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【行业标准】 番茄细菌性溃疡病菌检疫鉴定方法
本网站 发布时间:
2024-06-19 18:57:58
- SN/T2568-2010
- 现行
标准号:
SN/T 2568-2010
标准名称:
番茄细菌性溃疡病菌检疫鉴定方法
标准类别:
商检行业标准(SN)
标准状态:
现行出版语种:
简体中文下载格式:
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部分标准内容:
中化人民社和国出人境检检安行标准S5/2568..2010
崔茄细菌性遗疡病菌检疫鉴定方法Deteetion ann ilenlificatin: CXavitecter michiganenses subsp.s(theen
2010-05-28发布
质星服松城格度
净话:
数证随份
品伴网h
2010-12-01实
不保按照给的单
在标理由回家认证认可督售理案完会提出儿好。SN/T2568--2010
不标雅节单信中华人民其和国罗懿用人检验险疫府、小华人民共和国计肃山人境检验检度属、中国检验检装科学研密院中华人需其书工制出人境检验检疫局。本游主起言人,张祥林、翁、汇、将义十行补。http://foodmate.net1慈
茄细澜性遗您瑞检焙定方法
SN/T 2568--2010
本标准规是了音谢质密病菌luhncte michiganensis nubsp.michigumensis(Smith)Davis et a门的检疫鉴危法。
本标雅适们丁逊出境晕斯种了及儿产非中作而纽菊溃病肉的检斑和器定。2现染性引用这件
下刻文件对于木义伴的意是必不同少的:与是活期的引用文件,仅注口期的版本适用本义件,而是不注期的引同这述,其最新版个括所的修改单)近片于不文件,G上6682分析实验室月水舰整和验方泌SN/15381培养基制备消南第1部分:焦验客增养基制备质是保证通则3N180进山境物种了检疫愿读
3原球
密组菌性遗疡病菊的分类动位泻下反晚(irmieute)厚壁菌纲(tixruibatleri)真维菌口(Emerobacieriaceae:补形杆菌厨(Canihaeer):该病幕的生物学特性见附录A)、血湾学特性和分了牛物学特生是制定本标雄的主要依。4化器设备和用具
4.议器设备
出子天平(微本1/000?)高牢系、恒部奢差能,恒报荡培养销,高灭菌器、超净工作台、生物亚镜(H照相系统)、高速冷冻离心、M个人离心机,纯水解、恒温水浴锅、低温冰箱、的标仪、PCR仪、心源仪电泳剂、凝胶像分新仪等4.月具
培养、低管读式微视进控器(102C心L100及机成的进样器买、新体6孔孵联度应板、罐心管(1. 5L、m管(0.2 ml)筒烧杯,试剂
除另有规定外,新有试剂均为分新统或牛比就剂。实整月求应符个B6582中一数水的规格。培、鉴定画加细带性激疡病菌所门的试剂见随录3,附录心和附录D1
http
55/2568-2010
检疫鉴定方法
6.1常规生物学检测
的1阳间调查及植株检谛
帮京细生溃瘤宝年川叫所衣现花达茶A,山间调时来集用叫症状的植株或果实带四实验家用清水冲洗十净原下居天茶的学儿在病健交界处小决病变维织,愁浮广少显儿菌水中,用带玻裤济压然后出卤环酸度司点液::用3增齐基平划线分,28湖增然72h香康细菌竺溃摘病南在522培养其!库养3叫兆度装尚光滑,精销牧淡黄色杀黄色的圆形岗落。根据脊而纸菌性溃病阅的菊落特迷取可凝当落做选一步鉴定。也可用发病来实或基杆作I.13A成TCR检测实验。
6.1.2种字检验
随机妆30只(1C000看新:千为分样少于30g的添鼎种样品则个部拍最H体抽样要求见N/T1809的家,15y!.预冷书0.05m01II?2的磷酸吐温级冲液(P13T)。拼与使种,完全湿润,在雀湿真空案件下浮行0mn0m.峻慢快复常压:或在4℃下磁力揽举器上搅24h-8上取5m.栏品拍提度,1200g寄心15in教缩充上消液,流币0.01n01/p7.2酬暖缓流液()新恭浮,润成伴品愿浮液,终体积为2行将其均分为两份,中1份假分离培养检验另1份证10%口汕保行.以作:IISA或PCR格测实验在您个KB培窄质成FLP将其平板上各划?件思液,用灾菌玻率棒涂布,绿个样品至少要用2个平血。个是外的平接神到准源红菌性淡病病商得到配性对照菌落。磨养1后开始出螺承相纠菌性溃瘤病带肉落:在K普花基茵路圆形、降起、深灰白色、达缘黄军晓珀色在下P络为淡黄色、6正检查平并率墅菌落转稳刘普通培养基(如:VA培养传上进和纯化、培养:未其加纤莲性瘤情菊案森个送长性培养基「牛长教慢,为广使这些荫落充分表现,成将原始单业再绝续培养3d以1用双抗体火小将装免疫吸阴法支TCR法作进步鉴定。[述儿种培养基的配方呢附隶。
6.2数抗体心酶联免疫吸阴法检测见附录(
6.3PC段法检测
见附录1].
7鉴定特征
7.1常规生蜘学检测
灿细菌性遗密菌2音养形成黄单、烈形热的北液、边缘整齐、粘稠状的南路,准K3培养基「菌落圆形、隆起、深白位惠缘经原车鱼车飞「菌落为就黄负,孩特征川作为现生物学鉴宠指标。根据上述菌游学征法报可影带将做进一儿鉴定7. 2DA&-F3ISA检测
尚待检单品孔求性详孔存额色点成,用准对照引礼牢对照托无额色反应,且酶标仪检测谢性2
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TTETTET
/T 25682010
对的的则定来而悠请(性照低
燕大之则格剩绪密为小,测龄测绝暴州为队接2.3PC称测
观察产物的电漾续果附,若供试释品事刘照在然处有条带出现,期对照穿白对照无条骨出现,即可判霆俱武释品为降性供试释中偿带器茄细菌性溃疡病菊:背则为性缩累判雉
在学燃生物学方法测户,如果用问观察的型症状的病探,从该疾探中分离培养刻的细菌菊探在选摩性产教基「前莉路装证摘述得,叫以为捡出脊斯御菌非激菌,划从萨班独「中分离济蒸到的细菌菌迷在选择性培着是的尚落特征与播述相符,吐以初判完为检出而组菊性溃疡病渐,并需要进行E1A或法冷测不分离培养到细菊萨率特衔与隔然符,A按测为性,川以判是为检出评而细菊性溉病病荫,
渠芬离培养刻组谢萨潜特征与销述和符:法验测结果为闯性。增产物的片断太小与掘淡码欲。可以坡终判为橙出卵前性巅葡。9释最保荐
保存性品经签记和经子人额字泌害保心。对检川寄油细菌料激疡病菌的择品成保存主4冰箱中。以备复核·该炎品保膏满所而经灭萨而处理。11菌株保有
从检测样品中分离到计学定为咨而细阅忙微窈病菌的菌袜·应妥首供荐。将谢梯接」23培养料前1,们况赔养48,然后整了4冰简中保存用真空冷冻爆机制成冻十欲。0下长划架存:
1聚记学氧密料保
实验闻录成包拓:样品来源、种类,过间:检测的油间、油点方法和结果等:并要有龄测人员、中核人贫的舒宁。物崇测定需要个率的疗状照,降养岗落顺片等隔联免接测定发有醇极反应的照!和原始数游P限检测需聚有电泳结染照升「带资料应叮消并要落保行。2影核
感时由专家对检测结巢进行点核CY
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SN/T 2568--2010
A、1英文名称
附景A
资料性录)
叠茄细衡性溃病病菌桥苯凝料
Baurirrial CankeraeWili cf ons!A.2学营
Gurbcter nithiraenss ptlsp. nrhraanesistSmithievis et alA.3分布地区
口木印度、供朗、以自列,裂比激、:环儿、义业,中国、澳太利亚新芯兰、汤而、奥驰利,比利时、保利亚、白俄罗原、假思斯、芬兰法回,德国器肝仅牙利爱尔兰、意人利,谢宛荷、挪威、波兰、箭萄牙、程马尼业四班班瑞土堂闽克兰,然及、岸记业、的送川斯加摩格亚、州、多用突尼斯,乌十达、赞比亚、津巴市、则拿大墨臣亚、美、伯利滋、品斯达班、占多米尼圳、凹拿马、阿根延、西、智和、哥伦比亚、泌。A,4寄非范围
该病带白然侵梁内寄主有:英,花恶、製以筋:人接种可侵熟树泽加心叶烟、乳茄、铃警小爱,大友、黑友、燕变、间口蔡、凹瓜、黄,辣茄子,驻桑等A.5
病害症状
军帖细菌性溃疡病是一种管茂紧统病思,病探从幼出到产果斯都啡发生妻利死亡,大川定植活造成缺株断。在温空条件小,最神宝类龙去现:可滋性蒸薏,在叫腺之间产生凹色杀色的环死斑点,最后表现串永久性萎熊。致代繁举处,川间晟布症状为低位叶片小叶的边缘出现卷缩、下垂、谢萎,微缺水状病原菌未运的部位其技计十上带:株档蒙很慢,般不表现出菱莺。有时植株侧戒部分小川出现套落:而其余各处长正管辆情继续发展,脉利叶柄上出现小点在鉴和叶柄上旧鼎褐包案低,下陷:向上可设并無尝茶牛英创红裙色的腔,牛溃疡状,病原菌道过维管束染见实·出可侵染胎座秤果肉:幼果发摘被结、满會、崎形,病朱内的种了小黑色,不成熟让学大小的灵实感病后外观正常·催尔石少数于变点或有黑包色小点。其发來率仍然很高。在累风雨多的地区成费灌条件下某实“往往出兰阅小点·书展后变为祛色,中心糕髓咯微突超,直轻约3m左右,点边缘围统普白负是景潮卓典图“岛退妆“许多小斑点可联合成不规测的斑块们仍存白他的紧降
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A病原菌形态特征、生理生化特性培养性积SK/T 2568-2010
番茄细荣性溃疡病菌为如气细菌。兰氏色阳件:元飞,无茅跑,有英颗,样杆形。菌体大小为(.3um~3.2m)文(3.5am~:.2a2n)。能划用制糖.照拥、应伯销、[茂据、友芽糖、甘注、求酸、矿檬酸、延胡羧酸、苹果酸,不能和用报牵灌棉打糖、乳榔、木糖、卡醇、山梨醇、车酸、钢石酸、内酸、半乳点酸等,硝酸盐还原闻性原能配快::剪腔液化微:可水解七叶节,水解滋粉能方羽,牛长需要氮基骏、生物素烟酸和硫按索。最适生区流原2丫27在523培养基28℃培养。7%1厅山现能、表而光滑、达缘整齐游调状的菌落A.7传韬途径
该病原菌的远距离传循十要靠学芭和子,乐种子内外尽帮叫带菌。在山间和温室该病闲主要通过滴测水、南水、修枝前、培养等传燃,+厂、一和白然孔侵入寄主红织:该病菌在土和病残本组织中存活2有~3个
伴网httn
SN/T 2568-2010
器细菌性淤疡病::本常酷葬基续冲液配方5?3培养7.2)
蔡蛋陈或峰蛋水物
酵博亭
微懿氢一钾(:ITP
硫酸镁(MgS0,7.0)
熊馏求
,2培养(p.2)
酸镁(MpSOH,O)
磷氢钾(KHPO)
蒸谣水
j oo:: m!
高火菌冷部题用人3落实酸(!/灌解下01mNaOH)2 nl放线菌酮(20 mg/rL.溶解干2醇.0.95 ml.白离浩(1:37 水液),1 mI、业筛酸抑(1水溶液)。
培养熹(7.2)
硫酸美磷酸室“師蒸簡水
高乐灭菌后,羚却至用人皇搬喷需多纳(拍,落解丁0m/0川中)?m放线菌测(2g密察寸)),百苗清(:水液)1m多粘盛素(40mgm溶解」菌水中)
http:
4落养(m117.2)
牛肉浸膏
蒸镭水
T t?u jm!
许:该所方心大加筑则为A凝法增释基。、避酸-激缓冲游(T:.2)
俊的a.HP
磷酸二氢钾(KHPO
蒸馏水
2c高压炎菌mm冷年Y用人2m.单独大菌的证湿20酸冲滋(
誉酸二御(xHP0)
楼酸氢二钠(aHP)
蒸馏水
121 痛浆肉 min:
注:备种培养获颜许药操作转本费求据N1的规定熟格htt
$/8 2568:-2010
SN/T 2568—2010
1试剂
1.1包被抗体
斯清性渐暴:
双抗体来心酶联免意法检测番茄细菌性遗癌病菌(C.m.M)等异性的斯溃赖病整抗依。
1.2酶标抗体
碱性脂标记的番剂场病萄广洋
。1.310 ×P 缓冲液
将氯化(KC)2g.氯化钟NaC1)8、饼酸卵(KP.)3,磷酸氢二钠(NHPO121O11.吐湖-206Tw-2m用浓起格11CH至.2,蒸留水定溶率114下储存。
C1.4棒品抽提缓冲液
将亚硫酸钠(N380)1.3、聚2.燃其北电浣调MW?=00~40C0.PVP)208登氮钠(NaN)0.泥202020m单浓腋(C谢书7.44℃下筱存。
1.5包被缓冲滴
将凝酸钠CNa,C31.5g碳龄气销NaH0,12.93起、叠氮钠(VaN0.2,率解了00C mL蒸馏水中.浓盐酸(H调保在
.1.6洗涤缓冲液
将1XPBST级冲液用装盐股(I1)调卡!至,4“下倍存。C,1.7酶标抗体缓冲液
将1×PBST线冲液800 m,小一首广((%A)2然、紧(烯蒸吡咯烷(MW24G0~-4000。PVP)20R、叠氮纳(NnN。.2:心荣蒸馅水定器不0)mI.4下储存C.1.8底物PNPP)缓冲液
将二胺7降氮能NA离能+1点循水川泌盐酸(IIC询H至9.8.1℃下储存。
.1.底物(FNPH)溶液
将4-销基断磷俊钢整(N落解N旅物级冲液109m中现配现用5
htti
C.1.10热止反应液
将象系化锅(Na(11)43落解+:(:n0ml.热调水中2检测方法
2.1包被抗体
S$/T 2568--2010
月包被缓冲液将抗体按器明稀释加人菌以报机中,0乱加盖,37孵竹2,清空孔中溶,Psr洗涤4得次3rin.
.2.2梓品制谐
将铸测群品鞍t.质吊本假加人摄级冲液用价体研率成浆500im离心mim.清游即件为检测详品:别件,说性对照作者做陷处童孩照点剂盘说所书还6:2.3加样
将制备好的检测样品和性、图性对照样品依饮期人障标板的孔中,130L/孔,加盖,1冰箱期宵过夜IsT洗4次,每次3 min,
.2.4加酶标抗你
醇标抗休稀释级冲液按说训将确你益本帮释益「作浓度,加人至酶标板的孔,.0C/,邮盖37℃孵2h或4冰箱过仪)治空孔中济液,P洗谈1次,次3min。心2.5加底物
每孔200现正的底物辫液,据谢光膏1h。C.2.6观察检测结果
肉观察测新商标板额免反应果,并H商运仪检测各祥品习和对照孔在八:m处的收光值()。
http
SN/T 256B---2010
试剂制备
规到录
臀茄织显性激病病菌及”的顾检测方法1.1A电泳缀冲液(8.5)配
NA.EDEA :2H,0
冰艺险
燕僧水定游至
57. 1 ml.
灭菌户常温保存:利稀释60倍wwW.bzxz.Net
1.10%电球上样缓冲滤(5版8、5)配方2%(质量浓度0M00
1.0(质导浓度)31)5
0. 1 mol/L, Na:ELTA(pH. 0)
0.25(质量浓度)模龄蓝
细菌A模板的制备
无菌樂作下,挑敢待测菌的单菌落下度休培卷基,2r/m塔培h取1ml,消影液,100cr/mir肉心5min,充七清液,新淀所灭菌效燕小配成1×19CFI/ml.阅悬液·作为PCR预概。
P.定性pC激检测
检测滑菌淡滋病菌采用的PR扩增引物字死为:CaFI.S-CArGGTC AAT TCT CTr r 3'CaR?:5TACTGAGATGITTCATTTLCC-3PR反成体系为:t大FCR缓冲tM)l2inmol/微化镁(Mg)1.5!.2. nrrl/1 dNTPs C 25 r, C/LT NA 第个 0, ud.10 umol/L 引物奔 1 ul,菌品液1.燕水17,反成运蔡总林积为1
PCR折增条42r:94 / mn: 9 0 :52 T/45 s:72 C/33 s.30 cyeles;7? 1/5 minx
在进行R检测时成设性对照性效照和准门对照客学个用TAE电缓冲效制备1.瑞的欧脂糖潮踪,安比例混约电禄上样缓冲液和P浪扩增产物,将混有上祥级冲报的R扩增产物人样品中,人M做分了品标范。送行电泳分新,电泳结乘后在整胶成像分析仪下兆实是否扩增山须期的特量性1NA电泳带,拍摄开记录实验结果,0
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崔茄细菌性遗疡病菌检疫鉴定方法Deteetion ann ilenlificatin: CXavitecter michiganenses subsp.s(theen
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本标准规是了音谢质密病菌luhncte michiganensis nubsp.michigumensis(Smith)Davis et a门的检疫鉴危法。
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下刻文件对于木义伴的意是必不同少的:与是活期的引用文件,仅注口期的版本适用本义件,而是不注期的引同这述,其最新版个括所的修改单)近片于不文件,G上6682分析实验室月水舰整和验方泌SN/15381培养基制备消南第1部分:焦验客增养基制备质是保证通则3N180进山境物种了检疫愿读
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密组菌性遗疡病菊的分类动位泻下反晚(irmieute)厚壁菌纲(tixruibatleri)真维菌口(Emerobacieriaceae:补形杆菌厨(Canihaeer):该病幕的生物学特性见附录A)、血湾学特性和分了牛物学特生是制定本标雄的主要依。4化器设备和用具
4.议器设备
出子天平(微本1/000?)高牢系、恒部奢差能,恒报荡培养销,高灭菌器、超净工作台、生物亚镜(H照相系统)、高速冷冻离心、M个人离心机,纯水解、恒温水浴锅、低温冰箱、的标仪、PCR仪、心源仪电泳剂、凝胶像分新仪等4.月具
培养、低管读式微视进控器(102C心L100及机成的进样器买、新体6孔孵联度应板、罐心管(1. 5L、m管(0.2 ml)筒烧杯,试剂
除另有规定外,新有试剂均为分新统或牛比就剂。实整月求应符个B6582中一数水的规格。培、鉴定画加细带性激疡病菌所门的试剂见随录3,附录心和附录D1
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55/2568-2010
检疫鉴定方法
6.1常规生物学检测
的1阳间调查及植株检谛
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6.1.2种字检验
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6.2数抗体心酶联免疫吸阴法检测见附录(
6.3PC段法检测
见附录1].
7鉴定特征
7.1常规生蜘学检测
灿细菌性遗密菌2音养形成黄单、烈形热的北液、边缘整齐、粘稠状的南路,准K3培养基「菌落圆形、隆起、深白位惠缘经原车鱼车飞「菌落为就黄负,孩特征川作为现生物学鉴宠指标。根据上述菌游学征法报可影带将做进一儿鉴定7. 2DA&-F3ISA检测
尚待检单品孔求性详孔存额色点成,用准对照引礼牢对照托无额色反应,且酶标仪检测谢性2
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/T 25682010
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1聚记学氧密料保
实验闻录成包拓:样品来源、种类,过间:检测的油间、油点方法和结果等:并要有龄测人员、中核人贫的舒宁。物崇测定需要个率的疗状照,降养岗落顺片等隔联免接测定发有醇极反应的照!和原始数游P限检测需聚有电泳结染照升「带资料应叮消并要落保行。2影核
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A、1英文名称
附景A
资料性录)
叠茄细衡性溃病病菌桥苯凝料
Baurirrial CankeraeWili cf ons!A.2学营
Gurbcter nithiraenss ptlsp. nrhraanesistSmithievis et alA.3分布地区
口木印度、供朗、以自列,裂比激、:环儿、义业,中国、澳太利亚新芯兰、汤而、奥驰利,比利时、保利亚、白俄罗原、假思斯、芬兰法回,德国器肝仅牙利爱尔兰、意人利,谢宛荷、挪威、波兰、箭萄牙、程马尼业四班班瑞土堂闽克兰,然及、岸记业、的送川斯加摩格亚、州、多用突尼斯,乌十达、赞比亚、津巴市、则拿大墨臣亚、美、伯利滋、品斯达班、占多米尼圳、凹拿马、阿根延、西、智和、哥伦比亚、泌。A,4寄非范围
该病带白然侵梁内寄主有:英,花恶、製以筋:人接种可侵熟树泽加心叶烟、乳茄、铃警小爱,大友、黑友、燕变、间口蔡、凹瓜、黄,辣茄子,驻桑等A.5
病害症状
军帖细菌性溃疡病是一种管茂紧统病思,病探从幼出到产果斯都啡发生妻利死亡,大川定植活造成缺株断。在温空条件小,最神宝类龙去现:可滋性蒸薏,在叫腺之间产生凹色杀色的环死斑点,最后表现串永久性萎熊。致代繁举处,川间晟布症状为低位叶片小叶的边缘出现卷缩、下垂、谢萎,微缺水状病原菌未运的部位其技计十上带:株档蒙很慢,般不表现出菱莺。有时植株侧戒部分小川出现套落:而其余各处长正管辆情继续发展,脉利叶柄上出现小点在鉴和叶柄上旧鼎褐包案低,下陷:向上可设并無尝茶牛英创红裙色的腔,牛溃疡状,病原菌道过维管束染见实·出可侵染胎座秤果肉:幼果发摘被结、满會、崎形,病朱内的种了小黑色,不成熟让学大小的灵实感病后外观正常·催尔石少数于变点或有黑包色小点。其发來率仍然很高。在累风雨多的地区成费灌条件下某实“往往出兰阅小点·书展后变为祛色,中心糕髓咯微突超,直轻约3m左右,点边缘围统普白负是景潮卓典图“岛退妆“许多小斑点可联合成不规测的斑块们仍存白他的紧降
品伙伴网ht
A病原菌形态特征、生理生化特性培养性积SK/T 2568-2010
番茄细荣性溃疡病菌为如气细菌。兰氏色阳件:元飞,无茅跑,有英颗,样杆形。菌体大小为(.3um~3.2m)文(3.5am~:.2a2n)。能划用制糖.照拥、应伯销、[茂据、友芽糖、甘注、求酸、矿檬酸、延胡羧酸、苹果酸,不能和用报牵灌棉打糖、乳榔、木糖、卡醇、山梨醇、车酸、钢石酸、内酸、半乳点酸等,硝酸盐还原闻性原能配快::剪腔液化微:可水解七叶节,水解滋粉能方羽,牛长需要氮基骏、生物素烟酸和硫按索。最适生区流原2丫27在523培养基28℃培养。7%1厅山现能、表而光滑、达缘整齐游调状的菌落A.7传韬途径
该病原菌的远距离传循十要靠学芭和子,乐种子内外尽帮叫带菌。在山间和温室该病闲主要通过滴测水、南水、修枝前、培养等传燃,+厂、一和白然孔侵入寄主红织:该病菌在土和病残本组织中存活2有~3个
伴网httn
SN/T 2568-2010
器细菌性淤疡病::本常酷葬基续冲液配方5?3培养7.2)
蔡蛋陈或峰蛋水物
酵博亭
微懿氢一钾(:ITP
硫酸镁(MgS0,7.0)
熊馏求
,2培养(p.2)
酸镁(MpSOH,O)
磷氢钾(KHPO)
蒸谣水
j oo:: m!
高火菌冷部题用人3落实酸(!/灌解下01mNaOH)2 nl放线菌酮(20 mg/rL.溶解干2醇.0.95 ml.白离浩(1:37 水液),1 mI、业筛酸抑(1水溶液)。
培养熹(7.2)
硫酸美
高乐灭菌后,羚却至用人皇搬喷需多纳(拍,落解丁0m/0川中)?m放线菌测(2g密察寸)),百苗清(:水液)1m多粘盛素(40mgm溶解」菌水中)
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4落养(m117.2)
牛肉浸膏
蒸镭水
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许:该所方心大加筑则为A凝法增释基。、避酸-激缓冲游(T:.2)
俊的a.HP
磷酸二氢钾(KHPO
蒸馏水
2c高压炎菌mm冷年Y用人2m.单独大菌的证湿20酸冲滋(
誉酸二御(xHP0)
楼酸氢二钠(aHP)
蒸馏水
121 痛浆肉 min:
注:备种培养获颜许药操作转本费求据N1的规定熟格htt
$/8 2568:-2010
SN/T 2568—2010
1试剂
1.1包被抗体
斯清性渐暴:
双抗体来心酶联免意法检测番茄细菌性遗癌病菌(C.m.M)等异性的斯溃赖病整抗依。
1.2酶标抗体
碱性脂标记的番剂场病萄广洋
。1.310 ×P 缓冲液
将氯化(KC)2g.氯化钟NaC1)8、饼酸卵(KP.)3,磷酸氢二钠(NHPO121O11.吐湖-206Tw-2m用浓起格11CH至.2,蒸留水定溶率114下储存。
C1.4棒品抽提缓冲液
将亚硫酸钠(N380)1.3、聚2.燃其北电浣调MW?=00~40C0.PVP)208登氮钠(NaN)0.泥202020m单浓腋(C谢书7.44℃下筱存。
1.5包被缓冲滴
将凝酸钠CNa,C31.5g碳龄气销NaH0,12.93起、叠氮钠(VaN0.2,率解了00C mL蒸馏水中.浓盐酸(H调保在
.1.6洗涤缓冲液
将1XPBST级冲液用装盐股(I1)调卡!至,4“下倍存。C,1.7酶标抗体缓冲液
将1×PBST线冲液800 m,小一首广((%A)2然、紧(烯蒸吡咯烷(MW24G0~-4000。PVP)20R、叠氮纳(NnN。.2:心荣蒸馅水定器不0)mI.4下储存C.1.8底物PNPP)缓冲液
将二胺7降氮能NA离能+1点循水川泌盐酸(IIC询H至9.8.1℃下储存。
.1.底物(FNPH)溶液
将4-销基断磷俊钢整(N落解N旅物级冲液109m中现配现用5
htti
C.1.10热止反应液
将象系化锅(Na(11)43落解+:(:n0ml.热调水中2检测方法
2.1包被抗体
S$/T 2568--2010
月包被缓冲液将抗体按器明稀释加人菌以报机中,0乱加盖,37孵竹2,清空孔中溶,Psr洗涤4得次3rin.
.2.2梓品制谐
将铸测群品鞍t.质吊本假加人摄级冲液用价体研率成浆500im离心mim.清游即件为检测详品:别件,说性对照作者做陷处童孩照点剂盘说所书还6:2.3加样
将制备好的检测样品和性、图性对照样品依饮期人障标板的孔中,130L/孔,加盖,1冰箱期宵过夜IsT洗4次,每次3 min,
.2.4加酶标抗你
醇标抗休稀释级冲液按说训将确你益本帮释益「作浓度,加人至酶标板的孔,.0C/,邮盖37℃孵2h或4冰箱过仪)治空孔中济液,P洗谈1次,次3min。心2.5加底物
每孔200现正的底物辫液,据谢光膏1h。C.2.6观察检测结果
肉观察测新商标板额免反应果,并H商运仪检测各祥品习和对照孔在八:m处的收光值()。
http
SN/T 256B---2010
试剂制备
规到录
臀茄织显性激病病菌及”的顾检测方法1.1A电泳缀冲液(8.5)配
NA.EDEA :2H,0
冰艺险
燕僧水定游至
57. 1 ml.
灭菌户常温保存:利稀释60倍wwW.bzxz.Net
1.10%电球上样缓冲滤(5版8、5)配方2%(质量浓度0M00
1.0(质导浓度)31)5
0. 1 mol/L, Na:ELTA(pH. 0)
0.25(质量浓度)模龄蓝
细菌A模板的制备
无菌樂作下,挑敢待测菌的单菌落下度休培卷基,2r/m塔培h取1ml,消影液,100cr/mir肉心5min,充七清液,新淀所灭菌效燕小配成1×19CFI/ml.阅悬液·作为PCR预概。
P.定性pC激检测
检测滑菌淡滋病菌采用的PR扩增引物字死为:CaFI.S-CArGGTC AAT TCT CTr r 3'CaR?:5TACTGAGATGITTCATTTLCC-3PR反成体系为:t大FCR缓冲tM)l2inmol/微化镁(Mg)1.5!.2. nrrl/1 dNTPs C 25 r, C/LT NA 第个 0, ud.10 umol/L 引物奔 1 ul,菌品液1.燕水17,反成运蔡总林积为1
PCR折增条42r:94 / mn: 9 0 :52 T/45 s:72 C/33 s.30 cyeles;7? 1/5 minx
在进行R检测时成设性对照性效照和准门对照客学个用TAE电缓冲效制备1.瑞的欧脂糖潮踪,安比例混约电禄上样缓冲液和P浪扩增产物,将混有上祥级冲报的R扩增产物人样品中,人M做分了品标范。送行电泳分新,电泳结乘后在整胶成像分析仪下兆实是否扩增山须期的特量性1NA电泳带,拍摄开记录实验结果,0
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