefences are not quoted with date.GB/T6682WaterforlaboratoryuseSpecifications3Principle
The test sample is extracted with ethyl acetate-n-hexane(1 + 1, V/V),after being concentrated,cleaned up by sequentially passing through gel permeation chromatography(GPC),The residues is de-termined by liquid chromatography-mass spectrometry,quantified by external standard method.4Reagentsandmaterials
All the reagents used should be analytically pure unless otherwise specified.\Water\ is the firstlevelwaterdescrisedbyGB/T6682.4.1 Cyclohexane:HPLC grade.
SN/T0125—2010
Methanol:HPLC grade.
Ethyl acetate:Residuegrade.
4.4Anhydrous sodium sulfate:lgnited at 650 c for 4 h,and then stored in a tightly sealed container.4.5Ethyl acetate-n-Hexane(1+1,V/V):Volume 100 mL ethyl acetate into 250 mL erlenmeyerflask,thenadd100mLn-Hexane,mixthem.4.6
Ammonium acetate:GR.
4.750mmol/LAmmoniumacetate
Weighammoniumacetateo.385gdissolvewithwateranddi-lute to 1 000 mL.
Trichlorfonstandard:CASNo.52-68-6urity≥98%
4.9Standardstocksolution:Accurately.weighcerorfon standard and dissolve itwith Methanol tomake the standard stock solution of 100μg/mL.The solution is stored in a refriger-atorato℃～4℃.
4.10 Standard working solution:Dilute the standardconcentrationto makethestandard0℃~4℃.
Membrane filter:0.20 μm,0.
Apparatusand equipment
soluti
5.1Liquid chromatography-mass spectremetry,emassspectrometer.
Electronic balance:accurate to 0.000 1gutionwithmethanoltotherequiredtocksoll
The solution is stored in a refrigerator atuippedwith
GPC:equipped with isocratic pump and fraction collector.5.4
Homogenizer.
Rotaryvacuum evaporator.
Concentrate bottle:250 mL.
Centrifuge:3000 r/min.
ctrosprayionsourceandtriquadruple
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